MICROBIOLOGIA SANITARIA I

LAB N2-USO DEL MICROSCOPIO- COLORACION

DE BACTERIAS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE
INGENIERA
FACULTAD
INGENIERA

DE
AMBIENTAL

LABORATORIO N 2:
USO DEL MICROSCOPIO COLORACION DE BACTERIA
CURSO:
MICROBIOLOGA SANITARIA I
PROFESOR:
ING. JORGE GILBERTO TELLO CEBREROS
ALUMNO:
LUIS AARON CABELLO CANDELA

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DE BACTERIAS

2015
1) OBJETIVOS
Conocer y aprender a utilizar el microscopio compuesto
Saber de los cuidados que se debe tener al manejar el
microscopio
Interpretar el fundamento de las coloraciones en la prctica
microbiolgica.
Identificar el tipo de bacterias mediante el mtodo de tincin de
Gram
Describir las caractersticas de las diferentes formas observadas

2) FUNDAMENTO TERICO
MICROSCOPIO
Los microbilogos utilizan diversos microscopios pticos en su trabajo; de
campo claro, de campo oscuro, de contraste
de fases y de fluorescencia son los tipos de
microscopios ms empleados.
Es un instrumento que permite observar
objetos que son demasiado pequeos para
ser vistos a simple vista. El tipo ms comn
y el primero que se invent es el
microscopio ptico. Se trata de un
instrumento ptico que contiene dos o ms
lentes que permiten obtener una imagen
aumentada del objeto y que funciona por
refraccin. La ciencia que investiga los
objetos
pequeos
utilizando
este
instrumento se llama microscopa.
Los microscopios pertenecen a dos clases, el de luz (ptico) y el electrnico,
segn el principio en que se base la amplificacin. El microscopio mediante el
cual la amplificacin se obtiene por un sistema de lentes pticos (microscopios
de luz) abarca los siguientes tipos:
Microscopio de campo claro o luminoso.
Microscopio de campo oscuro o ultramicroscopio.

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Microscopio de luz ultravioleta.
Microscopio de fluorescencia.
Microscopio de contraste de fases.
El microscopio electrnico, como su nombre lo indica, se basa en un haz de
electrones en lugar de ondas luminosas para obtener la imagen en lugar de
ondas luminosas para obtener la imagen amplificada.
Los estudiantes hacen casi la totalidad de sus exmenes, acaso todos, con el
microscopio de campo luminoso, el instrumento de uso ms comn para el
trabajo diario. Los otros tipos de microscopia se usan para propsitos
especiales o trabajos de investigacin. Sin embargo, los

estudiantes conocen sus aplicaciones porque cada uno tiene propiedades

convenientes para demostrar estructuras morfolgicas especficas.
MICROSCOPIO PTICO COMPUESTO
Un microscopio ptico es un instrumento que consiste bsicamente en un tubo
con lentes de aumento en ambos extremos.
El objeto a observar es atravesado con luz visible, que es refractada por las
lentes del microscopio y as se amplifica la imagen.
Permite visualizar estructuras pequeas, cuyas dimensiones son inferiores al
lmite del poder de resolucin del ojo humano.
Un microscopio ptico tiene dos caractersticas fundamentales:
1.
2.
a.
b.

la
el
la
la

amplificacin (aumento)
poder de resolucin, que a su vez depende de:
calidad de las lentes
longitud de onda de la luz que ilumina

Poder de resolucin es la capacidad de separar dos puntos muy prximos y dar

de ellos imgenes claras y definidas. El del ojo humano es de 100m y el de un
microscopio ptico es de 0.24m.
En los microscopios pticos el material biolgico a examinar se observa por
transparencia, significa que la luz debe atravesar los tejidos para formar
imgenes. La consecuencia de esto es que se hace necesario estudiar:
- clulas aplanadas sobre la superficie de un vidrio o, - finos cortes de tejidos
suficientemente delgados como para ser atravesados por radiacin luminosa.

