Prototipo Informe Final 2
Prototipo Informe Final 2
Prototipo Informe Final 2
AUTOR
ESCOBAR BOBADILLA, LUIS ENRIQUE
ORCID: 0000-0003-2124-9545
ASESOR
LEAL VERA, CÉSAR ALFREDO
ORCID: 0000-0003-4125-3381
TRUJILLO-PERÚ
2019
EQUIPO DE TRABAJO
AUTOR
Escobar Bobadilla, Luis Enrique
ORCID: 0000-0003-2124-9545
Universidad Católica Los Ángeles de Chimbote. Estudiante de pregrado
Trujillo, Perú.
ASESOR
Leal Vera, César Alfredo
ORCID: 0000-0003-4125-3381
Universidad Católica Los Ángeles de Chimbote. Facultad de Ciencias de
la Salud. Escuela profesional de Farmacia y Bioquímica. Trujillo, Perú.
JURADO
Díaz Ortega, Jorge Luis
ORCID: 0000-0002-6154-8913
Arteaga Revilla, Nilda María
ORCID: 0000-0002-7897-8151
Amaya Lau, Luisa Olivia
ORCID: 0000-0002-6374-8732
ii
JURADO EVALUADOR DE TESIS
Presidente
Miembro
Miembro
iii
AGRADECIMIENTO
A Dios
A mis profesores
otorgaron el conocimiento
profesional.
A mis compañeros
mi memoria.
iv
DEDICATORIA
v
RESUMEN
dos grupos experimentales al 50% y 75% tanto para el extracto hidroalcohólico del
75%.
Vaccinium floribundum.
vi
ABSTRACT
The present research work was experimental, quantitative and cross-sectional. It was
performed with the objective of evaluating the in vitro antibacterial effect of the
cultures of the microorganism divided into 6 groups: white group (physiological saline
groups at 50% and 75% for both the hydroalcoholic extract of cranberry fruit and for
by means of the ANOVA test (P˂0.05). In the comparison of groups by means of the
T-student test, there is a significant difference between them, with the concentration
of 75% of the blueberry hydroalcoholic extract having the greatest antibacterial effect
than the mullaca extract. It is concluded that both extracts have an antibacterial effect,
floribundum.
vii
CONTENIDO
EQUIPO DE TRABAJO....................................................................................... ii
JURADO EVALUADOR DE TESIS..................................................................iii
AGRADECIMIENTO.......................................................................................... iv
DEDICATORIA .................................................................................................... v
RESUMEN ............................................................................................................ vi
ABSTRACT ......................................................................................................... vii
CONTENIDO ..................................................................................................... viii
ÍNDICE DE TABLAS .......................................................................................... ix
ÍNDICE DE FIGURAS ......................................................................................... x
I. INTRODUCCIÓN .............................................................................................1
II. REVISIÓN DE LA LITERATURA .................................................................6
2.1. Antecedentes ................................................................................................ 6
2.2. Bases Teóricas .............................................................................................. 8
III. HIPÓTESIS.....................................................................................................13
IV. METODOLOGÍA .......................................................................................... 14
4.1. Diseño de la investigación .......................................................................... 14
4.2. Población y Muestra ................................................................................... 15
4.3. Definición y operación de las variables ..................................................... 17
4.4. Técnicas e instrumentos de recolección de datos ....................................... 18
4.5. Plan de análisis ........................................................................................... 19
4.6. Matriz de consistencia… ........................................................................... 20
4.7. Principios éticos… .................................................................................... 21
V. RESULTADOS ............................................................................................... 22
5.1. Resultados .................................................................................................. 22
5.2. Análisis de resultados… ............................................................................ 26
VI. CONCLUSIONES..........................................................................................27
6.1. conclusiones ............................................................................................... 29
ASPECTOS COMPLEMENTARIOS ................................................................ 28
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ...............................................................29
ANEXOS ...............................................................................................................37
viii
INDICE DE TABLAS
ix
INDICE DE FIGURAS
MacFarland ....................................................................................................................... 43
Fig 4. Siembra del inóculo de Staphylococus aureus en las placas de Agar Muller-
Hinton ............................................................................................................................... 43
Fig 6. Incubación de las placas Petri conteniendo los grupos experimentales, blanco y
(controlpositivo)…............................................................................................................45
x
I. INTRODUCCIÓN
En nuestro planeta existe una gran diversidad de plantas, las cuales son utilizadas como
antigüedad, muchos vegetales aparte de servir como alimento, han sido utilizados
como medicina para mitigar o curar ciertas enfermedades. Hoy en día aún existe gran
interés por las plantas medicinales a la que llaman medicina tradicional y que algunos
salud realiza esfuerzos para la racionalización del uso de la medicina tradicional debido
La necesidad del ser humano para aliviar sus enfermedades provoco el aumento en la
humano está prefiriendo el uso de remedios naturales que aquellos que son obtenidos
por manipulación química, además esta preferencia se debe por la carencia económica
en varios hogares, así como lo dificultoso que es acceder al servicio médico, etc, lo
cual demuestra que el uso de plantas medicinales aún sigue vigente (3,4).
