2 Modulo Iii

MÓDULO III: MÉTODOS
INSTRUMENTALES
Métodos ópticos:
Espectrofotometría de
Ultravioleta visible molecular
ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
SANDRA LILIANA MOLINA CORREA
UNIVERSIDAD DE LA SABANA
2
REGIÓN DEL ESPECTRO DE RADIACIÓN
ELECTROMAGNÉTICA
 La radiación ultravioleta
abarca entre 160 nm a 400
nm, región de alta energía,
por lo cual este tipo de
radiación puede generar
quemaduras o lesiones en
los ojos
 La radiación visible abarca

entre 400 nm a 780 nm, en
esta zona podemos
Tomado de: Skoog, D.A.; Holler, F.J.; West, D.M; Crouch, S.R. (2015) Fundamentos de Química Analítica.
México: Cengage Learning Editores. Pág 654 observar el color de las
Presentación desarrollada por Sandra Liliana Molina Correa
sustancias.
3
PROCESO DE INTERACCIÓN MATERIA Y
ENERGÍA (hυ)
La interacción materia y energía (particularmente, la región de ultravioleta-visible) por
una especie atómica o molecular M se puede considerar como un proceso de dos
etapas:
PRIMERA ETAPA: Excitación SEGUNDA ETAPA: Relajación electrónica

electrónica (absorción). Este estado (emisión). Liberación de energía en forma
tiene una existencia corta de calor, radiación electromagnético o
∗ reorganización de enlaces
𝑀 + ℎ𝜐 → 𝑀 𝑀∗ → 𝑀 + ℎ𝜐
E1 E1
E0 E0
4
PROCESO DE INTERACCIÓN MATERIA Y
ENERGÍA (hυ)
PRIMERA ETAPA: Excitación En la

electrónica (absorción). Este espectrofotometría de
estado tiene una existencia corta ultravioleta visible
𝑀 + ℎ𝜐 → 𝑀 ∗ molecular nos
centraremos en la
E1
medición de lo que
ocurre en el primer
E0 paso
ESPECIES 5
ABSORBENTES
¿Qué son? ¿Quiénes son? Tipos
Son las especies susceptibles Electrones de valencia de

Contienen electrones π, δ y
a la interacción materia y los átomos que constituyen
n
energía una molécula
Específicamente con la Pueden ser los que

energía que contempla la participan en los enlaces Contienen electrones d y f
región UV- Vis químicos
Pueden ser electrones que

Contienen electrones de
no participan en enlaces
transferencia de carga
químicos
ESPECIES 6
ABSORBENTES
¿Qué son? ¿Quiénes son? Tipos
Son las especies susceptibles Electrones de valencia de los

Contienen electrones π, δ y n:
a la interacción materia y átomos que constituyen una
Compuestos orgánicos
energía molécula
Contienen electrones d y f:
Específicamente con la
Pueden ser los que participan Compuestos inorgánicos con
energía que contempla la
en los enlaces químicos metales de transición,
región UV- Vis
lantánidos y actínidos
Pueden ser electrones que no Contienen electrones de

participan en enlaces transferencia de carga:
químicos Compuestos de coordinación
ESPECIES ABSORBENTES
CON ELECTRONES δ, π y n 7
Quiénes Inconvenientes Tipos de

Cromóforos
pertenecen experimentales electrones
Compuestos que
Todos los compuestos
Con los hidrocarburos absorben por encima Enlazantes: δ y π
orgánicos
de 185 nm
Especies que presentan

Algunos aniones Absorben por debajo electrones de valencia
No enlazantes: n
inorgánicos de 185 nm con energía de
excitación bajas
Y los componentes
atmosféricos, absorben
en este rango.

FORMACIÓN DE ENLACE TRANSICIONES CON 8
COVALENTE ELECTRONES δ, π y n
𝐴 + 𝐵 → 𝐴𝐵
δ* Antienlazante
Orbital π* Antienlazante
molecular
antienlazante
n→δ*
n→π*
π→π*
δ→δ*
ENERGÍA
A B n No enlazante
Orbital Orbital
atómico atómico π Enlazante
AB
Orbital molecular δ Enlazante
enlazante

TRANSICIONES CON ELECTRONES δ, π y n 9
Característica δ→δ* n→δ* n→π* π→π*
Debe tener Debe tener
un elemento un elemento
Condición con con Debe tener
Debe tener
para que electrones electrones dobles o
enlace
exista la libres y ese libres y ese triples
sencillo
transición mismo mismo enlaces
enlace enlace
sencillo doble o triple
Longitud de
λ<185 nm 150-200 nm 200-700 nm 200-700 nm
onda
Coeficiente de Bajo a Intermedio a
absortividad --- intermedio Bajo (10-100) alta (1000-
molar (100-3000) 10000)
En presencia de solventes
polares, la longitudes de Es la más El coeficiente de absortividad molar
Observación No es útil
onda tienden a desplazarse importante indica la probabilidad de que ocurra la
a unas más cortas transición.
10
EJERCICIO 10
Determinar el tipo de transiciones electrónicas que pueden presentar las

siguientes estructuras

11
EJERCICIO 10

δ→ δ* δ→ δ*
n→ δ* δ→ δ* n→ δ*
n→π* n→ δ* n→π*
π→π* π→π*

12
EJERCICIO 10

Nicotina: es un alcaloide Mentol: es uno de los

presente en el tabaco componentes principales del
aceite esencial de la menta Cianidina: es un flavonoide que es un
pigmento natural
13
dz2 dx2-y2 ESPECIES ABSORBENTES QUE
CONTIENE ELECTRONES d Y f
ENERGÍA=hυ
A este conjunto
Este fenómeno se
pertenecen
presenta:
compuestos con:
dxy dxz dyz dz2 dx2-y2
Metales de En presencia de
transición solventes
dxy dxz dyz Por la degeneración

