Penicillium digitatum Sacc.

Es el principal hongo patgeno de frutos

ctricos, produce la
llamada podredumbre verde, siendo responsable de hasta el 80 % de las
prdidas causadas
por podredumbres postcosecha. Es un hongo ascomiceto, con hifas cilndricas y
los
conidiforos forman ramas irregulares tabicadas. La forma de reproduccin es
mediante
esporas asexuales o conidios que se generan por escisin en cadenas de
longitud variable y
pueden presentar diferente longitud y tamao, incluso dentro de la misma
cadena. Estas
esporas son mayoritariamente elipsoidales con unas dimensiones de 3,5-8,0 x
3,0-4,0 m
(Samson et al. 1995). En medio artificial las colonias son de aspecto similar a
las que se
desarrollan en frutos infectados. Su crecimiento es ptimo a 24 C, muy lento a
temperaturas superiores a los 30 C o inferiores a los 10 C y a 1 C su
crecimiento queda
inhibido completamente (Whiteside et al. 1993). La enfermedad se manifiesta
inicialmente
con una mancha circular alrededor del punto de infeccin. A temperaturas
favorables para el
crecimiento del hongo, entre 20-28 C, esta mancha acuosa y descolorida de la
superficie se
hace ms grande y en el centro de la infeccin comienza aparecer un micelio
de color blanco.
Cuando el rea del micelio crece comienzan a producirse esporas de color
verde-oliva. La
progresin de la enfermedad lleva a la descomposicin interna del fruto el cual
queda
completamente cubierto de esporas en un plazo de entre 5 y 10 das.

P. digitatum es un patgeno de herida estricto, por lo que las esporas situadas

en la
superficie necesitan de pequeas lesiones en la piel para penetrar en el tejido
vegetal
(Kavanagh y Wood, 1967). Si la herida penetra unos 2 3 mm dentro del
albedo o afecta a
una glndula de aceite la infeccin se vuelve irreversible al cabo de 2 das
(Eckert y Eaks,
1989). La contaminacin por este hongo tiene lugar durante la recoleccin,
confeccin,
transporte y manipulacin, aunque el inculo mayoritario procede del campo,
principalmente a partir de conidios de otros frutos enfermos que se diseminan
con facilidad.
(Tuset, 1987). Las heridas que constituyen la entrada del patgeno son en su
mayora heridas
mecnicas que se producen en la recoleccin y el manejo postcosecha de los
frutos, pero
tambin pueden producirse en el campo o por causas fisiolgicas, como el fro.
La alta
humedad relativa necesaria para la prevencin de la deshidratacin y prdida
de peso de los
frutos durante el almacenamiento favorece el desarrollo de este patgeno. Es
sabido que la
acumulacin de agua en la superficie de los ctricos estimula el desarrollo de la
podredumbre
verde, por lo que un ligero secado del fruto podra reducir su susceptibilidad al
podrido
(Eckert, 1978).
Penicillium italicum Wehmer. Es el segundo hongo fitopatgeno ms
importante en la
postcosecha de frutos ctricos, causante de la podredumbre azul (Tuset, 1987).
La

temperatura ptima de crecimiento de P. italicum es la misma que la de P.

digitatum, entre
20 y 28 C. Sin embargo, P. italicum es una especie ms adaptada a
temperaturas inferiores a
10 C, por lo que es especialmente importante durante la frigoconservacin.
Los primeros
sntomas de la enfermedad son iguales a los de la podredumbre verde. Sobre el
centro de la lesion aparece micelio blanco, que se desarrolla mas lentamente que el
de P. digitatum, pero
que sin embargo esporula mas rapidamente y sus esporas poseen un color azul.
2. Biologia de Penicillium digitatum
Como ya se ha comentado, Penicillium digitatum es el agente causal de la
podredumbre
verde de los frutos citricos y constituye uno de los patogenos mas importantes durante
la
postcosecha de los mismos, llegando a causar hasta el 80 % de las podredumbres. A
pesar de
la importancia economica de este patogeno nuestro conocimiento sobre los
mecanismos de
patogenicidad/ virulencia son muy escasos, en contraste con el avance experimentado
en los
ultimos anos en el conocimiento de las respuestas de defensa del fruto a la infeccion
por este
patogeno.
P. digitatum es un patogeno especifico de frutos citricos; no se ha descrito en otros
sistemas
vegetales. Como se ha mencionado anteriormente, es un patogeno de herida. A
medida que
aumenta la profundidad de la herida en el albedo (tejido interno de la corteza) mayor
es la
probabilidad de que se desarrolle la infeccion (Kavanagh y Wood, 1967), mientras que
en
heridas que solo afectan al flavedo (tejido externo de la corteza) la probabilidad de
desarrollo de la infeccion es muy inferior. Sin embargo, si la herida afecta a las
glandulas de
aceite es mas facil que se desarrolle la infeccion (Rodov et al. 1995). Este efecto ya fue
visto
por French y colaboradores (1977) que observaron que las esporas de P. digitatum y de
P.
italicum germinaban mas rapidamente en suspensiones de aceites de glandulas de
naranja,
limon o lima que en citral, nonanal, decanal por separado o en una mezcla de los
mismos.
Eckert y Ratnayake (1994) comprobaron que los compuestos volatiles que desprenden
los
frutos citricos inducen la germinacion de las esporas, facilitando el inicio del proceso
infectivo. La combinacion de limoneno, acetaldehidos, etanol y CO 2 en conjunto
estimulan la
germinacion, pero cada componente individualmente no tiene efecto. Sin embargo
Droby y

colaboradores (2008) demostraron que los monoterpenos presentes en la piel de los