medicinales. Lo cual indica que continúa la atracción hacia el estudio de las plantas
con poder terapéutico permitiendo que la fitoterapia tenga un gran apogeo (5,6).
arbustos que pertenecen al género Vaccinium de la familia de las Ericaceae, los frutos
1
especie más cultivada. Los frutos tienen acción terapéutica debido a los principios
Antártida. El color negro del fruto se debe a las antocianidinas como polifenoles de
ya que son usados para la diabetes, problemas digestivos, gripe, entre otros (8).
El ser humano siempre ha convivido con enfermedades que le han causado problemas
mala higiene, pobreza, etc los cuales son factores sociales que incrementan la
forúnculo o foliculitis que luego podría diseminarse causando infecciones graves como
2
nivel comunitario como hospitalario. El uso en los hospitales de catéteres intravenosos,
Hace ochenta años, Staphylococus aureus era fácilmente eliminada por penicilinas,
como antibiótico para esta bacteria, pero luego aparecieron cepas resistentes a
tratamiento han acelerado este suceso. El efecto de una enfermedad causada por
flavonoides, ácidos fenólicos entre otros que tienen poder terapéutico, útiles en el
tratamiento de las enfermedades del ser humano. Dichos frutos ejercen acción
3
antioxidante, antibacteriano y antifúngico causando la inhibición microbiana (14).
abriendo la posibilidad de que se continúen más estudios sobre sus principios activos
4
OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN
OBJETIVO GENERAL
Staphylococcus aureus.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Staphylococcus aureus.
5
II. REVISIÓN DE LITERATURA
2.1. Antecedentes
se determinaron por medio del método Folin-Ciocalteau y el análisis por HPLC. Ellos
concluyeron que los cuatro compuestos fenólicos mencionados eran los responsables
del efecto inhibidor de las dos bacterias en estudio, siendo Listeria monocytogenes más
de las dos bacterias antes mencionadas por separado semejante al tubo N° 0,5 de
que a mayor concentración, mayor efecto, siendo Staphylococcus aureus más sensible
ATCC 35668. Trabajaron con concentraciones del extracto al 25%, 50%, 75%, 100%,
como control positivo usaron a clorhexidina 2%, y al suero fisiológico como control
6
negativo. En los resultados el halo de inhibición de mayor tamaño fue a la
concentración del 25% del extracto alcohólico con un tamaño promedio de 13,11 mm.
