Problemas de Diluciones

1) Durante un aislamiento de microorganismos aerobios, usted toma una muestra de suelo, de la cual desea
conocer el número de UFC/g de muestra, por lo que realiza la siguiente serie de diluciones decimales hasta
10-9, usted siembra de las últimas 4 diluciones 0.2 ml en un medio de BHI, por duplicado, y encuentra los
siguientes resultados:

Dilución Cuenta 1 Cuenta 2

10-6 Incontables Incontables
10-7 642 696
10-8 61 78 Prom: 69.5 (entre 25 a 250)
10-9 9 6

Calcule el número de UFC/g de suelo

Solución
Datos: Fórmula Resultado

Alícuota: 0.2 ml UFC = n X 1/dil. X1/ Alíc. 3.475X1010 UFC/g de suelo

No. De colonias prom: 69.5 Sustituyendo
Diluc. Seleccionada: 10-8 UFC = 69.5 X 1/ 10-8 X 1/0.2
UFC = 69.5 X 108 X 5 = 347.5X108 = 3.475X1010 UFC/g

2) Durante la producción de un medicamento se tomó una muestra de éste y se realizó un aislamiento de

microorganismos aerobios, del cual desea conocer el número de UFC/g de muestra, por lo que realiza la
siguiente serie de diluciones decimales hasta 10 -8, usted siembra de las últimas 4 diluciones 0.1 ml en un
medio de BHI, por duplicado, y encuentra los siguientes resultados:

Dilución Cuenta 1 Cuenta 2

10-5 Incontables Incontables
10-6 322 298
10-7 36 32 Prom: 34 (entre 25 a 250)
10-8 2 5

Calcule el número de UFC/g de muestra

Solución
Datos: Fórmula Resultado

Alícuota: 0.1 ml UFC = n X 1/dil. X1/ Alíc. 3.4X109 UFC/g de muestra

No. De colonias prom: 34 Sustituyendo
Diluc. Seleccionada: 10-7 UFC = 34 X 1/ 10-7 X 1/0.1
UFC = 34 X 107 X 10 = 340X107 = 3.4X109 UFC/g

3) Usted tiene una suspensión de Escherichia coli conteniendo 109 bacterias /ml, a esta suspensión
usted le realiza las siguientes diluciones: 2(1:6), 3(1:8), 2(1:4) 2(1:10), de esta última dilución toma 0.5 ml y
le adiciona 0.3 ml de solución de tiomersal al 0.001%., de la solución final usted inocula 0.1 ml a un ratón.
Conteste las siguientes preguntas:

a) ¿Cual es la dilución total del sistema de diluciones? Respuesta: 1:47185920

b) ¿Cuántas bacterias/ml hay en cada dilución? Respuesta: Ver en tabla renglón de bacterias/mL
c) ¿Cuántas bacterias le inoculó al ratón? Respuesta: Se inocularon 2 bacterias al ratón
Soluc. A inocular
Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 (0.5+0.3
ml)
Diuc. Ind. 1:6 1:6 1:8 1:8 1:8 1:4 1:4 1:10 1:10 1:1.6
Diluc. Ac. 1:6 1:36 1:288 1:2304 1:18432 1:73728 1:294912 1:2949120 1:29491200 1:47185920
Bact./ mL 1.66 X108 2.77 X107 3.47 X106 4.34 X105 5.42 X104 1.35 X104 3390 339 33.9 21

Conc. Inicial de bacterias: 1X109 bact./mL

Para determinar el número de bacterias en cada tubo: Conc. De bact./mL / Factor de dilución
Ejemplo: 1X109 / 6 = 1.66 X108
Si al final tenemos 21 bact./mL si inoculamos 0.1 ml, entonces: 21 bact.X 0.1 mL = 2 bact.
MICROBIOLOGÍA GENERAL/ASS