Lantánidos
de los orbitales d o f
Orbitales d, del complejo

Cu(H2O)6+2 Actínidos

ESPECIES ABSORBENTES QUE 14
CONTIENEN ELECTRONES DE
TRANSFERENCIA DE CARGA
A este grupo
Importancia
pertenecen: 𝑀𝐿 + ℎ𝜐 → 𝑀+ 𝐿−
+ -
Compuestos de Alta: es una de
M L
coordinación o las más usadas
complejos en la vida real
ML
Presenta altos
coeficientes de
absortividad
Medida de
atenuación de la luz
Luego de pasar por una
muestra 15
TRANSMITANCIA
𝑃𝑇
Como fracción: 𝑇 =
𝑃𝑂
Matemáticamente
PO PT
es:
𝑃
Como porcentaje: %𝑇 = 𝑃𝑇 ×
𝑂
100%
El blanco es todos los

Celda con muestra
componentes en la muestra
problema, menos el analito.
Importante, para no tener en

Tener en cuenta,
medir un blanco
cuenta procesos de absorción PO
de otros componentes
Importante para no tener en

cuenta procesos no
espectroscópicos.

Celda con blanco
16
ABSORBANCIA
Método alternativo para expresar 0,7
cuantitativamente la atenuación de la 0,6

luz. Es más utilizada que la transmitancia
0,5
ya que es directamente proporcional a la
Absorbancia
concentración, por lo cual puede 0,4
obtenerse curvas de calibración lineales. 0,3
𝐴 = − log 𝑇 0,2
0,1
𝐴 = 2 − log %𝑇 0
0 2 4 6 8 10
Concentración
17
EJERCICIO 11
Una muestra tiene un porcentaje de transmitancia de 50,0%, determinar

la absorbancia de esta muestra (CIFRAS SIGNIFICATIVAS)

18
EJERCICIO 11
Una muestra tiene un porcentaje de transmitancia de 50,0%, determinar

la absorbancia de esta muestra (CIFRAS SIGNIFICATIVAS)
𝐴 = − log 𝑇 = − log 0,500 = 0,301
𝐴 = 2 − log %𝑇 = 2 − log 50,0% = 0,301

19
ABSORBANCIA Y CONCENTRACIÓN:
LEY DE LAMBERT-BEER
LAMBERT-BEER
Es válida con luz
monocromática
LEY DE
PO PT Ley de Beer:𝐴 ∝ 𝐶
Ley de Lambert: 𝐴 ∝ 𝑏
Ecuación
𝑨 = 𝒂𝒃𝑪 𝒐 𝑨 = 𝜺𝒃𝑪
20
COEFICIENTE DE ABSORTIVIDAD
El coeficiente de absortividad (a) esta dado para

cualquier unidad de concentración, pero en caso de
𝑨 = 𝒂𝒃𝑪 que la concentración esté dada en molaridad, nos
referiremos a coeficiente de absortividad molar (ε).
El coeficiente de absortividad o coeficiente de

absortividad molar, indica la probabilidad que un
𝑨 = 𝜺𝒃𝑪 analito absorba un fotón con una energía dada. Por lo
tanto depende de la longitud de onda de la
radicación electromagnética
21
ESPECTRO DE ABSORCIÓN
Se mide en una solución (concentración
constante)
El experimento se lleva a cabo en un

paso (el recipiente donde se ubica la
solución no cambia)
𝑨 = 𝜺𝒃𝑪
Se mide la absorbancia de la misma
solución a diferentes longitudes de Es la que puede generar el única variable
onda
cambio en la absorbancia.
Cambia la absorbancia, sin cambios en la Al cambiar de longitud de onda, cambia la

concentración o en el espesor del probabilidad de que ocurra la transición
recipiente.
Varia la energía, y las transiciones ocurren a
Presentación desarrollada por Sandra Liliana Molina Correa una única cantidad de energía.
22
EJERCICIO 12
Una solución 5.00X10-4 M de una analito es puesta en una

celda de espesor 1,00 cm. Cuando hace la medida a una
longitud de onda de 490 nm, la absorbancia de la solución
es de 0,338. Determinar el valor del coeficiente de
absortividad molar a esta longitud de onda?

23
EJERCICIO 12
Una solución 5.00X10-4 M de una analito es puesta en una

celda de espesor 1,00 cm. Cuando hace la medida a una
longitud de onda de 490 nm, la absorbancia de la solución
es de 0,338. Determinar el valor del coeficiente de
absortividad molar a esta longitud de onda?
𝐴 0,338 −1 −1
𝜀= = −4
= 676𝑐𝑚 𝑀
𝑏𝐶 (1,00𝑐𝑚)(5,00 × 10 𝑀
24
EJERCICIO 13
Cuál es el peso molecular (PM) de un compuesto

cuya absortividad molar es de 875 cm-1M-1 y cuya
solución de concentración de 175 ppm presenta un
porcentaje de transmitancia de 43,0%.