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La gran mayora de los componentes celulares no tienen color debido al gran
contenido de agua. Esto plantea la necesidad del uso de colorantes selectivos,
los cuales presentan a la vez la dificultad de matar a las clulas, ya que
previamente los tejidos deben ser fijados, deshidratados, incluidos en un
material endurecible y cortados.
Un microscopio ptico consta de una parte mecnica, una parte ptica y un
sistema de iluminacin:

1) PARTES MECANICA DEL MICROSCOPIO

OCULAR:
Lente
situada
cerca del ojo del observador.
Ampla
la
imagen
del
objetivo.
TUBO PTICO se puede
acercar o alejar de la
preparacin mediante un
TORNILLO MACROMTRICO
o de grandes movimientos
que sirve para realizar un
primer enfoque.
REVLVER: Contiene los
sistemas
de
lentes
objetivos. Permite, al girar,
cambiar los objetivos. La
esfera se suele llamar
CABEZAL Y contiene los
sistemas de lentes oculares
(monoculares o binoculares
(2 lentes)).
BRAZO: Es una pieza metlica de forma curvada que puede girar;
sostiene por su extremo superior al Tubo ptico y en el inferior lleva
varias piezas importantes.
PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin.
OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de
sta.
PINZAS DE SUJECION: Parte mecnica que sirve para sujetar la
preparacin. La mayora de los microscopios modernos tienen las pinzas
adosadas a un carro con dos tornillos, que permiten un avance
longitudinal y transversal de la preparacin.
CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la
preparacin. El condensador de la parte de abajo tambin se llama FOCO
y es el que dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

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TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y
micromtrico que consigue el enfoque correcto.
BASE: Sujecin de todo el microscopio.

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2) Parte ptica:
Consta de las lentes oculares, los objetivos y el condensador.
- Objetivos:
Cada objetivo consiste en un conjunto de lentes que en realidad cumplen la
funcin de una sola. Este sistema sirve para corregir errores de observacin
que derivaran del uso de una sola lente.
En los microscopios modernos es comn que los objetivos sean parafocales, es
decir, que si se encuentra enfocado uno de ellos, al girar el revlver y cambiar
por otro objetivo, ste resulta prcticamente enfocado, siendo suficiente slo
una ligera correccin con el micromtrico para lograr el enfoque perfecto.
En cada objetivo se pueden observar una serie de numeraciones grabadas que
indican:

a. Aumento
b. Abertura numrica
c. Espesor del cubreobjetos a
utilizar, en mm.

a. Aumento: puede ser variable (4X, 16X, 20X, 25X, 40X, 45X, 60X, 95X, 100X,
estos dos ltimos se utilizan como objetivos de inmersin). Respecto del
aumento hay que diferenciar:
1) Aumento primario: es el dado por el objetivo en s.
2) Aumento total: es el que se obtiene multiplicando el aumento del ocular
por el del objetivo. Nos dice cuntas veces est amplificada la imagen que
obtenemos del material examinado.
3) Aumento til: es el aumento total del microscopio cuando no excede de
cierta cantidad condicionada por la abertura numrica del objetivo. Significa
que si el aumento total supera el aumento til la imagen obtenida es muy

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grande, pero borrosa, sin definicin. En los objetivos de tipo acromtico el
mayor aumento til posible es de mil veces la abertura numrica (A.N. *
1.000), mientras que en los objetivos ms perfeccionados, como los
apocromticos o los de fluorita, el lmite de aumento til es de 1. 500 veces
la abertura numrica (A.N. * 1.500).
b. Abertura Numrica (AN): cada objetivo tiene un determinado poder de
resolucin que se mide en trminos de abertura numrica del objetivo. Cuando
un objeto es iluminado, la luz emerge de l formando un cono que penetra en
la lente frontal de un objetivo. Se lo denomina ngulo de abertura; y a la mitad
de este ngulo de abertura se lo llama ngulo x. El medio en el que el objetivo
trabaja (aire, aceite o agua) tiene un ndice de refraccin determinado al que

designamos como N. La abertura numrica se determina entonces del

siguiente modo:

La abertura numrica determina las siguientes caractersticas pticas:

1. Resolucin: es la capacidad que posee un objetivo para separar dos
puntos muy prximos entre s.

Poder de resolucion=

longitud de onda de laluz ()

AN objeto+ AN condensador

2. Lmite de resolucin: es la mnima distancia en que dos puntos prximos

se ven como separados.
Por lo tanto: a menor lmite de resolucin, mayor poder resolutivo
El lmite de resolucin se calcula del siguiente modo:

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0.61 = constante
= longitud de onda de la luz incidente
A.N. = abertura numrica
Si se pretende poder observar estructuras muy pequeas se requiere el menor
lmite de resolucin posible. Deduciendo de la frmula esto se consigue a
mayor abertura numrica y a menor longitud de onda de la luz incidente.