citricos
limoneno, mirceno, -pineno y -pineno promueven la germinacion de conidios de P.
digitatum y P. italicum en ausencia de nutrientes. Ademas, estos terpenos ejercen un
efecto
inhibitorio contra otros hongos no-patogenos de citricos, como P. expansum y B.
cinerea, lo
que sugiere que estos monoterpenos volatiles, en especial el limoneno, actuan como
las
principales moleculas de senalizacion de reconocimiento del huesped por P. digitatum y
P.
italicum. Otro aspecto que ha sido objeto de estudio es la relacion existente entre la
hormona vegetal etileno y P. digitatum. El etileno actua desencadenando la maduracion
de
los frutos climatericos, a la vez que acelera el proceso de senescencia. Aun cuando los
citricos
son frutos no climatericos, el etileno actua acelerando el cambio de color del flavedo,
hecho
que es utilizado comercialmente en la desverdizacion de los frutos al inicio de la
campana. En
la infeccion por P. digitatum sobre frutos citricos la produccion de etileno durante los
primeros estadios del desarrollo de la infeccion proviene del fruto. Sin embargo,
conforme avanza la infeccion, el hongo es el responsable de practicamente la totalidad
de la
produccion de etileno en estadios mas avanzados (Achilea et al. 1985a; Achilea et al.
1985b).
El razonamiento propuesto es que la produccion de etileno aceleraria el proceso de
senescencia del fruto, favoreciendo asi el desarrollo del patogeno. Sin embargo, un
mutante
de P. digitatum que produce bajos niveles de etileno es capaz de infectar tan
eficientemente
como una cepa productora de la hormona, indicando que la produccion de etileno no
representa un mecanismo de patogenicidad (Mattoo et al. 1979). Ademas, si se
bloquea la
percepcion de etileno en los frutos mediante aplicacion de 1-metil ciclopropeno no solo
no
se observa una disminucion de la infeccion, si no que se produce un ligero aumento en
la
incidencia natural de frutos podridos (Marcos et al. 2005; Porat et al. 1999).
En general, los patogenos han desarrollado varios mecanismos para aumentar su
virulencia,
sin embargo, aun desconocemos cuales son los factores de virulencia en los hongos
patogenos de postcosecha, incluyendo los mecanismos por los que pueden suprimir las
defensas del fruto y la eficiencia de los mismos, especialmente en la interaccion
Penicilliumfruto.
Una de las hipotesis es la de que podrian suprimir la via de fenilpropanoides. La
fenilalanina ammonio liasa (PAL) es la primera enzima de esta ruta, siendo una enzima
clave
de la misma (Dixon y Paiva, 1995). Las primeras evidencias de que P. digitatum era
capaz de
suprimir las defensas del fruto fue proporcionada por Ismail y Brown (1979) quienes
observaron que el aumento de la actividad de PAL en la piel de los citricos, inducido por
una
herida mecanica, era inhibida alrededor de las zonas inoculadas con el hongo. Lisker y

colaboradores (1983) mas tarde demostraron que la actividad PAL es tambien

suprimida en
areas distantes de los sitios de inoculacion. Tambien observaron que la infeccion por P.
digitatum es capaz de inhibir la induccion de PAL por etileno en frutos intactos o en
aquellos
en los que se ha producido una herida mecanicamente. La expresion del gen que
codifica PAL
esta inducida en frutos citricos durante el proceso de infeccion por P. digitatum en la
zona
proxima a la inoculacion, sin embargo no se ha observado en frutos sanos (McCollum,
2000).
Mas recientemente, Ballester y colaboradores (2006) han demostrado que esta
supresion
tiene lugar a nivel post-transcripcional porque la expresion del gen PAL de citricos fue
claramente inducida en respuesta al ataque del patogeno, pero no se reflejo en la
induccion
de la actividad PAL.
Sin embargo, el factor mas estudiado en relacion a los mecanismos de patogenicidad
de
hongos patogenos postcosecha es la modificacion o adaptacion del patogeno al
ambiente del
huesped adaptandolo a sus necesidades para su beneficio propio. En la interaccion
plantapatogeno
el pH del tejido de la planta es uno de los factores ambientales que tiene un mayor
efecto. En frutos el pH es importante porque afecta a la germinacion de los conidios
(Pelser
et al. 1977), tiene influencia en la colonizacion de los tejidos del huesped y en la
virulencia de
los patogenos (Prusky et al. 2004, Prusky y Yakoby, 2003). Algunas especies de hongos
patogenos pueden aumentar su virulencia mediante una variacion local del pH del
huesped,
aumentandolo o disminuyendolo. En las especies de Penicillium, la colonizacion
produce una
acidificacion de los tejidos del fruto que infectan (Prusky et al. 2004). En nuestro grupo
del
IATA hemos comprobado que el flavedo macerado de frutos de naranja Navelina
infectados
por P. digitatum presentaba un pH 2,2 unidades inferior al de una zona sana lejana al
frente de maceracion (resultados no publicados). En la infeccion de manzanas por P.
expansum la
disminucion del pH es menos marcada, aunque se ha demostrado que se produce una
disminucion de 0,4-0,5 unidades (Sanchez-Torres y Gonzalez-Candelas, 2003). Prusky y
colaboradores (2004) han sugerido que P. digitatum compromete las defensas de los
frutos
citricos mediante la acidificacion del tejido, especulando que el bajo pH del ambiente
es
optimo para la expresion y la funcionalidad de las poligalacturonasas fungicas.
Ademas,
demostraron que durante el desarrollo de la enfermedad P. digitatum produce acido
citrico y
acido gluconico y captura activamente iones de amoniaco y que estos dos procesos
estan
asociados con la patogenicidad. Estas observaciones ya fueron propuestas en los anos
70 con

los estudios de Barash y Angel (1970) y Barmore y Brown (1979) sugiriendo que
durante la
invasion de frutos citricos por P. digitatum se producia una disminucion del pH, aunque
en
este caso estaba asociada a la produccion de acido galacturonico. Hasta la fecha la
controversia entre cual de los dos (acido gluconico o acido galacturonico) es el
responsable
de la acidificacion no esta resuelta. Sin embargo, en la interaccion P. expasummanzana,
Hadas y colaboradores (2007) han demostrado que el acido gluconico es un factor
fundamental que contribuye a la enfermedad de la manzana por el hongo. La
acidificacion
del tejido por este acido aumenta la expresion de las enzimas pectinoliticas y el
establecimiento de las condiciones para el desarrollo de este hongo.
Otro factor que tambien ha sido objeto de estudio en la interaccion fruto-patogeno
postcosecha ha sido el rol de los sistemas antioxidantes. En la interaccion planta-hongo
patogeno, se ha demostrado que la generacion masiva de ROS dentro de las celulas
del
huesped contribuye a la defensa del mismo (Lamb y Dixon, 1997). Existen diferentes
actividades enzimaticas, como superoxido dismutasa y catalasa, implicadas en la
regulacion
de las ROS que juegan un importante papel en la resistencia a patogenos (Mittler,
2002).
Torres y colaboradores (2003) realizaron ensayos con dos tipos de frutos de manzana,
los
menos susceptibles a la infeccion por P. expansum mostraron un incremento de los
niveles
de H2O2 junto con una alta actividad superoxido dismutasa (SOD), sin cambios
significativos
en los niveles de catalasa (CAT) o peroxidasa (POX). En los frutos susceptibles, los
niveles de
H2O2 y SOD fueron similares a los de los frutos control. En contraste, la actividad CAT y
POX
se incremento significativamente como consecuencia de la herida y la inoculacion. Por
lo
tanto, estos autores sugirieron que el H2O2 y el metabolismo asociado inducido por la
herida
podrian jugar un importante papel en los mecanismos de resistencia de manzanas a P.
expansum. Macarisin y colaboradores (2007) han demostrado que durante la infeccion
de
frutos de naranja, P. digitatum es capaz de suprimir la acumulacion del H2O2 en las
celulas del
fruto, mientras que un no patogeno, como P. expansum, desencadena una acumulacion
masiva de H2O2 en el exocarpo del fruto. Para colonizar con exito el fruto, P. digitatum
necesita superar los mecanismos de defensa del fruto. Droby y colaboradores (2008)
sugieren que el acido citrico juega un papel en la patogenesis de P. digitatum ya que
inhibe la
produccion de H2O2. Sin embargo, otros acidos como el acido gluconico inducen la
produccion de H2O2. Ballester y colaboradores (2006) han analizado la distribucion
espacial
de las enzimas antioxidantes (superoxido dismutasa, catalasa, ascorbato peroxidasa,
glutation reductasa, peroxidasa) en frutos citricos infectados por P. digitatum,
comprobando