de Vaccinium macrocarpon sobre una cepa de Helicobacter pylori. Ellos usaron una
Adrianzen et al., en Trujillo del año 2017, evaluaron el efecto del zumo Vaccinium
bacteriano se ajustó con solución salina fisiológica semejante al tubo n° 0,5 del
efecto inhibitorio de zumo de arándano por presentar una menor turbidez del medio
que contuvo a E. coli en 50µL al 100% v/v y para la concentración mínima bactericida
evidenciaron que el zumo difunde sobre la bacteria a la concentración del 100% v/v
utilizó el inóculo de la bacteria a una turbidez semejante al tubo n° 0,5 del nefelómetro
7
de MacFarland y por el método de Kirby Bauer de difusión en disco se demostró la
mayor era el tamaño del halo de inhibición, siendo mayor a la concentración del 100%
concentración de su extracto al 25%, 50%, 75%, 100%. Por medio del método de Kirby
Planta medicinal
Es aquella parte de una planta, ya sea hoja, raíz, fruto, flor, etc que posee sustancias
(22)
con acción farmacológica para mejorar la salud de los seres vivos .
Principio activo
Son sustancias químicas producidas por las plantas medicinales con acción terapéutica
(23).
Extracto alcohólico
alcohol etílico para la extracción de los principios activos solubles en dicho solvente.
Vaccinium corymbosum
8
Descripción botánica
Son arbustos, nativa de América del Norte, puede llegar a crecer hasta una altura de
2,5m. Sus ramas poseen hojas simples y alternas, de forma elíptica lanceolada, de un
color verde oscuro ligeramente dentadas. Sus flores son acampanadas de un tono
blanco, algunos cultivares son de color rosa. Los frutos son bayas que contienen
Clasificación Taxonómica
Reino Vegetal
División Magnoliophytas
Subdivisión Angiosperma
Orden Ericales
Familia Ericaceae
Género Vaccinium
Entre los principios activos con propiedades terapéuticas del arándano tenemos:
Ácidos fenólicos que provienen del ácido cinámico, como ácido cafeico, ácido
clorogénico.
9
Ácidos orgánicos: ácido málico, ácido cítrico y ácido quínico (27).
Propiedades curativas:
Tienen un poder depurativo razón por la cual se lo usa para problema renal, y además
cistitis. Previene la inflamación de la vejiga, próstata, uretra, así como también por
problemas de la visión. Son ricas en vitamina C, lo cual les permite tener la capacidad
Vaccinium floribundum
Descripción botánica
Esta especie es un arbusto que mide aproximadamente entre 2 a 2,5m de altura, las
hojas son pequeñas, se distribuyen en forma alterna y son de forma elíptica a oval
lanceolada cuyos bordes son levemente aserrados, sus flores son pequeñas, con
corola de color blanco, rosado a rojo. Los frutos son bayas lisas, esferoidales de un
Clasificación taxonómica
Reino Vegetal
División Magnoliophytas
Subdivisión Angiosperma
10
Orden Ericales
Familia Ericaceae
Género Vaccinium
Principios activos
hidroxinámico (28).
Staphylococcus aureus
Taxonomía
Reino Bacteria
Filo Firmicutes
Clase Bacilli
Orden Bacillales
Familia Staphylococcaceae
Género Staphylococcus
Características
Son bacterias esféricas grampositivas, con diámetro de 0,5 a 1,5 µm, crecen en forma
cual les diferencia del género Streptococcus y Enterococcus que son catlasa negativo.
11
son coagulasa negativo (30).
Factores de virulencia
El daño causado por esta bacteria se debe a sus factores de virulencia como lo son:
Adherencia microbiana
S. aureus para que pueda causar infección, debe adherirse al tejido del huésped, y
esto lo consigue por medio de proteínas presentes en su pared celular que permiten
la unión al tejido del hospedero. Se han descrito varias proteínas de superficie entre
las más estudiadas están, las proteínas que se unen a los receptores del colágeno, a la
Cuando la bacteria se unió al tejido del huésped, esta empieza a producir una biocapa
protésicos (31).
12
III. HIPOTESIS
13
IV. METODOLOGÍA
Grupo Control Negativo (Blanco): Se utilizaron 05 placas Petri con medio de cultivo
por 24h en una temperatura de 35°C – 37°C, posteriormente se realizó la lectura de los
medios de cultivo.
por 24h a una temperatura de 35°C - 37°C, luego se realizó la lectura de los halos de
Vaccinium floribundum.
