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Microscopía Óptica Instrumentación y Principios
Microscopía Óptica Instrumentación y Principios
instrumentación y
principios
Autor:
Control de
iluminación
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Técnicas de microscopía aplicadas a las Ciencias Forenses: Sesión 2 Máster en Ciencias Forenses
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Refracción
Pavimento
Aire Cristal suelto
Esta primera
rueda frena
Onda
incidente
La
componente Pavimento Eje
que incide perpendicular
primero consolidado
se ralentiza La onda se comprime y se
primero dobla en el límite del medio
que produce la desaceleración
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Aumentos y Orientación I
Posición Imagen
Las líneas de puntos son actual aparente
perpendiculares a la
superficie de la lente
Una lente biconvexa
Dirección de curva la luz en la misma
la luz dirección cuando entra
y cuando sale
Frog gastrula, saggital section; arrow indicates
yolk plug
rápido lento rápido
arriba
Objeto Imagen
real proyectada
izquierda derecha
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Aumentos y Orientación II
object
focal
point
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Aumentos
Aumentos finales
usando una lente
simple (por ejemplo un
estereomicroscopio)
La misma imágen:
usando un
microscopio óptico
compuesto
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Resolución
0.61λ
Resolución (d) =
n sin α
λ = Longitud de onda de la luz; n = índice de refracción
0.2 µm
Escala de
resolución
teórica 5 µm 2 µm
1 µm 0.4 µm
Escala de
resolución
de una 1
µm
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Campo visual y profundidad de campo
escala = 5 mm
cubreobjeto (#1) 0.15
mm thick
Profundidad de una
Volumen de espacio observado
típica muestra 100x
montada en humedat 40x
40x 0.1 mm
400x
100x 1000x
Grosor del portaobjeto
normal
400x 1 mm
1000x
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Campo visual e intensidad de la luz
Aumento final 100x 400x 1,000x
Quantity of
light
Diámetro de
campo real 2 mm 0.5 mm 0.2 mm
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El contraste y el condensador
Vista superior de un condensador con Apertura del condensador: tres posiciones
selector de filtros
Totalmente
cerrado
Resolucióny
contraste
Vista lateral del condensador optimizados
Totalmente
abierto
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Contraste y variación en el condensador
Tres imágenes de Paramecium caudatum (vacuolas alimentarias con células de levadura)
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Enfocando multiples surperficies
objetivo
Esquema no a
escala
Condensador
abierto para una
mayor claridad
Dirección del
enfoque
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Observando a través del especimen
Enfocando a través de un filamento de Spirogyra (400x)
Siguiente Siguiente
paso paso
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Microscopía con aceite de inmersión
Diffracción La difracción es
severa que minimizada con el
compromete una uso de aceite de
buena inmersión
resolución
A B
A: Bacteria at 400x B: Bacteria at 1000x Con
Aumentos en seco un objetivo de inmersión
mostrando una imagen (Porción central del
borrosa (Resolución campo de visión de A)
pobre)
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Uso del objetivo de inmersión
1 2 3 4
Enfocar en seco con el Mover el revólver y Colocar una gota de Colocar cuidadosamente el
objetivo de mayor dejarlo en una posición aceite de inmersión objetivo de inmersión sobre el
aumento. entre dos objetivos sobre el espécimen espécimen
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Disposición de aceite sobre el cubreobjetos
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Enfoque con un objetivo de inmersión
Alto o bajo
correcto
Imagen no visible Imagen no visible
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Ajuste de los oculares
Separación de los ojos Enfoque del ocular
(girar para enfocar)
centro
Totalmente Imagen doble Totalmente
abierto cerrado
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Lentes sucias?
Si ve marcas contra un campo Si las marcas no están en Manchas fuera de foco pueden
vacío, mueva la muestra de la preparación, girar el aparecer en el condesador. Para
izquierda a derecha ocular saberlo
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Comparación de los
distintos tipos de
microscopía óptica
Autor:
Dave Caprette
Comparación de los tipos de microscopía óptica
Spirogyra Bacillus Amoeba proteus
Campo
claro
Campo
oscuro
(top) bright field
(bottom) D.I.C.
Contraste 400x
fases
“D.I.C.,”
(off axis
condenser)
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Microscopía de campo claro
Imagen de la Campo
Objetivo muestra* claro
muestra
platina
Condensador
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Microscopía de campo oscuro
Imagen de la Campo
Objetivo muestra* oscuro
Luz
dispersat muestra
Platina
condensador
Filtro opaco
Diámetro del
campo visual
Filtro luz de día
luminosa
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Microscopía de contraste de fase
Imagen
proyectada Objetivo Membrana halo
(no se plasmática
esquematizan
Luz alterada todos sus
por la muestra componentes
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Microscopía Contraste Interdiferencial
(Nomarski)
Polarized light
a
Dirección de la vibración (luz que llega al
observador)
b
(a) luz blanca (no polarizada)
(b) Filtro polarizador
(c) Luz polarizada Amoeba proteus (100x):
(a) imagen de campo claro; (b)
D.I.C. Efecto obtenido al ajustar el
condensador
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Técnicas de microscopía aplicadas a las Ciencias Forenses: Sesión 2 Máster en Ciencias Forenses
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