que todas las actividades enzimaticas decrecen a medida que el patogeno progresa a
travs del tejido, pero siguiendo cineticas diferentes, excepto en la catalasa y la
peroxidasa solubles,
que muestran un ligero incremento en el tejido macerado. Torres y colaboradores
(2011)
sugieren tambien que P. digitatum suprime la produccion de H2O2 asi como las
actividades
SOD y CAT producidas en los tejidos de naranja como respuesta al proceso de
infeccion. En
contraposicion, el empleo del agente de biocontrol P. agglomerans CPA-2 activa la
produccion de H2O2 y ambas actividades enzimaticas, probablemente como un
mecanismo
para prevenir al fruto contra futuras infecciones.
En P. digitatum se han caracterizado parcialmente algunas enzimas degradadoras de la
pared
celular vegetal, fundamentalmente pectinasas. El analisis de tres pectinasas, una
poligalacturonasa, una pectin metil-esterasa y una pectin liasa, obtenidas a partir de
sobrenadantes de medios de cultivo de P. digitatum mostro que la unica con capacidad
de
macerar tejido de naranja era la pectin liasa (Bush y Codner, 1968). Sin embargo,
nunca se ha
detectado esta actividad en tejido macerado. Posteriormente se comprobo que la unica
actividad pectinasa detectable en frutos de limon infectados por P. digitatum era
exopoligalacturonasa
(Barash y Angel, 1970). Estos autores propusieron que esta actividad era la
principal, sino la unica, implicada en la maceracion del tejido. Ademas, al tratarse de
una
actividad de tipo exo, podria explicar perfectamente el aumento de acido galacturonico
que
se observa en el tejido macerado. En tejido macerado de naranja infectada por P.
digitatum
la unica actividad detectada fue tambien una exo-poligalacturonasa que hidroliza la
pectina
de la pared celular formando monomeros de acido galacturonico y que demostro ser
capaz
de macerar discos de albedo de naranja (Barmore y Brown, 1979). Con posterioridad a
esta
fecha no hay ninguna referencia bibliografica acerca de las pectinasas de P. digitatum.
Mas
recientemente, se comprobo la presencia de actividad celulasa en frutos de naranja
infectados con P. digitatum, incluso antes de que los sintomas de la infeccion fuesen
evidentes (Barkai-Golan y Karadavid, 1991), pero no se presento ninguna evidencia
que
sugiriera la implicacion de esta actividad en patogenesis.
La inmensa mayoria de los estudios moleculares llevados a cabo en P. digitatum estan
relacionados con la resistencia a fungicidas. Los fungicidas del tipo DMIs constituyen
uno de
los grupos mas importantes de fungicidas, entre los que destaca el imazalil. Desde su
introduccion en 1981, se han descubierto muchas cepas de P. digitatum resistentes
(Eckert et
al. 1994; Wild, 1994; Holmes y Eckert, 1995). El mecanismo de resistencia a DMIs mas
comun
es la aparicion de mutaciones en el gen CYP51, que codifica la citocromo P450 esterol
14
alfa-demetilasa. Hamamoto y colaboradores (2000) aislaron este gen de P. digitatum

(PdCYP51) y todas las cepas resistentes que analizaron tenian una repeticion en
tandem de
cinco copias de una secuencia de 126 pb, mientras todas las sensibles solo
presentaban una
copia. Esta secuencia de 126 pb puede actuar como potenciador de la transcripcion
aumentando el nivel de expresion de PdCYP51 y por lo tanto, confiere resistencia a
DMIs.
Mas recientemente, Sun y colaboradores (2011) han caracterizado otros dos nuevos
genes
de P. digitatum de la familia CYP51 (PdCYP51B y PdCYP51C), concluyendo que estos
dos
genes junto con el ya conocido PdCYP51A (previamente PdCYP51) forman la familia de
genes
CYP51 de P. digitatum. El gen PdCYP51B esta involucrado en la resistencia a DMIs por la
presencia de una unica insercion de 199 pb en la region promotora que resulta en la
sobreexpresion del mismo. Con respecto a PdCYP51C no se han detectado cambios
consistentes en la secuencia de nucleotidos o en los niveles de expresion que se
relacionen
con la resistencia a imazalil.
Otro mecanismo para prevenir o reducir la acumulacion de fungicidas DMIs dentro de
las
celulas y por lo tanto, la reduccion o eliminacion de su accion toxica, se basa en la
expulsion
activa de estos compuestos por los transportadores del tipo ABC o MFS. En P. digitatum
han
sido clonados y secuenciados cuatro genes que codifican transportadores ABC [PMR1
(Nakaune et al. 1998), PMR3 (AB164459.1), PMR4 (AB164460.1) y PMR5 (Nakaune et
al.
2002)]. Hamamoto y colaboradores (2001) observaron que la disrupcion de PMR1 en
una
cepa de P. digitatum resistente a DMIs produjo una disminucion en su resistencia y
ademas
el nivel de expresion era ligeramente superior respecto a las cepas sensibles. Otro de
los
genes estudiados es PMR5. Este gen presenta gran homologia con PMR1, y tambien
con atrB
de A. nidulans y BcAtrB de B. cinerea (Schoonbeek et al. 2003); sin embargo, se induce
fuertemente por benzimidazoles, resveratrol y otros compuestos, pero no por DMIs.
Ambos
genes estan involucrados en la resistencia a fungicidas e incrementan su expresion en
presencia de diferentes componentes toxicos (Nakaune et al. 1998, 2002). SanchezTorres y
Tuset (2011) evaluaron la sensibilidad de 75 cepas de P. digitatum a siete fungicidas
diferentes a traves de la caracterizacion molecular de diferentes genes implicados en la
resistencia a fungicidas. Las conclusiones de estos ensayos fueron que muchos genes
estan
involucrados en los mecanismos que confieren resistencia a fungicidas en P. digitatum.
En
algunos casos, la resistencia a un fungicida en particular es determinado por cambios
en un
solo gen, pero en muchos casos, diferentes mecanismos tales como mutaciones que
alteren
la diana de los fungicidas o cambios en la transcripcion, estan involucrados en el
desarrollo
de resistencia a componentes toxicos especificos. En los que respecta al otro tipo de

transportadores (MFS) hasta la fecha solamente ha sido descrito uno en P. digitatum