14
embebidos de extracto hidroalcohólico de Vaccinium corymbosum al 75%. Se incubó
por 24h a una temperatura de 35°C - 37°C, luego se realizó la lectura de los halos de
Vaccinium floribundum.
Población vegetal:
Recolección:
que la planta de Vaccinium floribundum fue recolectada de Pataz, ambas plantas fueron
Selección:
Los frutos de arándano y mullaca fueron retirados de la planta para luego ser procesados.
Muestra vegetal:
(mullaca).
Criterios de inclusión:
estén enteros.
Criterios de exclusión:
15
La planta recientemente haya sido fumigada.
Material Biológico:
Criterios de inclusión:
Cultivos rejuvenecidos
Cultivos no contaminados.
Criterios de exclusión:
16
4.3. DEFINICIÓN Y OPERACIÓNALIZACIÓN DE LAS VARIABLES
Extractos hidroalcohólico de Extracción del principio activo Se utilizó concentraciones Concentraciones de: Variable
cualitativa
Vaccinium corymbosum y utilizando como solvente el etanol. del extracto hidroalcohólico. 50% y 75% nominal
Vaccinium floribundum.
Variable Dependiente
Efecto antibacteriano sobre Es la susceptibilidad que tiene el Se determinó por medio de Diámetro de halos Variable
vegetal.
17
4.4. Técnicas e instrumentos de recolección de datos:
Se lavó los frutos de arándano y mullaca con agua destilada, para luego desinfectarlo
con hipoclorito de sodio al 0,5%. Luego se enjuago con agua destilada estéril.
7 días, con agitación mecánica diaria por cinco minutos. Después de haber transcurrido
alcohol a una estufa de circulación de aire a 40ºC hasta obtener un extracto blando de
El inoculo del microorganismo fue preparado con solución salina estéril hasta obtener
una suspensión equivalente a una turbidez al tubo Nº 0,5 del estándar de Mc Farland
(34).
18
Sembrado del microorganismo
inóculo rozando el hisopo por la pared interior del tubo de ensayo por encima del nivel
del líquido. Luego se realizó el sembrado del inoculo sobre la superficie del agar
Muller Hinton girando la placa Petri en tres direcciones. Se dejó secar la placa por 5
Kirby – Bauer. Se prepararon discos de papel de filtro estéril con un diámetro de 6 mm, lo cuales
fueron sumergidos dentro de cada una de las concentraciones del extracto hidroalcohólico y después
con aguja estéril se colocó cuatro discos por placa de modo que estén a una distancia aproximada de
25 mm uno del otro (36). Se usaron como grupos controles, discos de ciprofloxacino y solución salina
Se midió la zona de inhibición de cada disco contra una superficie bajo luz reflejada. Se
midió el diámetro de la zona incluyendo los 6mm del disco, con un vernier sobre el
respaldo de la placa Petri. Una lectura de 6mm indica que no hay zona de inhibición
(35,36).
