Tarea Espectro

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIHUAHUA
Facultad de Ciencias Químicas
Espectrofotómetro UV-vis virtual: Ejercicios

Dr. Johan Mendoza Chacón
Alexis Mendoza Piñon

Matricula: 345687
Espectrofotómetro UV-vis virtual: Ejercicios
Introducción
La espectroscopia ultravioleta-visible es una espectroscopia de emisión de fotones,
utiliza la radiación electromagnética de las regiones visible, ultravioleta cercana e
infrarroja cercana del espectro electromagnético, una longitud de onda entre 200 y
800 nm. La radiación absorbida por las moléculas desde esta región del espectro
provoca transiciones electrónicas de
ciertos grupos que pueden ser
cuantificadas, que se les conoce como
grupos cromóforos presentes en
colorantes, un ejemplo de esto es el p-
nitrofenol Es una molécula orgánica que
tiene un anillo bencénico con dos
sustituyentes -NO2, y -OH, en medio
alcalino refleja una tonalidad amarilla, En el pnitrofenol los grupos funcionales nitro
e hidroxilo dan origen a transiciones del tipo n-->σ ya que contiene pares
electrónicos no compartidos.
La cuantificación de proteínas con Espectrofotometría es un método que usa la luz

ultravioleta y la espectroscopía visible para determinar de manera rápida la
concentración de proteínas, se utiliza el método de Bradford para cuantificar dichas
concentraciones, contiene un cromóforo azul de Coomassie presenta un máximo de
absorbancia a 465 nm. Este máximo se desplaza a 595 nm cuando se encuentra
interaccionando con una proteína. Para una relación cromóforo/proteína adecuada,
el valor de A595nm será proporcional a la concentración de proteínas, entre otras
macromoléculas proteicas se encuentra la hemoglobina con un distintivo color rojo,
absorber longitudes de onda entre 390 y 630 nm.
Actividad 1 Relación entre absorbancia y concentración
para-nitrofenol
Cubeta: 1 2 3
Volumen pNF 1 2 3
Volumen de agua 2 1 0
Cubeta: 1 2 3
A405 0.530 1.069 1.615
Análisis Cualitativo de Resultados:
A medida que la concentración de para-nitrofenol aumenta lo hace la absorbancia, un ejemplo es

la cubeta 1 la absorbancia es menor a la absorbancia de la cubeta 2, donde la concentración de
pNF es el doble. simultáneamente el color amarillo aumenta de intensidad en las cubetas que
contienen un disolución con más concentración de pNF
Análisis cuantitativo de resultados
C µM A405
1 26.66 0.534
2 53.33 1.069
3 80 1.615
SOLUCION MADRE 80 µM pNF
(1)(80µM)
𝐶2 = = 26.66 µM
3𝑚𝑙
(2)(80µM)
𝐶2 = = 53.33µM
3𝑚𝑙
(3)(80µM)
𝐶2 = = 80 µM
3𝑚𝑙
c2 57.965
v2 3
v1 1
c1=c2v2/v1
y = 0.0203x - 0.0137
x=(y+0.0137/0.0203)
x=(1.63+0.0137/0.0203)
x=57.965
𝑐1 = 57.965 ∗ 3/1 = 173.896

Actividad 2: Fundamento de un ensayo de cuantificación de proteínas
Cubeta: 1 2 3
Volumen de 0 1 2
proteína
Volumen de 3 2 1
reactivo
Medidas de absorbancia
Cubeta: 1 2 3
A595 0.000 0.197 0.374
Análisis Cualitativo de Resultados
La coloración azul aumenta conforme aumenta la concentración de proteínas junto
con el Abs.
Análisis Cuantitativo de Resultados
Concentración 𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎𝑠 = 800 𝑚𝑔/𝐿
c1v1=c2v2
800𝑚𝑔 ∗ 1 𝑚𝑙
= 0.266𝑚𝑔/𝑚𝑙
3 𝑚𝑙
800𝑚𝑔 ∗ 2 𝑚𝑙
= 0.533𝑚𝑔/𝑚𝑙
3 𝑚𝑙
Cubeta Concentración Absorbancia 405
concentración Abs
1 0.000 0.000
2 0.266 0.197
3 0.533 0.374
x=(0.461-0.0033)/0.0007
x=653.857
c1=c2v2/v1
Abs 0.461
c?
c2 653.857143
v2 3
v1 1
𝑐1 = 653.857 ∗ 3/1 = 1961.571 mg/L
2ª Fundamento de un ensayo de cuantificación de proteínas
Cubeta: 1 2 3
Volumen de 0 1 2
proteína
Volumen de 1 1 1
reactivo
Medidas de absorbancia
Cubeta: 1 2 3
A595 0.000 0.325 0.66
Análisis Cualitativo de Resultados
A pesar de utilizar un distinto reactivo se obtuvieron resultados de concentraciones
iguales a la anterior práctica, la absorbancia y la concentración de proteínas son
directamente proporcionales.
Análisis cuantitativo de resultados
Cubeta Concentración Absorbancia 405
1 0.000 0.000
2 0.266 0.325
3 0.533 0.66
Hb1 Espectro de absorción de la hemoglobina
Cubeta: 1 2 3
Volumen de 3 2 1
hemoglobina
Segunda medida
Cubeta Concentración A 410 A 570
1 200 1.459 0.168
2 133.33 0.987 0.121
3 66.66 0.513 0.078
¿Cómo puedes describir las conclusiones de lo observado? ¿Cuál de las
longitudes de onda sería útil para determinar la concentración de muestras
problema de hemoglobina?
al compararse las longitudes de onda se observa que el pico mas alto es a 410nm
es el punto de mayor absorbancia y seria la más útil por esta razón.
cubeta TIPO DE MÁXIMO DE grafico

HEMOGLO ABSORCIÓN
BINA
1 Desoxihemoglobina 560
2 Oxihemoglobina 590
3 Metahemoglobina 640
4 Carboxihemoglobina 545
5 Cianmetahemogobina 548

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Alexis Mendoza Piñon

La cuantificación de proteínas con Espectrofotometría es un método que usa la luz

Análisis Cualitativo de Resultados:

A medida que la concentración de para-nitrofenol aumenta lo hace la absorbancia, un ejemplo es

Análisis cuantitativo de resultados

𝑐1 = 57.965 ∗ 3/1 = 173.896

cubeta TIPO DE MÁXIMO DE grafico

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