25
EJERCICIO 13
Cuál es el peso molecular (PM) de un compuesto

cuya absortividad molar es de 875 cm-1M-1 y cuya
solución de concentración de 175 ppm presenta un
porcentaje de transmitancia de 43,0%.
418 g/mol
LIMITACIONES DE LA LEY 26
Alta concentración
DE LAMBERT-BEER
Propias: se adapta
Cambio en el índice de refracción
Químicas: se El analito puede estar en un equilibrio y cambia la

eliminan forma de interacción con la luz
Luz monocromática
Instrumentales: se
eliminan
Radiación parásita

LIMITACIONES DE LA LEY
Alta concentración 27
Propias: se
adapta La distancia media entre las moléculas
DE LAMBERT-BEER
Cambio en el índice de disminuye y esto altera la distribución

refracción de carga de las moléculas vecinas.
El analito puede estar en un Altera la capacidad de absorber

Químicas: se
equilibrio y cambia la forma de radiación de una determinada longitud
eliminan interacción con la luz
de onda.
Luz monocromática
Instrumentales:
se eliminan
𝑪 ≤ 𝟎, 𝟏 𝑴
Slón diluida Slón. concentrada
28
Alta concentración El coeficiente de absortividad es
función del índice de refracción (η).

Propias: se
adapta
DE LAMBERT-BEER
Cambio en el índice En la mayoría de los casos C<0,1M, el

de refracción índice de refracción es constante.
El analito puede estar en un Si hay cambio es necesario hacer una

Químicas: se
equilibrio y cambia la forma de corrección a la Ley de Lambert-Beer
eliminan interacción con la luz
Luz monocromática 𝐴 = ε𝑏𝑐

Instrumentales:
se eliminan
𝜀𝜂
𝐴= 2 2 𝑏𝑐
(𝜂 + 2)
El analito se disocia, asocia o
reacciona con un disolvente para dar
lugar a un producto con un espectro 29
de absorción diferente al del analito.
1 Alta concentración
0,9
0,8 Propias: se
ABSORBANCIA
adapta
DE LAMBERT-BEER
0,7
0,6 Cambio en el índice de
0,5
refracción
0,4
0,3
0,2 El analito puede estar en un
Químicas: se
0,1
equilibrio y cambia la forma
0 eliminan
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 de interacción con la luz
CONCENTRACIÓN
Luz monocromática
+ −
𝐻𝐼𝑛 ⇌ 𝐻 + 𝐼𝑛 Instrumentales:
se eliminan

LIMITACIONES DE LA LEY Alta concentración
DE LAMBERT-BEER Propias: se
adapta
30
Cambio en el índice de
refracción
El analito puede estar en un

Químicas: se
eliminan de interacción con la luz
Luz monocromática
Instrumentales:
se eliminan
Necesario, para cumplimiento de la Ley de Beer sólo se observa cuando la

radiación es realmente
Los dispositivos que filtran la señal de salida de una fuente continua generan
una banda de longitudes de onda más o menos simétrica en torno a la
deseada.
Este defecto no es detectable cuando a las diferentes longitudes de onda el
coeficiente de absortividad molar es el mismo.
31
Alta concentración
Propias: se
adapta
DE LAMBERT-BEER
Cambio en el índice de
refracción
El analito puede estar en un

Químicas: se
eliminan
de interacción con la luz
Luz monocromática
Instrumentales:
se eliminan
Compartimiento
La radiación parásita es el resultado de dispersiones y
reflexiones de la radiación de la fuente, en varias superficies.
La radiación parásita difiere en su longitud de onda de la
radiación principal y puede no haber atravesado la muestra.
de la celda negro
y opaco
32
INSTRUMENTACIÓN: Fuente de
radiación
Sistema de
FUENTE DE Receptáculo tratamiento de
Monocromador Detector
RADIACIÓN de la muestra la señal y
lectura
➢ Generar radiación con potencia suficiente para que se detecte y se mida

con facilidad.
➢ La potencia de salida estable
➢ EJEMPLOS:
Lámpara halogenada de tungsteno. Utilizada en el visible y cerca de la región
espectral ultravioleta (por encima de los 330 nm).
Lámpara de deuterio. Utilizada en la región UV, por debajo de los 330 nm.
Lámpara de arco xenón. dan un continuo que va desde menos de 190 nm y
por encima de 1000 nm
INSTRUMENTACIÓN: Receptáculo de la
muestra 33
Sistema de
Fuente de RECEPTÁCULO tratamiento de
radiación DE LA MUESTRA la señal y
lectura
Lugar donde se
ponen las celdas
Receptáculo de la
Compartimiento de
la celdas
Evita radiación
Es negro y opaco
muestra
parásita
Lugar donde se pone Cuarzo 190-2500 nm

la solución a medir
Celdas
Hechas de un Vidrio 340-2500 nm
material invisible
Poliestireno 230-900 nm
Plástico
Polimetilmetacrilato 230-900 nm

Tomado de: https://www.brand.de/es/productos/productos-life-science/cubetas-cubetas-uv/datos-tecnicos/
34
INSTRUMENTACIÓN: Monocromador
Sistema de
Fuente de Receptáculo tratamiento de
radiación de la muestra la señal y
lectura
➢ Tiene la tarea de filtrar la radiación generar un

grupo limitado, estrecho y continuo de longitudes
de onda denominado banda (cumplimiento de
luz monocromática)
➢ Una anchura de banda estrecha aumenta la

sensibilidad de las medidas de absorbancia (mejor
detección a baja concentraciones)
Tomado de: https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Photometer_mit_Monochromator.png