1
4) Usted tiene una suspensión de Staphylococcus aureus conteniendo 108 bacterias /ml, a esta
suspensión usted le realiza las siguientes diluciones: 2(1:2.5), 2(1:6), 2(1:3) 3(1:10), de esta última dilución
toma 0.2 ml y le adiciona 0.8 ml de solución de vitaminas al 0.1%. Conteste las siguientes preguntas:

d) ¿Cual es la dilución total del sistema de diluciones? Respuesta: 1:10125000

e) ¿Cuántas bacterias/ml hay en cada dilución? Respuesta: Ver en tabla renglón de bacterias/mL

Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 (0.2+0.8 ml)

Diuc. Ind. 1:2.5 1:2.5 1:6 1:6 1:3 1:3 1:10 1:10 1:10 1:5
Diluc. Ac. 1:2.5 1:6.25 1:37.5 1:225 1:675 1:2025 1:29250 1:202500 1:2025000 1:10125000
Bact./ mL 4 X107 1.6 X107 2.66 X106 4.44 X105 1.48 X105 4.93 X104 4938 493 49 9.8 =10
Conc. Inicial de bacterias: 1X108 bact./mL
Para determinar el número de bacterias en cada tubo: Conc. De bact./mL / Factor de dilución
Ejemplo: 1X108 / 2.5 = 4 X107

5) Usted tiene una suspensión de Bacillus megaterium de la cual usted desea conocer cuantas
bacterias /ml tiene, por lo que usted realiza las siguientes diluciones: 2(1:4), 3(1:6), 3(1:8) 2(1:5), de las
últimas tres diluciones toma 0.2 ml y siembra en placas de agar cuenta estándar, por duplicado,
obteniéndose los siguientes resultados:
Dilución Cuenta 1 Cuenta 2
8 38 30 Prom: 34 (entre 25 a 250)
9 7 6
10 0 1
a) ¿Cuál es la dilución total del sistema de diluciones?
b) ¿Cuántas bacterias/ml hay en la suspensión inicial?

Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Diuc. Ind. 1:4 1:4 1:6 1:6 1:6 1:8 1:8 1:8 1:5 1:5
Diluc. Ac. 1:4 1:16 1:96 1:576 1:3456 1:27648 1:221184 1:1769472 1:8847360 1:44236800

Datos: Fórmula Resultado

Alícuota: 0.2 ml UFC = n X factor de dilución X1/ Alíc. 3.0X108 UFC/g de muestra
No. De colonias prom: 34 Sustituyendo
Diluc. Seleccionada: Tubo 8 UFC = 34 X 1769472 X 1/0.2
UFC = 34 X 107 X 5 = 300810240= 3.0X108

6) Diseñe una serie de diluciones para ajustar una suspensión de células de Escherichia coli a 4.5X104
células en un volumen de 0.5 ml partiendo de una suspensión original que contiene 2.5X10 9 células/mL.
Realice un esquema de las diluciones seriadas que haría para obtener esta suspensión ajustada a la
concentración deseada, indicando:

a. La dilución total que realizaría para llegar a la concentración solicitada.

b. El volumen de transferencia para cada dilución.
c. El volumen de diluente para cada dilución.
d. El factor de dilución individual para cada dilución.
e. El factor de dilución acumulado para cada dilución.

Solución
a. La dilución total que realizaría para llegar a la concentración solicitada.
Fórmula para calcular la dilución total (FDT)
FDT = Concentración inicial de bact. / Conc. De bacterias a la que se quiera llegar
Importante: las unidades de las dos concentraciones deben ser iguales
Datos
Conc. Inicial: 2.5X109 células/mL
Conc. A la que quiere llegar: 4.5X104 células/en 0.5 mL,
Como las unidades de las dos concentraciones son diferentes (mL y 0.5ml) se homogenizaran las unidades
a 1 mL, por lo que se multiplicará la concentración a la que se quiere llegar por 2 para obtener la
concentración por mL.
Conc. A la que quiere llegar: 4.5X104 células/en 0.5 mL, = 4.5X104 X 2 = 9 X104 células/mL
Operación

2
 FDT = 2.5X109 / 9 X104 = 27,777.77
Resultado: Se requiere diluir 27777.77 veces la concentración inicial de bacterias para obtener la
concentración de bacterias a la que se quiere llegar.