(PdMFS1 GU124565.1), y los resultados obtenidos mostraron que este transportador es
capaz de bombear imazalil fuera de las celulas, lo que contribuye a la resistencia
parcial a
imazalil (Wang et al. 2012). Estos autores tambien mostraron que este gen tambien
esta
implicado en la virulencia de P. digitatum sobre frutos citricos.
Junto con el imazalil, el tiabendazol es el otro fungicida mas comunmente utilizado para
evitar la podredumbre verde causada por P. digitatum. El tiabendazol pertenece al
grupo de
los benzimidazoles. Los benzimidazoles se unen a la molecula de -tubulina
interrumpiendo
el ensamblaje de los microtubulos e interfiriendo con la division celular durante la
mitosis. La
resistencia a este tipo de fungicidas se ha detectado en muchas especies de hongos y
al igual
que en P. digitatum la resistencia esta relacionada con una mutacion puntual en el gen
de la
-tubulina que produce una alteracion de la secuencia de amino acidos en el sitio de
union
del benzimidazol. En P. digitatum se han identificado dos mutaciones en aminoacidos
especificos que confieren resistencia a los benzimidazoles, una en el codon del amino
acido
de la posicion 198 (Koenraadt et al. 1992) y otra en el 200 donde Schmidt y
colaboradores
(2006) descubrieron que la mutacion en todas las cepas resistentes de P. digitatum del
estudio poseian esta mutacion donde la timina era remplazada por una adenina (TTC
por
TAC), lo que produce un cambio de fenilalanina a tirosina. Este resultado se ha
confirmado en estudios posteriores con otras colecciones de aislados de P. digitatum
(Kinay et al. 2007;
Sanchez-Torres y Tuset, 2011).
Para un mejor entendimiento de las bases geneticas de la patogenicidad y, por lo
tanto, para
facilitar el diseno de nuevas estrategias para el control de la enfermedad, se requiere
un
eficiente sistema de transformacion como una herramienta esencial para la
manipulacion de
genes y poder asi abordar estudios de genomica funcional en P. digitatum. La
transformacion
mediante la utilizacion de protoplastos ha sido utilizada con exito en P. digitatum en
varios
estudios (Nakaune et al. 1998; 2002; Hamamoto et al. 2001). La transformacion
mediada por
Agrobacterium tumefaciens (ATMT) de conidios germinados es una forma eficiente para
evitar la costosa preparacion de protoplatos (Song et al. 2004). Durante el transcurso
de esta
Tesis Wang y Li, (2008) han descrito la transformacion de P. digitatum mediante la
utilizacion
de Agrobacterium tumefaciens obteniendo mas de 60 transformantes a partir de 106
conidios. Estos resultados hacen de la ATMT una alternativa muy viable para la
manipulacion
genetica de este hongo.
Muy recientemente, nuestro grupo del Instituto de Agroquimica y Tecnologia de
Alimentos

(IATA) ha participado en la publicacion de la secuencia del genoma de dos cepas de P.

digitatum (Marcet-Houben et al. 2012), una de las cuales es la cepa Pd1 (CECT20795),
que es
con la que se ha trabajado en esta Tesis. El tamano del genoma se ha estimado
alrededor de
26 Mb, lo que supone una notable reduccion en comparacion con el genoma de P.
chrysogenum (van den Berg et al. 2008), que es el hongo filogeneticamente mas
cercano con
genoma secuenciado. Este avance va a permitir profundizar en la compresion de los
mecanismos fisiologicos de este fitopatogeno. Ademas, la disponibilidad de la totalidad
de
los genes es un excelente completemento para los datos obtenidos en esta Tesis que
permitira tambien un mejor entendimiento de la relacion P. digitatum-huesped. Dos son
los
aspectos fundamentales que se podran abordar. Uno es la especificidad de huesped, ya
que
como se ha comentado anteriormente P. digitatum solo se encuentra de forma natural
infectando frutos citricos. El segundo aspecto es el relacionado con los mecanismos de
patogenicidad de este hongo, incluyendo tanto los mecanismos que le permiten
degradar los
tejidos del fruto como los mecanismos que emplea para suprimir las respuestas de
defensa
del mismo.
A pesar de la importancia economica de P. digitatum el conocimiento actual de los
mecanismos de patogenicidad de este hongo es muy limitado, como ha quedado
patente en
los parrafos anteriores. Por ello, debemos basarnos en el conocimiento adquirido en
otros
hongos fitopatogenos como punto de partida para poder profundizar en la biologia de
este
patogeno.
Los hongos necrotrofos donde se encuadra P. digitatum obtienen sus nutrientes de las
celulas muertas de sus huespedes, sin embargo, los hongos biotrofos u obligados los
obtienen de las celulas vivas. Como patogenos necrotroficos producen efectores
proteicos
(algunos tambien se conoce como toxinas selectivas de huesped) que promueven la
enfermedad, y el huesped produce receptores que son requeridos para la
susceptibilidad.
Estos sistemas son a menudo considerados como una imagen especular de los
sistemas
clasicos gen-por-gen que se encuentran en los patosistemas de los biotrofos, donde la
relacion entre los receptores del anfitrion y los productos de los genes de los patogenos
desencadenan las respuestas de resistencia (Friesen et al. 2008).
1.3 Control de las podredumbres en postcosecha
En los ultimos anos los sistemas mayoritariamente utilizados para el control de
podredumbres en postcosecha se han basado en la utilizacion sistematica de productos
quimicos aplicados justo despues de la recoleccion y previo a su conservacion
frigorifica. En
la actualidad hay un numero reducido de fungicidas autorizados para su utilizacion en
la
postcosecha de frutos citricos. Los tratamientos mas ampliamente utilizados se aplican
mediante ducha ("drencher") o en balsa y se basan generalmente en una combinacion
de dos