INSTRUMENTACIÓN 35
Sistema de
Fuente de Receptáculo de la
Monocromador Detector tratamiento de la
radiación muestra
señal y lectura
Transforma la radiación electromagnética

Definición
DETECTOR
monocromática en una señal eléctrica

Genera un pequeño flujo de corriente, el cual es amplificado y
medido en forma proporcional a la cantidad de radiación
Tubo fotomultiplicador incidente sobre el detector.
Tipos Mide a una sola longitud de onda y eso hace que se menos
Detector de arreglo de utilizado, a pesar de ser el más sensible.
diodos
Tomado de:
https://commons.wikimedia.org/wiki/File:PhotoMultiplierTubeAndScintillator.svg

INSTRUMENTACIÓN 36
Sistema de
Fuente de Receptáculo de la
Monocromador Detector tratamiento de la
radiación muestra
señal y lectura
Transforma la radiación electromagnética

DIODOS
Definición monocromática en una señal eléctrica
DETECTOR
Tubo fotomultiplicador
REJILLA
Emplea un gran número de diodos de
silicio dispuestos lado a lado en un solo
Tipos chip.
Cuando la radiación UV-VIS cae en el

Detector de diodo, su conductividad aumenta
arreglo de significativamente Este aumento es
diodos proporcional a la intensidad de la
radiación.
Se mide a varias longitudes de onda. El

más utilizado, mejora la eficiencia del
trabajo experimental

INSTRUMENTACIÓN
37
Sistema de
Fuente de Receptáculo tratamiento de
radiación de la muestra la señal y
lectura

38
Curva de
calibración
Adición
UN ANALITO
estándar
APLICACIONES Patrón interno

CUANTITATIVAS
Aditividad
MÁS DE UN
ANALITO
Análisis lineal
de múltiples λ
39
Curva de
calibración
Adición
UN ANALITO
estándar

CUANTITATIVAS
Aditividad
MÁS DE UN
ANALITO
Análisis lineal
de múltiples λ
40
APLICACIONES CUANTITATIVAS: un
analito
Calibración: proceso que relaciona la señal analítica medida con la

concentración del analito
MÉTODOS DE CALIBRACIÓN
Curva de
Adición
calibración Patrón interno
estándar
sencilla
41
analito

Curva de
Adición
estándar
sencilla
También conocida como curva
patrón o curva analítica
42
Fundamentos En muestras sencillas
Se usa en:
No presentan errores instrumentales significativos
Preparar soluciones estándar de
forma exacta y precisa* CURVA DE CALIBRACIÓN
Sólido: disolverla en el solvente adecuado
3,5
Preparar la muestra problema 3
SEÑAL ANALITICA
Líquido: diluirla en el solvente adecuado 2,5
2
Parte 1,5
Preparar el blanco Contiene todo, menos el analito 1
experimental
0,5
CURVA DE Seleccionar la longitud óptima de 0
CALIBRACIÓN Tener la región de “luz monocromática”
medida 0 0,5 1 1,5
SENCILLA CONCENTRACIÓN
Tanto a los estándares como a la muestra
problema y blanco
Medir la absorbancia a la longitud Por encima: Diluir la muestra
de onda seleccionada
La absorbancia de la muestra debe estar dentro
del rango de medida de los estándares
Por debajo: concentrar la muestra
Corregir la señal medida en los estándares y
muestra problema, con la del blanco**
Representar gráficamente la relación entre la Tener en cuenta que el factor de

señal analítica y la concentración correlación lineal cumpla: R2≥0,99
La pendiente representa la multiplicación

Tratamiento de εb o ab
Construir la curva de calibración
los datos Determinar la ecuación de la gráfica
El corte en el eje y, debe ser un valor
*El éxito de la curva de calibración radica en la buena preparación cercano a 0
de las soluciones estándar
De esta manera, encontrará la
**El blanco solo sirve para corregir las señales de los estándares y concentración en la solución medida
muestra problema, pero no debe ir incluida en la regresión. Reemplazar en la ecuación la señal generada
por la muestra problema.
Recuerde aplicar los factores de dilución
Presentación desarrollada por Sandra Liliana Molina Correa adicionales.
43
EJERCICIO 14
El hierro forma un complejo con 1,10-fenantrolina, el cual

presenta un máximo de absorción a 510 nm.
Volumen slón
A partir de una solución estándar de 100,0 mg/L de hierro se Absorbancia
patrón (mL)
preparó una curva de calibración tomando un volumen de
0 0,006
dicha solución el cual se llevaba a un balón aforado de 50,0 mL
y completando a volumen con agua, obteniéndose los datos 1,00 0,160
que se obtienen en la tabla: 2,00 0,313
De forma paralela, 25.00 mL de una muestra de agua 3,00 0,460
subterránea se colocaron en un matraz de 50,0 mL después de
4,00 0,619
ser tratada para formar el complejo coloreado, al igual que las
soluciones estándar, fue aforada. La absorbancia fue de 0,203. Muestra 0,203
Calcular la concentración de Fe (mg/L) en la muestra de agua
44
EJERCICIO 14
Volumen slón Concentración del Absorbancia

Absorbancia
patrón (mL) patrón diluida(ppm) corregida
0 0,006 2,00 0,154
1,00 0,160 4,00 0,307
2,00 0,313 6,00 0,454
3,00 0,460 8,00 0,613
4,00 0,619 Muestra 0,197
Muestra 0,203
𝐶1 × 𝑉1 = 𝐶2 × 𝑉2 𝐴𝑏𝑠𝑐𝑜𝑟𝑟. = 𝐴𝑏𝑠𝑚𝑒𝑑. − 𝐴𝑏𝑠𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜

EJERCICIO 14 45
0,7
0,6 Abs = 0,0762(C) + 0,001

R² = 0,9998
0,5 0,197 = 0,0762(C) + 0,001
Absorbancia
0,4
(C)= 2,57 mg/L
0,3
0,2
C2=(2,57mg/L*50,0mL)/25,00 mL
0,1 C2= 5,14 mg/L

0
0 2 4 6 8 10
Concentración de Fe (ppm)
46
analito

Curva de
Adición
estándar
sencilla
Se usa cuando la matriz es
FUNDAMENTOS
muy compleja
47
Blanco Contiene todo menos el analito
Adicionar la muestra problema

PREPARACIÓN DE LAS de manera conocida y constante
ADICIÓN ESTÁNDAR SOLUCIONES
Adicionar solución estándar del

analito, de manera variable
PARTE Soluciones de trabajo
EXPERIMENTAL
Adicionar los componentes
necesarios para tener la especie
Hacer barrido, para determinar la absorbente (opcional)
longitud óptima de trabajo
MEDICIÓN
ESPECTROFOTOMÉTRICA Llevar todas las soluciones a
Medir la absorbancia de las volumen (debe ser el mismo)
soluciones y el blanco a la
longitud de onda óptima
Tener en cuenta la concentración

de analito por parte del estándar
Corregir las señales de las

soluciones con la señal del
blanco
TRATAMIENTO DE CONSTRUIR LA CURVA DE

LOS DATOS ADICIÓN ESTÁNDAR Representar gráficamente la
señal analítica y la concentración Tener en cuenta R2≥0,99
de los estándares
Encontrar el x intercepto: esto es

una concentración en términos
de estándar
Encontrar la concentración de
analito en la muestra problema
Aplicar factor de dilución, para
expresarlo como muestra
problema
FUNDAMENTOS
muy compleja

48
ADICIÓN ESTÁNDAR
SOLUCIONES

PARTE Soluciones de trabajo Adicionar la muestra problema de manera
EXPERIMENTAL Adicionar los componentes
conocida y constante. El volumen adicionado
Hacer barrido, para determinar la absorbente (opcional) de muestra problema se denominará Vo
MEDICIÓN
ESPECTROFOTOMÉTRICA Llevar todas las soluciones a
Medir la absorbancia de las volumen (debe ser el mismo)

Adicionar solución estándar del analito, de
manera variable. El volumen adicionado de
Corregir las señales de las
soluciones con la señal del estándar se denominará Vs
blanco
TRATAMIENTO DE CONSTRUIR LA CURVA DE

LOS DATOS ADICIÓN ESTÁNDAR Representar gráficamente la
de los estándares
Encontrar el x intercepto: esto es

de estándar
Encontrar la concentración de Adicionar los componentes necesarios para tener
analito en la muestra problema
la especie absorbente (opcional). Llevar todas las
expresaro como muestra soluciones a volumen (el mismo), este se
Presentación desarrollada por Sandra Liliana Molina Correa problema denominará Vf
FUNDAMENTOS
muy compleja

49
Absorbancia
ADICIÓN ESTÁNDAR
SOLUCIONES

PARTE Soluciones de trabajo
EXPERIMENTAL
Adicionar los componentes
Hacer barrido, para determinar la

absorbente (opcional)
[Std diluido]
MEDICIÓN
𝑽𝒔
ESPECTROFOTOMÉTRICA Llevar todas las soluciones a 𝑺𝒕𝒅 𝒅𝒊𝒍. = 𝑺𝒕𝒅 ×
Medir la absorbancia de las volumen (debe ser el mismo) 𝑽𝒇
−𝑿𝒊𝒏𝒕 = [𝑺𝒕𝒅 𝒅𝒊𝒍. ]
Esta concentración es equivalente a
Corregir las señales de las lo que está de analito en la muestra
soluciones con la señal del
blanco
problema. Por lo tanto:
TRATAMIENTO CONSTRUIR LA CURVA DE
Representar gráficamente la
DE LOS DATOS ADICIÓN ESTÁNDAR
−𝑿𝒊𝒏𝒕 × 𝑽𝒇 = 𝑨𝒏𝒂𝒍𝒊𝒕𝒐 × 𝑽𝒐
de los estándares
Encontrar el x intercepto: esto es Donde [Analito] es la concentración

de estándar del analito en la muestra problema
Encontrar la concentración de
analito en la muestra problema adicionada, si existió un factor
expresaro como muestra adicional de dilución, debe aplicarse
Presentación desarrollada por Sandra Liliana Molina Correa problema posteriormente
50
EJERCICIO 15
25,0 mL de una muestra de agua subterránea se

colocaron en un matraz de 50,0 mL después de
ser tratada para formar el complejo coloreado de Volumen slón
Absorbancia
Fe con la 1,10-fenantrolina, fue aforada. La patrón (mL)
absorbancia fue de 0,203 0 0,203
En otros matraces iguales fueron colocados 25,00 1,00 0,363
mL de la muestra, el reactivo complejante y 2,00 0,516
respectivamente 1.00, 2.00, y 3.00 mL de solución 3,00 0,663
patrón de Fe de una concentración d 100,0 mg/L.
Calcule la concentración de Fe en la muestra
EJERCICIO 15 51
0,700
0,600
0,500
Absorbancia
𝐶𝐴 𝑉0
𝐼𝑛𝑡𝑒𝑟𝑐𝑒𝑝𝑡𝑜 𝑒𝑛 𝑋 = −
0,400 𝐶𝑠
𝐶𝐴 𝑉0
𝐼𝑛𝑡𝑒𝑟𝑐𝑒𝑝𝑡𝑜 𝑒𝑛 𝑋 = −1,346 = −
0,300 𝐶𝑠
𝐶𝐴 = 5,38 𝑚𝑔/𝐿
0,200
Abs = 0,1533(V) + 0,2063
0,100
R² = 0,9996
0,000
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00
Volumen estándar (mL)
52
analito