Diseño de las diluciones

Si contamos el número de lugares de 27,777.77 a partir del punto a la izquierda, tendríamos 5 lugares, esto
significa que podemos hacer 4 diluciones 1:10, la quinta dilución se haría con el factor que multiplicado por
10,000 nos daría el factor de dilución total (27777.77)
Solución a puntos b., c., d. y e.
Tubo 1 2 3 4 5
Diuc. Ind. 1:10 1:10 1:10 1:10 1:2.7777
Diluc. Ac. 1:10 1:100 1:1000 1:10000 1:27777
Vol. De inóculo 0.5 - - - -
Vol. Transferencia - 0.5 0.5 0.5 1.8
Vol. Diluente 4.5 4.5 4.5 4.5 3.2
Vol. Total 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
Bact./ mL 2.5X108 2.5X107 2.5X106 2.5X105 9.0X104

Se calcularán las diluciones para un volumen total de 5 mL.

Para calcular el volumen de transferencia del tubo 5, se divide el volumen total entre el factor de
Dilución individual: 5.0 mL / 2.7777 = 1.8 mL
Para obtener el volumen del diluyente, se resta el volumen de transferencia obtenido al volumen total de
la dilución del tubo. 5.0 – 1.8 = 3.2 mL
En la tabla, se observa que el último tubo llega a la concentración a la que queremos llegar por mL ( 9.0X104
Bact./mL) por lo que si tomamos 0.5 mL de esta dilución tendríamos 4.5X10 4 Bact./0.5 mL.

7) Usted tiene una muestra de un alimento y desea conocer la cuenta total de microorganismos. Para ello
usted realiza las siguientes diluciones en serie: 3 (1:9), 2(1:6), 3(1:8) y 3(1:3) e inocula 0.1 ml de cada
dilución en cada una de dos placas de medio de cultivo. Después de incubar encontró los siguientes
resultados.
En el primer tubo de la dilución: 1:3 Placa 1 = 75 colonias bacterianas
Placa 2 = 65 colonias bacterianas

En el segundo tubo de la dilución 1:8 Placa 1 = 34 colonias de hongos

Placa 2 = 27 colonias de hongos

Conteste lo siguiente:
a) Indique la serie de diluciones completas y ¿cuál sería la dilución total del sistema? R = 1:362,797,056
b) ¿En qué dilución aisló las bacterias y en cuál los hongos? R = Bact. Dil.: 1:40310784, Hongos Dil.: 1:1679616
c) ¿Cuál es la concentración de hongos y bacterias en la muestra original?
R= 5.12X108 Hong./mL y 2.82 X 1010 Bact./mL
Solución
Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Diuc. 1:9 1:9 1:9 1:6 1:6 1:8 1:8 1:8 1:3 1:3 1:3
Ind.
Diluc. 1:9 1:81 1:729 1:4374 1:26244 1:209952 1:1679616 1:13436928 1:40310784 1:120932352 1:362797056
Ac.
Bact. (1) 75 col.
(2) 65 col.
Prom. 70 col.
Hongos (1) 34 col.
(2) 27 col.
Prom. 30.5
col.

Datos: Fórmula Resultado

Alícuota: 0.1 ml UFC = n X factor de dilución X1/ Alíc.

Bact. No. De colonias prom: 70 Sustituyendo
Diluc. Seleccionada: 1:40310784 UFC = 70 X 40310784 X 1/0.1 = 28217548800 = 2.82 X 1010 Bact./mL
Hongos No. De colonias prom: 30.5
Diluc. Seleccionada: 1:1679616 UFC = 30.5 X 1679616 X 1/0.1 = 512282880= 5.12X108 Hong./mL

MICROBIOLOGÍA GENERAL/ASS

3
 8) Para un aislamiento de microorganismos aerobios, usted toma una muestra de suelo, de la cual desea
conocer el número de UFC/g de muestra, por lo que realiza la siguiente serie de diluciones decimales hasta
10-9, usted siembra de las últimas 4 diluciones 0.2 ml en un medio de BHI, por duplicado, y encuentra los
siguientes resultados:

Dilución Cuenta 1 Cuenta 2

10-6 Incontables Incontables
10-7 642 696
-8
10 61 78 Prom: 69.5 (entre 25 a 250)
10-9 9 6
Calcule el número de UFC/g de suelo
Solución
Datos: Fórmula Resultado

Alícuota: 0.1 ml UFC = n X 1/dil. X1/ Alíc. 3.47X1010 UFC/g de suelo

No. De colonias prom: 69.5 Sustituyendo
Diluc. Seleccionada: 10-8 UFC = 69.5 X 1/ 10-8 X 1/0.2
UFC = 69.5 X 108 X 5 = 347.5X108 = 3.47X1010 UFC/g

9) En la compañía que trabaja le pidieron evaluar el efecto que tiene un antibiótico de reciente fabricación
sobre el crecimiento de Streptococcus pneumoniae, Mycobacterium tuberculosis, Escherichia coli y Proteus
sp. Para ello tomó un vial que contenía 10 ml de solución inyectable con una concentración de 2500
mg del principio activo. Posteriormente realizó diluciones en tubo, de acuerdo al esquema que se
muestran en la tabla. A partir de ellas preparó cajas mezclando 3 ml de cada dilución con 17 ml de
agar estéril y fundido a 45°C. Se preparó una caja extra, libre de antibióticos, como testigo.
Complete los datos que faltan en la tabla:
Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8
Vol. antibiótico 1.0 -- -- -- -- -- -- --
(ml)
Vol. de diluyente 5.0 9.5 10.0 8.5 14.5 20.0 6.5 7.5
(ml)
Vol. de -- 2.5 2.0 1.5 1.5 1.0 1.0 1.5
transferencia (ml)
Dilución individual 1:6 1:4.8 1:6 1:6.666 1:10.666 1:21 1:7.5 1:6
Dilución 1:6 1:28.8 1:172.8 1:1151.8 1:12286.0 1:258006.0 1:1935045. 1:11610273.09
acumulada 8 5
Concentración 41666.66 8680.55 1446.76 217.03 20.34 0.968 0.129 0.021
final en
tubo(µg/ml)
Caja 1 2 3 4 5 6 7 8
Dilución 1:39.996 1:191.98 1:1151.88 1:7678.4 1:81898.4 1:1719867.99 1:12899013.3 1:77394080.4
acumulada en
placa
Concentración 6250.6 1302.2 217.0 32.55 3.05 0.14 0.019 0.003
final en placa
(µg/ml)
Crecimiento de - - - - + + + +
S.p.
Crecimiento de + + + + + + + +
E.c.
Crecimiento de - - - + + + + +
M. t..
Crecimiento de - - + + + + + +
P.sp.
Después de pasar la prueba de esterilidad, sembró una estría de cada uno de los cuatro microorganismos
de prueba. Posteriormente incubó a 37°C durante 24 h y obtuvo los siguientes resultados: Streptococcus
pneumoniae, creció en las placas 5, 6, 7 y 8; Escherichia coli, creció en todas las placas; Mycobacterium
tuberculosis, creció a partir de la placa 4; y Proteus sp. creció a partir de la placa 3. A partir de sus
resultados, cuál fue la CMI.
MICROBIOLOGÍA GENERAL/ASS

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 Cepa CMI
Streptococcus pneumoniae 32.55 µg/mL
Escherichia coli >6250.6 µg/mL
Mycobacterium tuberculosis 217.0 µg/mL
Proteus sp. 1302.2 µg/mL

Operaciones problema 9

La concentración del antibiótico es de 2500 mg en 10 ml, se transformará a µg/mL

2500X 1000 = 2,500,000 µg/en 10 mL por lo que dividiendo esto entre 10 tendríamos 250,000 µg/mL

Preparación de cada placa con las diluciones

3 mL de la dilución con 17 mL de agar. Factor de dilución individual de la placa= 3+17 =20/3= 6.666

Para sacar el factor de dilución acumulado de la placa se multiplica el factor de dilución individual de la placa por el factor acumulado
del tubo

MICROBIOLOGÍA GENERAL/ASS