- Oculares:
Es un sistema de lentes que aumenta la imagen producida en el objetivo,
aumento que est grabado en la parte superior (4X, 5X, 6X, 8X, 10X, 15X y
20X, siendo los ms comnmente usados los de 6X y 10X).
- Condensador:
Es el tercer elemento de la parte ptica, constituido por una lente que
concentra los rayos de luz iluminando la preparacin en la parte enfocada por
el objetivo, de modo que el campo visual presente una iluminacin uniforme.
Adems proporciona al objetivo un cono de luz adecuado en tamao y
naturaleza, para obtener ptimos resultados en la observacin.
El condensador presenta hacia uno o ambos lados un tornillo para subirlo o
bajarlo segn las necesidades. Adems presenta un diafragma semejante al de
una cmara fotogrfica que deja penetrar slo los rayos tiles y elimina los
laterales que generalmente molestan.
Antes de enfocar, el diafragma debe estar completamente abierto,
gradundose a continuacin su abertura segn los aumentos del objetivo. Con
altos aumentos el diafragma debe estar ms abierto que con los bajos
aumentos.

3) Sistema de iluminacin:
Los microscopios ms antiguos presentan como sistema de iluminacin un
espejo con una cara plana y la otra cncava. Este espejo recibe los rayos
luminosos de una fuente natural o artificial y los enva hacia la parte ptica.
Siempre que se use el condensador, el espejo debe enfocarse en su cara plana
ya que la cara cncava acenta demasiado la convergencia de los rayos, cosa
que ya cumple el condensador.

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Actualmente los microscopios presentan un sistema de iluminacin
incorporada con una bombilla de bajo voltaje y de intensidad regulable con un
transformador.

Tipos de observacin:
Segn la forma de iluminacin una observacin con un sistema ptico de
aumento puede ser:
a. Por reflexin: se realiza cuando la iluminacin se hace desde arriba del
objeto.
Se utilizan pocos aumentos y el microscopio con el que se efecta se denomina
estereoscpico o lupa.
b. Por refraccin o transparencia: se realizan con luz transmitida desde abajo.
Para ello los objetos a ver deben ser lo suficientemente transparentes. Este es
el caso del microscopio ptico.
Por otro lado, una observacin tambin puede ser seca o por inmersin:
Observacin seca: se realiza sin colocar lquido alguno entre el cubreobjetos
del preparado y el objetivo.
Observacin por inmersin: en ella se coloca entre el cubreobjetos y el objetivo
una gota de aceite de inmersin (con ndice de refraccin de 1.5, que es el del
vidrio) que mejora la imagen por aumento de la abertura numrica. De este
modo, todos los medios atravesados por la luz tienen un mismo ndice de
refraccin. La imagen obtenida es ms luminosa y ms clara. Para hacer
inmersin se utiliza el objetivo de mayor aumento (95X o 100X).

Tcnica de la inmersin:
Consiste en colocar una gota de aceite de inmersin entre el cubreobjetos y la
lente frontal del objetivo de mximo aumento. Para ello, teniendo ya enfocado
el objeto en un aumento menor, se gira levemente el revlver, se coloca una
pequea gota de aceite sobre el cubreobjetos, luego se sigue girando hasta
enfocar el objetivo de mayor aumento y se procede al ajuste con tornillo
micromtrico.
Terminada la observacin se eleva el tubo o se baja la platina y se limpia el
objetivo con papel de seda o gnero suave que puede estar humedecido en un
detergente especial para lentes.