Curva de
Adición
estándar
sencilla
También conocida como
estándar interno
Fundamentos
Se usa cuando se presentan
errores sistemáticos y aleatorios
Principalmente debidos al instrumento, también
puede se por algún componente de la matriz
53
El estándar interno cumple con Es diferente al analito, pero presentan
las siguientes condiciones: propiedades similares.
Preparar soluciones estándar de forma exacta y Adicional el patrón interno (preferiblemente

precisa constante)
PREPARACIÓN DE LAS Preparar la solución de la muestra problema de Adicional el patrón interno (preferiblemente
SOLUCIONES manera conocida constante)
Preparar el blanco
PATRÓN Parte
experimental
Donde absorbe el analito,
INTERNO
Seleccionar las longitudes de onda adecuadas
Donde absorbe el patrón interno
MEDICIONES
ESPECTROFOTOMÉTRICAS
A la λ donde absorbe el analito
Medir las absorbancias en las soluciones estándar
Corregir las absorbancias de los y la muestra problema
estándares y la muestra A la λ donde absorbe el patrón interno
problema con el blanco
Para el eje Y se hace la relación entre la señal del
Representar gráficamente la analito y el patrón interno.
relación entre la señal analítica
y la concentración Para el eje X la relación se hace, si el patrón
interno se adiciono de manera variable
Tratamiento Si en el eje X es solo [std]: εanalito/(εPI [PI])
de datos La pendiente puede ser:
Determinar la ecuación de la
Si en el eje X es solo [std]/[PI]: εanalito/εPI
gráfica
El corte en el eje Y es un valor cercano a 0
No olvidar sacar la relación de absorbancias

Reemplazar en la ecuación la
señal generada por la muestra Presentación desarrollada por Sandra Liliana Molina
problema. Correa
Tener en cuenta el o los factores de dilución
54
Curva de
calibración
Adición
UN ANALITO
estándar

CUANTITATIVAS
Aditividad
MÁS DE UN
ANALITO
Análisis lineal
de múltiples λ
55
Curva de
calibración
Adición
UN ANALITO
estándar

CUANTITATIVAS
Aditividad
MÁS DE UN
ANALITO
Análisis lineal
de múltiples λ
[A]=[B] εA>0
εB~0
εB>0
εA~0
56

57
Curva de
calibración
Adición
UN ANALITO
estándar

CUANTITATIVAS
Aditividad
MÁS DE UN
ANALITO
Análisis lineal
de múltiples λ
58
CASO 1. UN ANALITO

Curva de
Adición
estándar
sencilla
[A]=[B] εA>0 εB>0
εB~0 εA~0 59
[X]=[Y]
εX>εY εY>εX

60
Curva de
calibración
Adición
UN ANALITO
estándar

CUANTITATIVAS
Aditividad
MÁS DE UN
ANALITO
Análisis lineal
de múltiples λ
61
PRINCIPIO DE ADITIVIDAD
 La absorbancia total medida de una mezcla a una longitud de onda,

es igual a la suma de las absorbancias de los componentes
individuales de la mezcla.
 Hay cumplimiento de la Ley de Lambert-Beer
𝑨𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 = 𝑨𝑿 + 𝑨𝒀 = 𝜺𝑿 𝒃𝑪𝑿 + 𝜺𝒀 𝒃𝑪𝒀

62
ADITIVIDAD
Para que el método sea lo más preciso y 𝜆1 𝜀𝑋 > 𝜀𝑌

exacto posible, las dos longitudes de onda
seleccionadas deben cumplir: 𝜆2 𝜀𝑌 > 𝜀𝑋
Un método para encontrar dichas longitudes de onda, es graficar

εX/εY como función de la longitud de onda.

63
EJERCICIO 16
Las concentraciones de Fe+3 y Cu+2 en una mezcla pueden ser determinadas

por la reacción con el hexacianorutenato (II), Ru(CN)6-4, el cual, forma un
complejo púrpura azul con el Fe+3 (λ1=550 nm), y un complejo verde pálido con
el Cu+2 (λ2=396 nm). Las absortividades molares para los complejos metálicos a
las dos longitudes de onda, se muestran en la tabla de la parte inferior de la
diapositiva. Cuando una muestra que contiene Fe+3 y Cu+2 es analizada en una
celda cuyo espesor es de 1,00 cm, la absorbancia a 550 nm es 0,183, y la
absorbancia en 396 nm es 0,109. ¿Cuáles son las concentraciones molares de
Fe+3 y Cu+2 en la muestra?
Elemento ε550nm ε396nm
Fe+3 9970 84
Cu+2 34 856
64
EJERCICIO 16
𝐴550 𝑛𝑚 = 0,183 = 9970𝑀−1 𝑐𝑚−1 × 𝐶𝐹𝑒 × 1,00𝑐𝑚 + 34𝑀−1 𝑐𝑚−1 × 1,00𝑐𝑚 × 𝐶𝐹𝑒
𝐴396 𝑛𝑚 = 0,109 = 84𝑀−1 𝑐𝑚−1 × 𝐶𝐹𝑒 × 1,00𝑐𝑚 + 856𝑀−1 𝑐𝑚−1 × 1,00𝑐𝑚 × 𝐶𝐹𝑒
RESOLVER POR CUALQUIER SISTEMA
Fe=0,0000179 M
Cu= 0,000126 M