o mas fungicidas. Las materias activas mas utilizadas son los imidazoles (imazalil (IMZ)
y
procloraz), los benzimidazoles (tiabendazol (TBZ) y benomilo) y ortofenilfenato sodico
(SOPP)
(Eckert y Brown, 1986).
Desde el ano 2000 y mediante una resolucion de la direccion general de Innovacion
Agraria y
Ganaderia (CAPA, 2001) en la que se establecen las normas para la produccion
integrada en
citricos, se establecio que el tiabendazol, el imazalil y el ortofenilfenato sodico son las
tres
unicas materias activas permitidas, especificando que se evitaria en lo posible su
utilizacion.
Esta resolucion se modifico en el 2004 (CAPA, 2004), anadiendo el miclobutanil, el metil
tiofanato y el procloraz a la lista de productos tolerados para los tratamientos
postcosecha
en frutos citricos asi como la homologacion y registro de dichas sustancias por el
Registro
Oficial de Productos Fitosanitarios. Debido al grave problema que representan los
residuos
de productos quimicos para la salud humana, los diferentes Estados, en especial los
mas
desarrollados, han establecido una serie de limites maximos de residuos de fungicidas
postcosecha en frutos citricos (LMR) que para todos los paises pertenecientes a la EU
son los
siguientes: tiabendazol (5 ppm), imazalil (5 ppm), SOPP (12 ppm), miclobutanil (3 ppm)
y
procloraz (10 ppm).
_____________________________Introduccion______________________________

-61.3.1. Fungicidas quimicos

Durante muchos anos, el SOPP, TBZ y IMZ han sido registrados para su uso contra las
podredumbres de citricos. Cada uno tiene un modo de accion diferente. Utilizados
solos,
combinados en mezclas o aplicados secuencialmente por separado han sido el primer
metodo utilizado para el control de las podredumbres de frutos citricos durante el
almacenamiento durante mas de 25 anos (Ismail, 2004).
El tratamiento usando estos fungicidas, sin embargo, esta comprometido debido a la
aparicion de poblaciones de patogenos resistentes. Ademas se han identificado
aislados que
son resistentes a uno, dos o los tres fungicidas (Bus et al. 1991; Eckert, 1982; Harding
1962;
Holmes y Eckert, 1999). La reduccion de la eficacia de estos fungicidas junto con la
revision
periodica, la retirada o cancelacion de muchos de ellos ha estimulado la investigacion
de
nuevos materiales que podrian ser eficientemente incorporados a los programas de
control
de las podredumbres de citricos (Adaskaveg et al. 2002). En cuanto a la toxicidad
aguda, el
IMZ es el que presenta mayores problemas. El IMZ es un fungicida de categoria II
(Toxico al
ser humano), mientras que el SOPP y el TBZ pertenecen a las categorias III
(Moderadamente
toxico al ser humano) y IV (Poco toxico al ser humano) respectivamente.

Dentro de los fungicidas sistemicos se engloban los benzimidazoles y los denominados

inhibidores de la demetilacion de esteroles o DMIs. Los derivados del benzimidazol,
como
tiabendazol (TBZ), benomilo y carbendazima, se empezaron a utilizar como fungicidas
a
finales de los anos sesenta. Estos compuestos son activos frente a un amplio espectro
de
hongos patogenos, entre ellos P. digitatum y P. italicum. Su mecanismo de accion se
basa en
la interaccion con la tubulina del citoesqueleto, previniendo su polimerizacion y la
elongacion
de los microtubulos, e interfiriendo en los procesos de division y movimiento celular
(Davidse, 1986). Otros fungicidas introducidos a finales de los setenta son los
derivados del
imidazol, como el imazalil (IMZ) y el procloraz, los cuales inhiben la demetilacion del
carbono
14 del lanosterol o 24-metileno dihidrolanosterol, que es un sustrato de la citocromo
P450
esterol demetilasa en la biosintesis de los esteroles fungicos, como el ergosterol
(Hamamoto
et al. 2000), componente esencial de la membrana celular de los hongos que afecta a
la
permeabilidad celular.
La azoxistrobina, el fludioxonil y el pirimetanil han sido clasificados como fungicidas de
riesgo
reducido por la Agencia de Proteccion de Medio Ambiente de los Estados Unidos para el
tratamiento de los citricos y aceptados para su uso como sustancias activas en la
formulacion
de plaguicidas por la Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria. Estos fungicidas
representan las primeras introducciones de fungicidas para el uso en postcosecha de
citricos
desde el registro del Imazalil en 1981 (Adaskaveg et al. 2004). Kanetis y colaboradores
(2007)
han demostrado la eficacia de estos fungicidas para el control postcosecha de las
podredumbres de frutos citricos (principalmente P. digitatum y P. italicum). La
introduccion
de estos tres nuevos fungicidas puede hacer efectiva la mezcla de estos fungicidas con
los ya
previamente establecidos para el diseno de programas de rotacion que podrian
retrasar la
aparicion de resistencias frente a estos nuevos compuestos.
_____________________________Introduccion______________________________

-7La resistencia a los fungicidas puede originarse por varios mecanismos: alteracion del
sitio
diana, reduciendo la union del fungicida; sintesis de una enzima alternativa capaz de
sustituir a la enzima diana; sobreproduccion de la diana del fungicida; descomposicion
metabolica del fungicida o un flujo activo o reduccion de la cantidad admitida de
fungicida
(Fernandes-Ortuno et al. 2008).
En los hongos, los sistemas de transporte han evolucionado para conferir resistencia
natural
contra las sustancias toxicas, por lo tanto, no es sorprendente que estos
transportadores