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Nunca debe utilizarse para limpiar la lente alcohol ni xilol, ya que stos
deterioran el cemento que aglutina las lentes.
Dada la reducida distancia de trabajo que existe cuando se utilizan objetivos
de 40X a 100X (que llega a ser tan slo 0.12 mm) puede suceder que la lente
frontal tome contacto con el cubreobjetos con lo cual dicha lente puede rayarse
o desplazarse hacia atrs. Por ello es necesario evitar todo contacto entre el
objetivo y el cubreobjetos. Para evitar estos peligros en la actualidad estos
objetivos cuentan con un muelle protector situado en el interior del tubo del
objetivo. Sin embargo se debe tener precaucin pues los microscopios antiguos
no presentan este mecanismo de seguridad.
MANEJO DEL MICROSCOPIO
Procedimiento
1. Levantar el tubo o bajar la platina.
2. Colocar la preparacin microscpica en la platina.
3. Colocar el objetivo de rastreo (menor aumento).
4. Bajar el tubo (o subir la platina), observando por el costado, (no por el
ocular), hasta hacer tope o bien hasta que la lente frontal del objetivo se
encuentre ms o menos a 1 mm del cubreobjeto.
5. Regular la iluminacin:
a. Colocar la lmpara a unos 25 cm.
b. Usar el espejo plano y centrarlo mirando por el tubo hasta que el
campo quede uniformemente iluminado.
c. Abrir completamente el diafragma.
d. Subir del todo el condensador.
6. Centrar el objeto debajo del objetivo mirando por el costado.
7. Levantar el tubo con el tornillo macromtrico hasta lograr una observacin lo
ms ntida posible, posteriormente ajustar la misma con el tornillo
micromtrico.
8. Ajustar la iluminacin:

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a. bajando levemente el condensador.
b. cerrando el diafragma lo necesario.
9. Buscar el mejor lugar para observar (bordes).
10. Cambiar de objetivo, sin levantar el tubo, hasta obtener el aumento
deseado.

Tincin o coloracin de bacterias

Los microorganismos excepto las algas, son por lo general incoloros y muy
ligeramente refractantes por lo tanto son difciles de estudiar tal como se les
encuentra en la naturaleza. Para poder hacerlos visibles es necesario colorarlos
o teirlas previamente antes de observarlos al microscopio. La coloracin hace
resaltar tambin algunas caractersticas morfolgicas que de otra manera no
son visibles por que las distintas partes de una clula tienen afinidad por
diferentes colorantes. Los colorantes ms comunes son aquellos derivados de
la anilina como la fucsina, violeta de gencia, azul de metileno y otros.
La coloracin se usa tambin para diferenciar a los organismos y parte de ellos
que de otra manera no son muy semejantes; el proceso se conoce entonces
con el nombre de diferenciacin por coloracin. La diferenciacin por coloracin
se puede hacer empleando un tinte policromado en cuyo caso algunos
organismos o partes de un mismo organismo retienen un color mientras que
otro retiene otro color. Sin embargo la diferenciacin de bacterias por
coloracin generalmente depende de la habilidad de un organismo o parte de
el de retener un colorante especifico despus de que ha sido tratado con un
agente decolorante. Los pasos fundamentales para hacer una diferenciacin de
bacterias por coloracin son:
a. Coloracin.
b. Decoloracin.
c. Contracoloracin.

Tipos de Tincin

Tincin Simple: Utiliza un solo colorante.

Tincin acidorresistente: Las bacterias acidorresistentes son las que
retiene la carbolficsina, aun cuando intente descolorarlas con una mezcla de
alcohol y cido clorhdrico. Las bacterias acidorresistentes se tien de color

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rojo; el resto adquiere el color del colorante de contraste en este caso el

verde o azul.
Tincin negativa: Este procedimiento consiste en la tincin de fondo con
un colorante cido para dejar las clulas incoloras en contraste.
Comnmente se utiliza el colorante negro llamado nigrusna. El mtodo
sirve para observar bacterias o estructuras que difcilmente se tien con las
tcnicas directas.
Tincin de los flagelos: Los flagelos son estructuras demasiado finas para
poder ser visibles en el microscopio de luz. Sin embargo si se tratan con una
suspensin coloidal inestable de sales de cidos tnico para formar un
precipitado denso en la pared celular y en los flagelos, se pueden poner de
manifiesto su presencia y disposicin en las clulas. De esta manera el
dimetro aparenta que la estructura aumento de tamao con fuscina bsica
los hace visibles en el microscopio ptico.
Tincin de la cpsula: La cpsula se pone de manifiesto mediante una
coloracin negativa o una modificacin de esta. Uno de los mtodos de
tincin de la cpsula incluye el tratamiento de las bacterias con un solucin
caliente de cristal violeta seguido por un lavado con una solucin de sulfato
de cobre. El sulfato de cobre tambin imparte color al fondo y esto resulta
en que la clula y el fondo aparezcan teido en color azul oscuro mientras
la cpsula aparece de color azul plido.
Tincin del ncleo: Los ncleos se pueden teir por la tincin de Feulgen
la cual es especfica para el ADN.
Tincin de las esporas: Las esporas se observan de la manera ms
simple como cuerpos refringentes intracelulares en suspensiones de
bacterias sin teir, la parte de las esporas relativamente impermeable, las
esporas comnmente se tien con verde de malaquita y carbolfucsina o
carbolfucsina
Tincin de Giensa: El colorante se aplica a un frotis de sangre y se utiliza
cuando se sospeche de protozoos en la sangre para observar materias
ncleos de las clulas.