[A]=[B] εA>0 εB>0
εB~0 εA~0 65
[X]=[Y]
εX>εY εY>εX
[C]=[D] εD~εC εC~εD

66
Curva de
calibración
Adición
UN ANALITO
estándar

CUANTITATIVAS
Aditividad
MÁS DE UN
ANALITO
Análisis lineal
de múltiples λ
67
ANÁLISIS DE REGRESIÓN LINEAL A
MULTI-LONGITUDES DE ONDA (MLRA)
Cuando los espectros de los

componentes de la mezcla, se εD~εC
encuentran solapados, es decir εC~εD
εX~εY, la aproximación que se
usa para la cuantificación de
una mezcla es el Análisis de
regresión lineal a multi-
longitudes de onda (MLRA)
68
Si Asx y Asy son las absorbancias de soluciones estándar 𝐴𝑆𝑋 = 𝜀𝑋 𝑏𝐶𝑆𝑋

de los componentes X y Y, y Csx y Csy son
concentraciones conocidas de los componentes X y Y a 𝐴𝑆𝑌 = 𝜀𝑌 𝑏𝐶𝑆𝑌
cualquier longitud de onda, entonces:
Y tenemos que la absorbancia de la
𝐴𝑚𝑖𝑥 = 𝐴𝑋 + 𝐴𝑌 mezcla, es la suma del aporte de la
absorbancia de cada componente
𝐴𝑚𝑖𝑥 = 𝜀𝑋 𝑏𝐶𝑋 + 𝜀𝑌 𝑏𝐶𝑌
𝐴𝑚𝑖𝑥 𝐶𝑋 𝐶𝑌 𝐴𝑆𝑌
Sustituyendo, en la ecuación anterior, las = +
expresiones iniciales, tenemos: 𝐴𝑆𝑋 𝐶𝑆𝑋 𝐶𝑆𝑌 𝐴𝑆𝑋
69
DEDUCCIÓN
DE LA
ECUACIÓN
PARA MLRA
𝑨𝒎𝒊𝒙 𝑪𝑿 𝑪𝒀 𝑨𝑺𝒀
= +
𝑨𝑺𝑿 𝑪𝑺𝑿 𝑪𝑺𝒀 𝑨𝑺𝑿
70
Por lo tanto, para determinar Cx y Cy, la absorbancia de la mezcla y las

absorbancias de las soluciones estándar son medidas en varias
longitudes de onda. Una gráfica de Am/Asx versus Asy/Asx tendrá una
tendencia lineal.
𝑨𝒎𝒊𝒙 𝑪𝑿 𝑪𝒀 𝑨𝑺𝒀
= +
𝑨𝑺𝑿 𝑪𝑺𝑿 𝑪𝑺𝒀 𝑨𝑺𝑿
y = b + m x
71
EJERCICIO 17
λ (nm) ACr+3 ACo+2 Amix Determinar la concentración de

375 0,2 0,01 0,53
cromo (III) y cobalto (II) en una
425 0,39 0,07 0,83
mezcla que contiene estos elementos
455 0,20 0,21 0,54
e impurezas inertes. Para solucionar
480 0,12 0,30 0,44
500 0,13 0,38 0,51
este problema se utiliza el método de
530 0,24 0,33 0,70
MLRA. Se prepararon dos soluciones
550 0,32 0,18 0,76 una de cromo (III) 0,0250 M, y la
575 0,39 0,06 0,82 segunda de cobalto (II) 0,0750 M.
600 0,34 0,03 0,70 Dar la respuesta en molaridad.
Asumiendo que 72
x es cromo y y
cobalto
4 4
3,5 3,5
Amix/AsCr
Amix/AsCr.
3 3
2,5 2,5
Amix/AsCr =0,6602(AsCo/AsCr) + 2,005

2 Amix/AsCr = 0,5992(AsCo/AsCr) + 2,1332 2 R² = 0,9999
R² = 0,9188
1,5 1,5
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3
AsCo/A
Presentación desarrollada por Sandra Liliana Molina
sCr Correa AsCo/AsCr
Asumiendo que 73
x es cobalto y y
cromo
60 25
Amix/AsCo = 2,5115(AsCr/AsCo) - 0,6642 Amix/AsCo = 2,0012(AsCr/AsCo) + 0,6675

50 R² = 0,9815 R² = 1
20
40
15
Amix/AsCo
Amix/AsCo
30
10
20
5
10
0 0
0 5 10 15 20 25 0 2 4 6 8 10 12
AsCr/AsCo AsCr/AsCo
74
EJERCICIO 18
Por cuál casos o casos podría resolver las siguientes mezclas