tambien confieran resistencia a los fungicidas (de Waard et al. 2006; Del Sorbo et al.
2000).
Dos familias de sistemas transportadores de membrana se han relacionado con la
secrecion
de compuestos toxicos: los transportadores ABC (de ATP binding cassette) y los MFS
(Major Facilitator Superfamily). Los transportadores ABC utilizan la energia de la
hidrolisis
del ATP para el transporte de diversas sustancias en contra del gradiente de
concentracion a
traves de la membrana plasmatica. Los transportadores MFS, sin embargo, son
incapaces de
hidrolizar el ATP y usan la fuerza motriz de los protones para facilitar el transporte no
solo de
toxicos sino tambien de azucares, peptidos e iones (Pao, 1998). Estos transportadores
han
sido descritos en varios hongos filamentosos como Aspergillus nidulans, Botrytis
cinerea,
Mycosphaerella graminicola, Magnaporthe grisea, P. digitatum, etc, (Andrade et al.
2000a,
2000b; del Sorbo et al. 2000; Nakaune, 2002; Schoonbeek, et al. 2003; Stergiopoulos
et al.
2002). Por ejemplo, un mutante de B. cinerea en el que se reemplazo el gen Bcmfs1,
que
codifica un transportador MFS, mostro un incremento de la sensibilidad a compuestos
toxicos naturales como la camtotecina y la cercosporina, que son producidos por la
planta
Camptotheca acuminata y por el hongo patogeno de plantas Cercospora kikuchii,
respectivamente. Los transformantes que sobreexpresaron este gen manifestaron una
disminucion de la sensibilidad a estos compuestos y a diferentes fungicidas, incluyendo
azoles. Estos resultados demuestran que el transportador MFS Bcmfs1, esta
involucrado en
la proteccion contra toxinas naturales y fungicidas (Hayashi et al. 2002).
1.3.2 Control alternativo
Debido a toda la problematica expuesta en el punto anterior, todos los recursos y
esfuerzos
que se estan llevando a cabo llevan la misma direccion: conseguir un control integrado
alternativo que permita minimizar las aplicaciones de pesticidas y obtener asi una fruta
libre
de residuos y mas cuando nos referimos al tratamiento postcosecha, ya que es el
proceso
que se encuentra mas cerca del consumidor. El objetivo ideal de cualquier programa de
produccion integrada seria la eliminacion total de fungicidas sinteticos en postcosecha.
Segun la naturaleza, los sistemas alternativos podriamos clasificarlos en fisicos,
quimicos y
biologicos.
_____________________________Introduccion______________________________

-81.3.2.1 Control Fisico

Los metodos fisicos tienen el beneficio de que no producen residuos perjudiciales para
el
medio ambiente, sin embargo, las desventajas incluyen eficacia limitada y variable y
una falta
de actividad preventiva y persistencia.
Los tratamientos de calor constituyen una alternativa prometedora al uso de productos

quimicos de sintesis y se suelen emplear para mantener los frutos a temperaturas

superiores
a los 30 C (con humedades relativas superiores al 90 %) durante 1-3 dias, es decir, los
tratamientos de curado, que han demostrado una elevada eficacia en el control de las
principales podredumbres en citricos (Ben-Yehoshua et al. 1987; Plaza et al. 2003). A
pesar
de su buena eficacia, los tratamientos de curado no estan muy implementados
comercialmente debido al coste de la calefaccion, a la inmovilizacion de grandes
cantidades
de fruta durante periodos relativamente largos y porque un excesivo o incontrolado
tratamiento puede danar la calidad del fruto (Plaza et al. 2003). Otra alternativa son los
tratamientos con agua caliente, que es una tecnologia facil, mas barata y factible que
el
curado. Inmersiones breves (2-5 min) en agua a 45-55 C han mostrado una reduccion
de las
podredumbres verde y azul en citricos (Schirra y Dhallewin, 1997; Hong et al. 2007).
Los
inconvenientes que presenta este metodo son que el agua caliente no es un
tratamiento
fungicida muy persistente y su efectividad depende en gran medida del tipo, y las
condiciones fisiologicas del fruto (Palou et al. 2001). Ademas, las temperaturas que son
utiles
para reducir el inoculo efectivo estan muy proximas a las que causan danos al fruto.
Entre los metodos fisicos tambien pueden incluirse las radiaciones ionizantes y los
tratamientos con luz ultravioleta (UV). Las radiaciones ionizantes son rayos , rayos o
rayos
X. Su aplicacion sobre los frutos citricos es un metodo curativo que permite controlar
los
patogenos ya establecidos en el tejido del huesped, tanto los conidios de P. digitatum
como
los de P. italicum son altamente sensibles a las radiaciones (Sommer et al. 1964). Los
frutos
maduros son relativamente resistentes a la irradiacion porque en este estado de
desarrollo
practicamente ya no hay division celular. La efectividad de esta tecnica como
tratamiento
fungicida depende del tipo de patogeno, su estado de crecimiento y su poblacion en el
huesped. El problema es que las dosis minimas requeridas para un control efectivo,
que
oscilan entre (1000-1750 Gy), suelen resultar fitotoxicas (Barkai-Golan, 1992). Por ello,
una
alternativa seria el uso de dosis inferiores en combinacion con otros tratamientos
complementarios como el calor o fungicidas. Tambien se ha estudiado la exposicion a
radiacion UV. Una exposicion a bajas dosis (0,5-8 KJ/m2) de una longitud de onda de
entre
100-280 nm produce una reduccion significativa de la incidencia de las podredumbres
verde
y azul en diferentes especies de citricos y cultivares, aunque la efectividad del
tratamiento y
el riesgo de fitotoxicidad varia con la dosis de radiacion y duracion, tipo y madurez del
fruto y
las condiciones de almacenamiento (Kinay et al. 2005; Droby et al. 1993), por lo que no
existe una dosis fija que se pueda recomendar de forma general.
Como tratamientos fisicos complementarios a otros tratamientos antifungicos de

postcosecha pueden citarse la conservacion frigorifica (a 3-5 C para naranjas y

mandarinas)
_____________________________Introduccion______________________________

-9y la conservacion frigorifica en atmosferas controladas convencionales (5-10 % O 2 + 05%

CO2), atmosferas con monoxido de carbono (5-10 % CO) (Kader y Arpaia, 2002),
atmosferas
de baja presion o hipobaricas (75-175 mm Hg) (Spalding y Reeder, 1976) y atmosferas
ionizadas (0,1-1,0 ppm O3) (Palou et al. 2007) y la eliminacion de etileno de las zonas
de
almacenamiento (Wills et al. 1999) . Estos tratamientos no poseen actividad fungicida
por si
solos, pero si tienen actividad fungistatica. Ademas, ralentizan la actividad metabolica
del
fruto y retrasan su entrada en senescencia, ayudando a mantener la resistencia del
fruto a la
infeccion.
El efecto del ozono (O3) en el crecimiento y la virulencia de los hongos patogenos
causantes
de podredumbres tambien han sido estudiados. Concentraciones muy bajas de O3
causan la
inhibicion del crecimiento del micelio y la esporulacion de muchos hongos, incluyendo
B.
cinerea y Sclerotinia sclerotiorum en zanahorias (Liew y Prange, 1994), fresas (Nadas
et al.
2003), y uvas (Palou et al. 2002), P. digitatum en frutos citricos (Harding, 1968; Palou
et al.
2001), y Rhizopus stolonifer en uvas de mesa (Sarig et al. 1996). Desafortunadamente,
las
concentraciones de O3 que inactivan los conidios son relativamente altas y no pueden
ser
usadas sin un total confinamiento del gas y la proteccion de los trabajadores al mismo.
El
equipamiento para generar y aplicar altas concentraciones de O 3 se ha desarrollado
comercialmente (Tahoe Food Inc., Sparks NV, USA) y es utilizado experimentalmente
para el
control postcosecha de la podredumbre gris de las uvas causada por B. cinerea (Mlikota
Gabler et al. 2010).
1.3.2.2 Control Quimico
Los productos quimicos alternativos a los fungicidas de sintesis tradicionales para el
control
de las enfermedades postcosecha deben ser sustancias naturales o sinteticas con
minimos
efectos sobre el medio ambiente, personas y animales. El origen de estas sustancias
alternativas incluye tanto aditivos alimentarios como aquellas sustancias consideradas
GRAS
(Generally Regarded as Safe) por la Food and Drug Administration de los Estados
Unidos:
componentes naturales obtenidos de plantas, animales y microoganismos (TroncosoRojas y
Tiznado-Hernandez, 2007).
Como componentes naturales pueden incluirse los volatiles de las plantas.
Especialmente