19
4.6. MATRIZ DE CONSISTENCIA
Título de la Formulación Objetivos Hipótesis Tipo de investigación Variables Definición Indicadores y Plan de
Investigación del problema y diseño operacional escala de medición análisis
Objetivo general
Evaluar el efecto El extracto se
Hipótesis Variable
¿Presenta antibacteriano in vitro obtuvo a partir
Efecto Alternativa (H1) Independiente
efecto de extractos del órgano de
antibacteriano Los extractos El presente Extracto
antibacteriano hidroalcohólicos de los un vegetal en Dos
in vitro de hidroalcohólicos trabajo de hidroalcohólico
in vitro los frutos de Vaccinium contacto con concentraciones
2 extractos de Vaccinium investigación de Vaccinium
extractos corymbosum etanol al 70% al 50% y 75 %
hidroalcohólic corymbosum fue de tipo corymbosum y
hidroalcoholico (arándano) y Vaccinium Variable
os de los frutos Vaccinium “arándano” y experimental, cualitativa,
s de los frutos floribundum Prueba
de Vaccinium floribundum (mullaca) Vaccinium de corte nominal
de Vaccinium estadística
corymbosum sobre Staphylococcus floribundum transversal y Se determinó
corymbosum
(arándano) y aureus “mullaca” enfoque mediante halo ANOVA y
(arándano) y Variable T-student
Vaccinium Objetivos específicos presentan efecto cuantitativo. de inhibición Medición del
Vaccinium Dependiente
floribundum Determinar el efecto antibacteriano in que se diámetro del
floribundum Efecto
(mullaca) antibacteriano in vitro de vitro sobre presentó halo de
(mullaca) sobre antibacteriano
sobre extractos Staphylococcus alrededor del inhibición en
Staphylococcus in vitro sobre
Staphylococus hidroalcohólicos de los aureus disco que milímetros (mm)
aureus? Staphylococcus
aureus frutos de Vaccinium Hipotésis Nula contiene las
aureus
corymbosum y (Ho) concentracion
Vaccinium floribundum Los extractos es del extracto.
al 50% y 75% sobre hidroalcohólicos
Staphylococcus aureus de Vaccinium
corymbosum
Comparar el efecto “arándano” y
antibacteriano in vitro de Vaccinium
extractos floribundum
hidroalcohólicos de los “mullaca” no
frutos de Vaccinium presentan efecto
corymbosum y antibacteriano in
Vaccinium floribundum vitro sobre
al 50% y 75% sobre Staphylococcus
Staphylococcus aureus aureus
utilizando un fármaco de
referencia
20
4.7. PRINCIPIOS ÉTICOS
También se tuvo presente los principios éticos descritos en el código de Ética para la
precauciones necesarias para asegurarse de que sus sesgos, y las limitaciones de sus
21
V. RESULTADOS
5.1 RESULTADOS
Staphylococcus aureus
X ± DS
*ANOVA (P<0.05).
Leyenda:
X: promedio
D.S.: desviación estándar
E.H: Extracto Hidroalcohólico
22
Tabla 2. Comparación del efecto antibacteriano in vitro de los extractos etanólicos de
Staphylococcus aureus.
23
5.2 ANÁLISIS DE RESULTADOS
el grupo blanco donde se utilizó el solvente (solución salina fisiológica) se observa que
no hubo inhibición del crecimiento bacteriano, por esto la medida de los halos es de
6mm (correspondiente al diámetro del disco) este grupo sirvió como control de calidad
de inhibición de 21.2 ± 1.06 mm. este valor se encuentra dentro de lo esperado según
el reporte del Instituto Nacional de Salud que señala un valor mayor de 21mm. frente
24
al afectar el espesor y el tamaño de las monocapas de una manera dependiente de la
dosis (40).
presentaron efecto antibacteriano esto puede explicarse por lo reportado por Shen et
al., que identifican en Vaccinium compuestos fenólicos como ácido clorogénico, ácido
halos de inhibición con mayor diámetro con un valor de 11.9 ± 0.55 mm de longitud.
utilizando la prueba T – Student donde los valores de significancia para todos los
grupos muestran un p<0.05, es decir que en todas las comparaciones realizadas existen
del estándar Ciprofloxacino con los extractos de Vaccinium en todos los casos el
extracto de V. corymbosum al 75% que muestra un efecto superior a todos los demás
extractos, seguido por el extracto de V. floribundum al 75% esto podría explicarse por
lo reportado por Llivisaca et al., quienes manifiestan en sus estudios que las bacterias
gramnegativas son más susceptibles a los extractos de hojas y frutos de mortiño que
25
El extracto de V. corymbosum al 50% muestra un halo de inhibición mayor que el de
por Samad et al que indican que los ácidos fenólicos como los ácidos gálico y cafeico
de los microorganismos lo que puede dar lugar a la inhibición o muerte del patógeno.
26
VI. CONCLUSIONES
Staphylococcus aureus.
mayor efecto.