APLICACIONES: MEDIO AMBIENTE (Cationes) 75
ANALITO MÉTODO λ (nm)
Aluminio Reacción con cianuro de Eriocromo R seco a pH 6 produce un complejo rojo a rosado 535
Reducir hasta AsH3 usando Zn y reaccionar con dietilditiocarbamato de plata para
Arsénico 535
formar el complejo rojo
Extracción con CHCl3,el cual contiene ditizona en medio básico (NaOH) para formar el
Cadmio 518
complejo rojo a rosado
Oxidar a Cr(VI) y reaccionar con difenilcarbazida en medio ácido para dar el
Cromo 540
producto rojo-violeta
Reacciona con la neucuproína en una solución neutro o ligeramente acido; se extrae
Cobre 457
en CHCl3/CH3OH para dar una solución amarilla
Hierro Reacción con la o-fenantrolina en medio ácido para formar el complejo rojo-naranja 510
Extracción con CHCl3,el cual contiene ditizona en medio básico (NH3) para formar el
Plomo 510
complejo rojo cereza
Manganeso Oxidar a permanganato con persulfato 525
Extracción con CHCl3,el cual contiene ditizona
Es para agua y aguas en medio ácido para formar el
residuales
Mercurio 492
complejo naranja
Zinc Reacción con Zincon a pH 9 para formar el complejo azul 620
Presentación desarrollada por Sandra Liliana Molina Correa Es para agua y aguas residuales
76
APLICACIONES: MEDIO AMBIENTE
(Aniones)
La reacción con hipoclorito y fenol produce el azul de indofenol; catalizada
Amoniaco 630
por una sal de manganeso.
Se convierte a CNCl por la reacción con la cloramina-T, seguida de la
Cianuro 578
reacción con piridina-ácido barbitúrico para formar un complejo azul-rojizo
Fluoruro La reacción con el rojo Zr-SPADNS resulta en la formación de ZrF6-2 570
Cloruro La oxidación del cristal violeta para formar un producto con un color azulado 592
Reducción a nitrito con Cd, formará un colorante azo por la reacción con
Nitrato 543
sulfanilamida y N-(1-naftil)-etilendiamina.
Reacción con molidbdato de amonio seguido por reducción con el cloruro
Fosfato 690
estañoso para formar el azul de molibdeno.
Es para agua y aguas residuales
77
APLICACIONES: MEDIO AMBIENTE
(Compuestos orgánicos)

Reacción con la 4-aminoantipirdina y el K3Fe(CN)6 para formar el
Fenol 460
colorante antipiridina.
Formación del par iónico azul entre un surfactante aniónico y el
Surfactantes colorante catiónico azul de metileno, el cual es extraído en 652
cloroformo.
Es para agua y aguas residuales

78
APLICACIONES: CLÍNICAS

Proteína
La reacción de la proteína, NaOH y Cu+2 produce un complejo azul-violeta 540
sérica total
Colesterol La reacción con Fe+3 in presencia de isopropanol, ácido acético y ácido
540
sérico sulfúrico produce el complejo azul-violeta
Ácido úrico La reacción con el ácido fosfotúngstico produce el azul de tungsteno 710
Barbitúricos Los barbitúricos son extraídos en cloroformo, y luego mezclados con NaOH
260
séricos 0,45 M
Glucosa La reacción con la o-toluidina a 100°C produce un complejo verde-azul 630
Proteína La proteína es descompuesta para unirse al yoduro; el yoduro es
enlazada a cuantificado por su efecto catalítico en la reacción redox entre el Ce+4 y 420
yoduro As+3
79
Bibliografía
 Harris, D.C. (2010) Quantitative Chemical Analysis. Nueva York: W. H. Freeman and
Company. Pág104-111, 396-403, 419-423, 445-458
 Harvey, D. (2000) Modern Analytical Chemistry. Boston: Mc Graw Hill. Pág 109-117,
382-388, 395-397, 400-402
 Skoog, D.A.; Holler, F.J.; West, D.M; Crouch, S.R. (2015) Fundamentos de Química
Analítica. México: Cengage Learning Editores. Pág 658-673, 684-713, 722-734
 Skoog, D.A.; Holler, F.J.; Crouch, S.R. (2008) Principios de análisis instrumental.
México: Cengage Learning Editores. Pág 336-342, 348-361, 367-371, 375-378

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MÓDULO III: MÉTODOS

 La radiación visible abarca

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El blanco es todos los

Importante, para no tener en

Importante para no tener en

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Método alternativo para expresar 0,7

cuantitativamente la atenuación de la 0,6

obtenerse curvas de calibración lineales. 0,3

Una muestra tiene un porcentaje de transmitancia de 50,0%, determinar

Presentación desarrollada por Sandra Liliana Molina Correa

Una muestra tiene un porcentaje de transmitancia de 50,0%, determinar

𝐴 = − log 𝑇 = − log 0,500 = 0,301

𝐴 = 2 − log %𝑇 = 2 − log 50,0% = 0,301

Presentación desarrollada por Sandra Liliana Molina Correa

El coeficiente de absortividad (a) esta dado para

El coeficiente de absortividad o coeficiente de

El experimento se lleva a cabo en un

Cambia la absorbancia, sin cambios en la Al cambiar de longitud de onda, cambia la

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Cambio en el índice de disminuye y esto altera la distribución

El analito puede estar en un Altera la capacidad de absorber

función del índice de refracción (η).

Cambio en el índice En la mayoría de los casos C<0,1M, el

El analito puede estar en un Si hay cambio es necesario hacer una

Luz monocromática 𝐴 = ε𝑏𝑐

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El analito puede estar en un

Necesario, para cumplimiento de la Ley de Beer sólo se observa cuando la

El analito puede estar en un

➢ Generar radiación con potencia suficiente para que se detecte y se mida

Lugar donde se pone Cuarzo 190-2500 nm

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