Tincin Gram
Tipo de coloracin de las bacterias que constituyen un carcter sistemtico;
segn tomen o no color, aplicando este mtodo, se distinguen los grupos Gram
positivos y Gram negativos.
La tincin de Gram o coloracin Gram es un tipo de tincin diferencial
empleado en microbiologa para la visualizacin de bacterias, sobre todo en
muestras clnicas. Debe su nombre al bacterilogo dans Christian Gram, que
desarroll la tcnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la
morfologa celular bacteriana como para poder realizar una primera
aproximacin a la diferenciacin bacteriana, considerndose Bacteria Gram
positiva a las bacterias que se visualizan de color violeta y Bacteria Gram
negativa a las que se visualizan de color rosa.

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La base de la reaccin diferencial de Gram es la estructura de la pared celular.
Esta tcnica diferencial es una de las de uso ms comn en microbiologa. El
frote bacteriano teido se somete a las soluciones siguientes en el orden en
que se indica: cristal violeta, alcohol y safranina o alguna otra solucin de
contraste conveniente.

Causas que alteran la tincin de Gram

Edad de la bacteria.
Errores del operador.
Uso de antibiticos.
Bacterias resistentes a la tincin Gram
Las siguientes bacterias de naturaleza gram positiva, tien como gram
negativas:
Mycobacterias (estn encapsuladas).
Mycoplasmas (no tienen pared).
Formas L (prdida ocasional de la pared).
Protoplastos y esferoplastos (eliminacin total y parcial de la pared,
respectivamente).
ULTRAESTRUCTURAS BACTERIANA
Dentro de las bacterias existen tres grupos de bacterias que pueden ser
diferenciados en relacin a la estructura de la pared celular. Para poder
diferenciar a estos grupos no es necesario utilizar complejos sistemas de
identificacin, y basta con un microscopio ptico y unas cuantas soluciones de
colorantes.
La forma ms sencilla de iniciar una identificacin del microorganismo que se
desea estudiar es realizar una coloracin o tincin de Gram. La tincin de Gram
es una tincin diferencial porque no todas las clulas se tien de la misma
manera y permite discriminar entre dos grandes grupos de bacterias, la
bacteria Gram positivas y Gram Negativas.
Los microorganismos Gram positivos, como el Staphylococcus aureus,
adquieren un color violeta despus de la coloracin de Gram debido a que

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contienen una pared celular estructuralmente muy diferente a la de
microorganismos Gram negativos, como la Escherichia coli, que adquieren un
color rosado.
El tercer grupo de bacterias es el de los bacilos Acido-Alcohol Resistentes
(BAAR) que pueden ser diferenciados utilizando la coloracin de Ziehl-Neelsen.
La diferencia en la coloracin no se debe en reacciones qumicas con ciertos
componentes de la pared sino a la estructura fsica de la misma
MICROORGANISMOS GRAM POSITIVOS
Las bacterias Gram positivas son clulas con una gruesa pared celular de
petidoglicano
Estas clulas poseen una membrana citoplasmtica con fosfolpidos y
protenas. Por fuera de la membrana citoplasmtica se encuentra la pared
celular que est compuesta por una ancha capa de peptidoglicano.