Staphylococcus aureus mostraron mejores resultados cuanto más alta fue la dosis
27
ASPECTOS COMPLEMENTARIOS
28
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36
ANEXOS
37
ANEXO 1
Valores del diámetro de los halos de inhibición en milímetros (mm) del grupo estándar
farmacológico (ciprofloxacino )
Estándar
Farmacológico D1 D2 D3 D4
(ciprofloxacino ) (mm) (mm) (mm) (mm)
Placa 1 21 20 20 21
Placa 2 21 20 22 21
Placa 3 20 20 21 23
Placa 4 24 21 22 21
Placa 5 22 21 21 22
Promedio 21,20
Desviación estándar 1,06
Leyenda: E.H.: Extracto hidroalcólico
D : Disco
ANEXO 2
Valores del diámetro de los halos de inhibición en milímetros (mm) del extracto
hidroalcoholico de Vaccinium corymbosum (50%) sobre Staphylococcus aureus
E.H.
Vaccinium D1 D2 D3 D4
corymbosum (50%) (mm) (mm) (mm) (mm)
Placa 1 10 10 11 11
Placa 2 10 09 09 10
Placa 3 10 09 10 10
Placa 4 10 11 12 10
Placa 5 11 10 11 10
Promedio 10,2
Desviación estándar 0,76
Leyenda: E.H.: Extracto hidroalcólico
D : Disco
38
ANEXO 3
Valores del diámetro de los halos de inhibición en milímetros (mm) del extracto
hidroalcoholico de Vaccinium corymbosum (75%) sobre Staphylococcus aureus
E.H.
Vaccinium D1 D2 D3 D4
corymbosum (75%) (mm) (mm) (mm) (mm)
Placa 1 12 12 11 13
Placa 2 12 12 11 12
Placa 3 12 11 12 12
Placa 4 12 12 13 12
Placa 5 11 12 12 12
Promedio 11,9
Desviación estándar 0,55
Leyenda: E.H. = Extracto hidroalcólico
D : Disco
ANEXO 4
Valores del diámetro de los halos de inhibición en milímetros (mm) del extracto
hidroalcoholico de Vaccinium floribundum (50%) sobre Staphylococcus aureus
E.H.
Vaccinium D1 D2 D3 D4
floribundum (50%) (mm) (mm) (mm) (mm)
Placa 1 08 09 09 10
Placa 2 09 08 08 08
Placa 3 09 09 09 10
Placa 4 09 08 08 08
Placa 5 09 09 10 09
Promedio 8,80
Desviación estándar 0,69
Leyenda: E.H.: Extracto hidroalcólico
D : Disco
39
ANEXO 5
Valores del diámetro de los halos de inhibición en milímetros (mm) del extracto
hidroalcoholico de Vaccinium floribundum (75%) sobre Staphylococcus aureus
E.H.
Vaccinium D1 D2 D3 D4
floribundum (75%) (mm) (mm) (mm) (mm)
Placa 1 10 11 10 12
Placa 2 11 10 10 10
Placa 3 10 10 10 09
Placa 4 11 12 10 10
Placa 5 10 11 10 09
Promedio 10,30
Desviación estándar 0,80
Leyenda: E.H.: Extracto hidroalcólico
D : Disco
40
ANEXO 6
CERTIFICACIÓN DE LA PLANTA
41
ANEXO 7
floribundum
42
Fig 3. Inóculo de Staphylococcus aureus semejante al tubo N° 0,5 del nefelómetro de
MacFarland
Fig 4. Siembra del inóculo de Staphylococus aureus en las placas de Agar Muller- Hinton
43
Fig 5. Colocación de los discos embebidos en las concentraciones de cada uno de los
Fig 6. Incubación de las placas Petri conteniendo los grupos experimentales, blanco y
44
Fig 7. Grupo blanco después de 24h de incubación a 37°C (control negativo)
positivo)
45
Fig 9. Grupos experimentales después de 24 horas de incubación a 37°C
46