efectivos contra P. digitatum y P. italicum son los jasmonatos (Droby et al. 1999) y
algunos
componentes del aroma, como acetaldehido, benzaldehido, etanol, etilformato y 2nonanona (Yuen et al. 1995). Las plantas aromaticas, tales como citrus, producen
aceites
esenciales que basicamente contienen terpenos volatiles tales como el citral, que es un
componente antifungico que representa la primera linea de defensa del flavedo de los
frutos
citricos a la infeccion por P. digitatum (Rodov et al. 1995). La eficacia in vitro del citral
depende del metodo de aplicacion pero la aplicacion in vivo resulto ser fitotoxica y no
prometedora (Klieber et al. 2002). La segunda linea de defensa descrita en frutos
citricos
incluye la sintesis de fitoalexinas, principalmente, cumarinas tales como escoparona,
escopoletina y escopolina. Angioni y colaboradores (1998) aislaron una cumarina, 7_____________________________Introduccion______________________________

- 10 geranoxicumarina, de la piel del pomelo, un componente fenolico que reduce

eficazmente la
podredumbre y no fue fitotoxico.
El acido amino aminobutirico (BABA) se ha convertido en una prometedora alternativa
natural a los fungicidas de sintesis debido a que produce la induccion de las respuestas
de
defensa de las plantas (Jakab et al. 2001) y a su actividad antifungica (Tavallali et al.
2008).
Algunos investigadores han senalado que el BABA podria inhibir el crecimiento de P.
digitatum (Porat et al. 2003), ademas de otros hongos filamentosos como Sclerotinia
sclerotiorum (Marcucci et al. 2010) y Botrytis cinerea (Fischer et al. 2009).
Polvos, geles y extractos de solventes organicos de plantas de diferentes origenes,
como Aloe
vera (Saks y Barkai-Golan, 1995) o Thymus sp., Cistus sp. y Myrtus sp. (Ameziane et al.
2007),
tambien presentan actividad contra P. digitatum y P. italicum bajo diferentes
condiciones
experimentales. Ademas, las plantas y animales producen una amplia variedad de
peptidos y
pequenas proteinas con actividad antimicrobiana que forman parte de los mecanismos
de
defensa contra las infecciones fungicas. Algunos peptidos poseen actividad antifungica
frente
a P. digitatum y P. italicum, como por ejemplo el hexapeptido sintetico PAF26, que es
capaz
de controlar moderadamente las podredumbres de los citricos incluso por cepas de
hongos
patogenos resistentes a otros fungicidas (Lopez-Garcia et al. 2002, 2003). Ciertas
formulaciones de quitosano, que es un constituyente primario de crustaceos, insectos o
las
paredes celulares de hongos, tienen actividad antifungica in vivo contra P. digitatum o
P.
italicum, reduciendo su actividad en frutos citricos y retardando la senescencia del
fruto
durante los largos almacenamientos en frio (El-Ghaouth et al. 2000; Benhamou, 2004;
Chien
et al. 2007).
Existe una gran cantidad de aditivos alimentarios como acetatos, sorbatos, benzoatos,

propinatos, formatos, cloruros, fosfatos etc. Los mejores resultados para el control in
vivo de
P. digitatum en citricos se obtuvieron con el sorbato potasico y el benzoato sodico
(Palou et
al. 2002). Los tratamientos con carbonato sodico (Na2CO3) y el bicarbonato sodico
(NaHCO3)
son ampliamente utilizados desde hace anos porque son aditivos alimentarios efectivos
y
baratos permitidos sin ninguna restriccion para muchas aplicaciones en la agricultura
organica (Smilanick et al. 1999). El uso de estos aditivos junto con inmersiones
prolongadas
en soluciones calientes permiten un buen control de las podredumbres de citricos
(Palou et
al. 2002).
1.3.2.3 Control biologico
El control biologico se basa en la utilizacion controlada de microorganismos que
antagonizan
con los microorganismos patogenos.
Diversos microorganismos han demostrado su eficacia en el control de P. digitatum y/o
de P.
italicum, como son las levaduras Candida oleophila y Pichia anomala (Lahlali et al.
2004;
Droby et al. 1998), C. saitoana (El Ghaouth et al. 2000), Kloeckera apiculata (Long et
al. 2007)
Debaryomyces hansenii (Singh, 2002), Metschnikowia fruticola y Metschnikowia
pulcherrima
_____________________________Introduccion______________________________

- 11 (Kinay y Yildz, 2008) y Saccharomycopsis schoenii (Pimenta et al. 2008); las bacterias
Pantoea
agglomerans (Teixido et al. 2001;Torres et al. 2007), Bacillus subtilis (Obagwu y
Korsten,
2003), Pseudomonas syringae (Smilanick et al. 1996) y Pseudomonas cepacia (Huang
et al.
1993); y los hongos Aureobasidium pullulans (Wilson y Chalutz, 1989), Trichoderma
viride
(Borras y Aguilar, 1990), Cryptococcus laurentii (Zhang et al. 2004) y Verticillium
lecanii
(Benhamou y Brodeur, 2000).
Dependiendo del tipo de antagonista, el patogeno y el fruto huesped, existen
diferentes
modos de accion que pueden explicar la actividad de biocontrol del microorganismo
antagonista: competicion por nutrientes y espacio, secrecion de antibioticos o la
induccion
de los mecanismos de defensa del huesped (Wilson y Wisniewski, 1994; Droby et al.
1992).
Normalmente, los antagonistas se aplican sobre los frutos citricos en bano o drencher
como
suspensiones acuosas. Algunos se han ensayado como tratamientos precosecha (Droby
et al.
1992) y otros como ingredientes activos en recubrimiento del fruto (McGuire, 1994; ElGhaouth et al. 2001). Un caso atipico son las biofumigaciones de citricos almacenados
con
componentes volatiles producidos por el hongo antagonista Muscodor albus (Mercier y
Smilanick, 2005). Los inconvenientes asociados a la utilizacion de microorganismos