Este peptidoglicano es una macromolcula gigante formada por cadenas de un

dmero compuesto por N-acetilglucosamina y N-acetilmuramico. A su vez, estas
cadenas se encuentran unidas entre si mediante pptidos, que son pequeas
cadenas de aminocidos que se entrecruzan. Estos puentes peptdicos son
caractersticas de las distintas bacterias y presentan mayor rigidez cuanto ms
completo sea el entrecruzamiento.
El peptidoglicano es una malla porosa que otorga forma y rigidez a la clula, y
evita que la clula estalle en medios hipotnicos. Al ser porosa permite el paso
de nutrientes desde el exterior y el movimiento de enzimas catlicas y
productos de secrecin hacia el exterior de la clula.
La pared celular Gram positiva tambin contiene cidos teicoicos y cidos
lipoteicocos. Los cidos teicoicos son cadenas de ribitol o glicerol unidas
porfosfodiesteres, y estn unidos covalentemente al peptidoglicano por medio
de grupos fosfodiester en el oxidrilo del C6- N-acetilmuramico. Los cidos
lipoteicos son polmeros de glicerofosfato se encuentran anclados en la
membrana citoplasmtica y no estn unidos al peptidoglicano.
La funcin de estos compuestos seria estructural, pero existen evidencias que
indican que tambin participaran en la regulacin de las enzimas hidrolticas
que renuevan la pared celular (autolisinas) y que seran sitios de fijacin de
fagos.
MICROORGANISMOS GRAM NEGATIVOS

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Las bacterias Gram negativas son clulas con una delgada capa de
peptodoglicano y una segunda delgada capa de peptidoglicano y una segunda
envoltura denominada membran externa.
Las clulas se encuentran envueltas por una membrana citoplasmtica
formada por una bicapa fosfolipica y protenas. Por encima de esta membrana
se encuentra una fina capa de peptidoglicano que se halla unida para la
viabilidad celular covalentemente a unas lipoprotenas de anclaje que fijan la
membrana externa por medio de porciones lipofilicas.
Entre la membrana citoplasmtica y la membrana externa queda delimitado el
espacio periplasmico. Este espacio es ocupado por el periplasma que es una
matriz isotnica respecto al citoplasma, isotonidad que es mantenida mediante
los oligosacridos derivados de membrana (MDO), y en la que se hallan
componentes catalticos de suma importancia.
CUADRO DE DIFERENCIAS MOLECULARES ENTRE UNA BACTERIA GRAN
POSITIVA Y OTRA GRAN NEGATIVA.
BACTERIAS GRAM POSITIVAS
BACTERIAS GRAM NEGATIVAS
Poseen una pared celular interna y una
Poseen una pared celular ms compleja:
pared de peptidoglucano.
-pared celular interna
*Peptidoglucano: es un exoesqueleto que da
-pared de peptidoglucano
consistencia y forma esencial para
- bicapa lipdica externa
replicacin y supervivencia de la bacteria.
Membrana externa: forma un saco rgido
alrededor de la bacteria, mantiene
estructura y es barrera impermeable a
No tiene membrana externa
macromolculas, ofrece proteccin en
condiciones adversas

No tiene espacio periplasmtico

La red de murena est muy desarrollada y
llega a tener hasta 40 capas
La penicilina mata a las gram positivas, ya
que bloquea la formacin de enlaces
peptdicos entre las diferentes cadenas del
peptidoglucano
No contiene LPS
En la tincin de Gram, retienen la tincin
azul
Conservan el complejo yodocolorante
Son esporulantes y no esporulantes, como
Streptococcus, Cisteria, Frankia.

Espacio periplasmtico: espacio entre la

superficie externa de la membrana
citoplasmtica y la interna de la
membrana externa.
La red de murena presenta una sola capa
La penicilina no mata a las Gram
negativas, a causa de la capa de
lipopolisacridos situada en la parte
externa de la pared celular.
Contiene LPS: estimulador de respuestas
inmunes: activa clulas B, liberacin de
IL, FNT, IL 6 por macrfagos.
Quedan decoloradas.
Pierden el complejo yodocolorante
Pueden ser anaerobios o aerobios

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Poseen otros componentes: cidos teicoicos
y lipoteicoicos, y polisacridos complejos.

Poseen protenas con concentraciones

elevadas.

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Caractersticas de la clula bacteriana

COCO
Proviene del griego kkkos, lo que se
traduce como grano, es de forma
esfrica. Estas se clasifican en:
-Diplococo: Cocos en grupos de dos.
-Tetracoco: Cocos en grupos de cuatro.
-Estreptococo: Cocos en cadenas.
-Estafilococo: Cocos en agrupaciones
irregulares o en racimo.

BACILO
Proviene del latn baculus, lo que
significa varilla, tienen forma de
bastoncillo.

FORMAS HELICOIDALES
-Vibrio: ligeramente curvados y en
forma de coma, juda o cacahuete.
-Espirilo: en forma helicoidal rgida o
en forma de tirabuzn.
-Espiroqueta: en forma de tirabuzn
(helicoidal flexible)

3) PROCEDIMIENTO

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3.1 Procedimientos utilizados en el microscopio
Debes colocar tus microscopios en una mesa fija, de modo tal que
puedas sentarte con comodidad para ver el ocular sin estirarte o
apoyarte. trata que la mesa sea lo suficientemente grande como para
colocar sobre ella todo el material que necesites para trabajar. El objeto
que se desea examinar debe colocarse en un portaobjetos, que se una
lmina de vidrio de 1mm d espesor y a continuacin se cubre con un
cubreobjetos, un cuadrado de 2cm de lado o un circulo con esa medida
de dimetro.
La distancia del microscopio al filo de la mesa no debe ser menor a 15
cm. Adems de limpiar los oculares, objetivos, condensador y espejo
para una mejor visualizacin en el microscopio.
Practica hasta que tengas la certeza de saber para qu lado debes
mover el macrmetro, para hacer subir o bajar las lentes. Para
comenzar, seleccione siempre la lente de menor aumento que te
permite ver mejor el objeto y encontrar fcilmente la parte que ms te
interesa observar.
Coloca el portaobjetos sobre la platina de manera tal que la parte que
quieres observar se encuentre bajo la lente. Utiliza los broches para fijar
el portaobjetos en su sitio. Observa desde un costado la platina y mueve
la perilla de enfoque para acercar la lente .Luego mira a travs del
microscopio y sube las lentes girando el micrmetro hasta que el objeto
entre en foco y su imagen se vuelva ntida y clara.
3.2 Procedimientos utilizados en la coloracin de bacterias.
Usar portaobjetos limpios y pasarla varias veces cortando la llama del
mechero.
Dejar enfriar el portaobjetos y colocar una gotita de agua destilada con
el inoculador esterilizado.
Con el inoculador estril, tocar ligeramente el cultivo que ha de ser
examinado (cultivos de 18-42 h) y transferir un poco de l sobre la gotita
de agua en el portaobjetos.
Frotar el cultivo con el inoculador hasta extenderlo hasta la parte central
del portaobjetos, cuidado que se forme una pelcula muy delgada.
Fijar el extendido sobre el portaobjeto pasndola sobre la llama del
mechero 3 veces. Dejar enfriar.
Cubrir la pelcula con el colorante cristal violeta (gram #1) y dejar
cubierto por espacio de 1-2 minutos
Lavar con agua hasta retirar el exceso.
Se aade solucin Lugol (gram #2) y se deja reposar durante 1 minuto.
Decolorarla con alcohol-acetona (gram #3) durante 5 a 15 segundos.
Lavar la lmina con agua.
Se tie con safranina (gran #4) por un espacio de 20-30 segundos.
Lavar la lmina con agua durante 2 segundos
Dejar secar o secar con papel

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Aadir una gota de aceite a la lmina para poder examinar con el
microscopio utilizando el objetivo de 97x de inmersin.
4) RESULTADOS

COLORACION DE BACTERIAS
Grupo

Ambiente
Laboratori
o

Grupo 1
(Placa N
4)

Grupo 3
(Placa N
1)

de
Microbiolo
ga

CEIA

Caractersticas de la
Colonia
Forma:

Forma

Agrupacin

Gram

Elevacin: Convexa
Cromognesis: Morado
violeta
Caracteres pticos:
Opaco
Forma:
Margen: Ondulante

Bacilo

Estreptoba
cilo

Positivo

Elevacin: Convexa
Cromognesis: Morado
Caracteres pticos:
Opaco

Coco

Estafilococ
os

Positivo

Margen: Rizoide

IMAGEN VISTA CON EL

MICROSCOPIO
GRUPO 1
PLACA N 4

IMAGEN VISTA CON EL

MICROSCOPIO
GRUPO 3
PLACA N1

Bacilos esporulados ,

se observa
Gram Positivo

Tincin de Gram. Microscopa

ptica. Se observa como
cocos Gram positivos
dispuestos en racimo.