antagonicos son la falta de actividad curativa, la alta variabilidad en los resultados

obtenidos
y la dificultad de desarrollar formulaciones para su comercializacion. A pesar de ello
presentan un gran potencial como tratamiento complementario a otros tratamientos ya
sean
fisicos o quimicos.
Aunque a nivel experimental se han encontrado y patentado en laboratorios de todo el
mundo numerosas levaduras, bacterias y tambien hongos filamentosos con capacidad
antagonica contra las podredumbres verde y azul de los citricos, unicamente unos
pocos
productos han sido comercializados: BiosaveTM (Pseudomonas syringae, Jet harvest
solutions, USA), ShemerTM (Metschnikowia fructicola, Bayer Crop Science, AG),
PantovitalTM
(Pantoea agglomerans, Biodurcal S.L., Spain), SerenadeTM (Bacillus subtilis, AgraQuest,
USA)
y BoniprotectTM (Aureobasidium pullulans, Bioprotect, Germany) son algunos de los
productos comerciales actualmente existentes.
1.3.2.4 Combinacion de tratamientos para el tratamiento integral de
enfermedades
Todos los sistemas alternativos ensayados no cubren el espectro de accion de los
fungicidas
quimicos de sintesis ni son tan consistentes como estos. Un tratamiento exitoso para el
control de las enfermedades postcosecha de frutos debe ser extremadamente
eficiente, en
el rango del 95-98 %. Por esta razon, actualmente se esta evaluando la integracion de
dos o
mas sistemas compatibles o complementarios. Tres son los objetivos que deben reunir
estos
tratamientos: tener un efecto aditivo o sinergico para aumentar la efectividad o la
persistencia de los tratamientos individuales; tener efectos complementarios para
combinar
actividades curativas y preventivas; y finalmente deben ser aplicables a nivel
comercial.
Para reducir el potencial impacto negativo de los tratamientos antifungicos en la
calidad de
los frutos citricos, el curado y los tratamientos de agua caliente han sido combinados
con
_____________________________Introduccion______________________________

- 12 envases individuales de plastico para la fruta (Rodov et al. 2000), radiaciones

ionizantes a
bajas dosis (Spalding et al. 1987; Barkai-Golan et al. 1969), tratamientos UV
(Dhallewin et al.
1994) o breves choques de CO2 (Palou et al. 2008). Tambien han sido ampliamente
estudiadas las soluciones acuosas calientes de cualquiera de los fungicidas
convencionales
(Schirra y Mulas 1995; Schirra et al. 1997; 1998) con quimicos alternativos de baja
toxicidad,
tales como carbonato sodico y bicarbonato sodico (Palou et al. 2001), sorbato potasico
(Smilanick et al. 2008), benzoato sodico y molibdato amonico (Palou et al. 2002),
etanol,
dioxido de azufre (Smilanick et al. 1995), de forma que aumentan significativamente su
efectividad frente a las podredumbres de Penicillium y otras enfermedades
postcosecha de

citricos. El calor probablemente facilita la captacion de los ingredientes activos a traves

de la
cuticula del fruto de un modo similar a como se facilita por los tratamientos por
inmersion en
comparacion con las aplicaciones de spray o drencher (Brown y Baraka, 1996;
Porat et al.
2002).
Los tratamientos de calor y la aplicacion de los microorganismos antagonistas son
tratamientos complementarios que normalmente muestran efectos sinergicos en el
control
de las enfermedades postcosecha causadas por Penicillium. Entre los microorganismos
utilizados se incluyen C. oleophila (Lanza et al. 2004), C. famata (Dhallewin et al.
1999), B.
subtilis (Obagwu et al. 2003) y P. agglomerans (Plaza et al. 2004).
A parte de los tratamientos de calor, tambien se han desarrollado otros medios fisicos
de
control como son la radiacion UV y las atmosferas controladas, que se han combinado
con la
aplicacion de microorganismos antagonistas para el control de las podredumbres
verdes y
azul de frutos citricos. La aplicacion de radiacion UV en combinacion con la levadura
antagonista D. hansenii inhibe completamente el desarrollo de P. digitatum en
mandarinas
Dancy (Stevens et al. 1997). Tambien se han estudiado combinaciones con los
fungicidas
convencionales, como es el tiabendazol, el cual empleado a una concentracion de 200
g/mL
en combinacion con C. oleophila tiene los mismos efectos en el control de las
podredumbres
en frutos citricos que los obtenidos con el tratamiento comercial de tiabendazol, que
normalmente se usa en unas concentraciones superiores (Droby et al. 1998).
Combinaciones
con otros quimicos de baja toxicidad como el etanol (Lanza et al. 2004) o el acido
oxalico
(Arras et al. 2008) tambien aumentan la eficacia del biocontrol contra P. digitatum y P.
italicum. El cloruro de calcio en frutos citricos aumenta el efecto del antagonista P.
guilliermondii y tambien reduce la poblacion de levaduras requeridas para obtener un
control efectivo (Droby et al. 2002). Sin embargo el carbonato sodico y el bicarbonato
sodico
son los aditivos que han sido mas ampliamente evaluados por su actividad sinergica
con
microorganismos antagonistas. La combinacion de estos componentes con P. syringae
(Smilanick et al. 1999), P. agglomerans (Usall et al. 2008), C. oleophila (Lanza et al.
2004), B.
subtilis (Obagwu et al. 2003) y C. laurentii (Zhang et al. 2004) produjo mejores
resultados que
los tratamiendo individuales en el control de las podredumbres verde y azul en
diferentes
especies de citricos y cultivares.
La aplicacion de microorganismos de biocontrol o sustancias naturales en postcosecha
solo
ha tenido resultados preventivos, por lo que el control de los patogenos postcosecha no
_____________________________Introduccion______________________________

- 13 -

puede basarse solamente en la aplicacion de estas estrategias, sino en la combinacion

de
practicas apropiadas, tales como metodos de recoleccion y manejo de fruta que
minimicen la
contaminacion y aparicion de heridas, metodos de desinfeccion superficial que impidan
la
contaminacion cruzada de la fruta en la linea de confeccion y el uso de sustancias
naturales
que potencien la accion de los microorganismos antagonistas y tengan accion curativa
sobre
infecciones ya establecidas.