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MICROBIOLOGIA SANITARIA I
LAB N2-USO DEL MICROSCOPIO- COLORACION
DE BACTERIAS
5) DISCUSIONES Y OBSERVACIONES
Placa N 4 : Laboratorio de Microbiologa (Grupo 1)
Con el manejo del microscopio se pudo observar que se
encuentran agrupados en estreptobacilos. Esta bacteria se
observa de color morado violeta ya que en el proceso de tincin
donde se le agrego los diferentes colorantes como cristal violeta,
solucin lugol, y safranina, quedaron teidas; aun cuando se les
retiro el exceso de colorante con alcohol de 95, tomado este color
caracterstico que se le denomina a las bacterias que los
presentan Gram positivas.
Placa N 2: Centro de estudiantes (Grupo 3)
Para esta muestra se pudo observar que se encuentran agrupados
en estafilococos. Esta bacteria se observa de color morado por lo
que tambin se afirma que son Gram positivas
6) CONCLUSIONES
Se pudo observar que las bacterias Gram positivas se
presentan morfolgicamente como cocos o bacilos, sin
embargo al ejecutar tincin
de Gram en estas para
identificar su grupo taxonmico, las Gram positivas se tien
de color violeta-morado.
Mediante la tincin de Gram se identifican bacterias Gram
positivas y Gram negativas gracias al color que tornan luego
de ser teidas; en el caso de las bacterias Gram positivas se
tien de violeta esto se debe a que gracias a que contienes
una pared gruesa de peptidoglicano y gran cantidad de
cidos teicoicos que permiten fijar y retener rpidamente el
colorante inicial el cual es, el cristal violeta.
La tincin de Gram permite conocer las morfologa celular, el
tamao, la forma y su clasificacin taxonmica (Gram
positivas o Gram negativas) de acuerdo al color que toman
las bacterias despus de la tincin sin embargo no permite
conocer la especie o gnero de la bacteria a la cual
pertenece.
Las colonias de bacterias a las que se realiz tincin de
Gram se tomaron de aquellas muestras que estuvieron
expuestas al ambiente, por lo que se nota una mayor
presencia de las bacterias Gram positivas.

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MICROBIOLOGIA SANITARIA I
LAB N2-USO DEL MICROSCOPIO- COLORACION
DE BACTERIAS

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MICROBIOLOGIA SANITARIA I
LAB N2-USO DEL MICROSCOPIO- COLORACION
DE BACTERIAS
7) RECOMENDACIONES
Se debe tener cuidado al momento de pasar el portaobjetos en el
mechero y evitar quemaduras o rupturas del material, adems de la
conservacin de las colonias.
Hacer un adecuado uso del microscopio al observar los colores de las
bacterias.
Tener en cuenta la limpieza para disminuir el crecimiento de las
bacterias y as evitar algunas enfermedades que causan estas.
Los tornillos (macromtrico y micromtrico) y el revlver deben moverse
siempre con cuidado y sin apresuramiento, para evitar que los lentes se
rompan o rayen.
Siempre debemos trasladar el microscopio, agarrndolo con las dos
manos una de ellas en el brazo, y la otra con la palma hacia arriba
sosteniendo la base o pie.
Debemos utilizar una gota de aceite para realizar la observacin con el
objetivo de inmersin 97X.
Al acercar la lente del objetivo a la preparacin, debemos mirar directamente
y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en
la preparacin pudindose daar alguno de ellos o ambos.
Para limpiar la lente debe usarse solo papel lente. Puesto que otro material
puede rayarlo.
Ningn lquido debe mojar pieza alguna del microscopio. Las lminas que
se colocan en la platina debern estar siempre secas.
8) REFERENCIAS BILIOGRAFICAS

BIOLOGIA DE LOS MICROORGANISMOS.- MICHAEL T. MADIGAN; JOHN

M. MARTINEZ; JACK PARKER.
http://www.maristasourense.com/extras/materias/bioloxia/Microscopio
.PDF
http://www.agro.unlpam.edu.ar/catedras-pdf/biologia2010/Apuntes
%20Te%F3ricos%202010/Microscop%EDa%202010.pdf
http://biologiamedica.blogspot.com/2010/09/bacterias-grampositivas-y-gram.html
http://www.medic.ula.ve/histologia/anexos/microscopweb/MONOWEB/
capitulo4_4.htm

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LAB N2-USO DEL MICROSCOPIO- COLORACION
DE BACTERIAS
9) ANEXO

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