Biotecnologías de la reproducción

aplicadas al bovino

Unidad 4

Transferencia de embriones

Prof. M.V. Sergio A. Marcantonio

 BIOTECNOLOGÍAS DE LA REPRODUCCIÓN APLICADAS AL BOVINO

Unidad 4. Transferencia de embriones

Objetivos de la unidad

• Facilitar la comprensión de la importancia de la transferencia embrionaria

(TE) dentro de las biotecnologías reproductivas.

• Brindar conocimientos sobre la evolución de la TE a nivel mundial.

• Aportar información sobre los beneficios de la TE

• Generar motivación en la adquisición de los primeros conceptos clave del

curso.

Palabras clave

Donante; receptora; superovulación; sincronización; flushing.

Red conceptual

MEJORAMIENTO GENÉTICO

Mayor potencial reproductivo Mayor intercambio internacional

TRANSFERENCIA EMBRIONARIA

EVOLUCIÓN

ADOPCIÓN

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 M.V. Sergio A. Marcantonio

Introducción
Al igual que en la unidad anterior, comenzaremos por la definición de la
biotecnología. En este caso la transferencia embrionaria (TE): consiste en
recolectar el embrión del tracto reproductivo de una hembra (denominada donante)
y transferirlo dentro del tracto reproductivo de otra hembra (receptora) para que
continúe la gestación, para y críe a ese hijo.

En el caso del bovino, la TE incluye un tratamiento de superovulación o

superestimulación. Es decir, se realiza un tratamiento hormonal para que en lugar
de producirse una ovulación única se produzca una ovulación múltiple. Esto
aumenta la eficiencia de la técnica al permitir recuperar una mayor cantidad de
embriones por donante. Luego la vaca es inseminada y 7 días más tarde los
embriones formados son recuperados del útero, mediante un lavaje o flushing. Los
embriones son evaluados, tras lo cual, los que resulten aptos, pueden ser
transferidos en fresco uno por uno a vacas receptoras sincronizadas o bien
congelados. La vaca receptora cumplirá las funciones de una incubadora para el
desarrollo embrionario y fetal hasta el nacimiento del ternero y luego lo criará hasta
el destete.

Glosario

Donante: hembra que aporta los embriones, por lo tanto el 100% de la genética de
los hijos.

Receptora: hembra que recibe los embriones y lleva a cabo la gestación, parto y
crianza del hijo de la donante.

Flushing: lavaje. Maniobra de recuperación de los embriones de la donante en forma

transcervical (no quirúrgica).

La pregunta inmediata es ¿para qué? La contestación la encontraremos a lo

largo de la unidad. Pero como adelanto diremos que la TE permite multiplicar el
potencial reproductivo de las hembras, con el consiguiente mayor aprovechamiento

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de las reproductoras de alto valor genético. Esta biotecnología es capaz de liberar a
la hembra de la pesada carga de la gestación, al ser extraídos y colocados sus
embriones en las receptoras para la continuidad de la preñez.

Evolución

La primera transferencia de embriones en el mundo fue realizada en conejos

en 1890 y la primera vez que fueron recuperados embriones bovinos fue en 1930,
en el laboratorio de embriología de Baltimore, EE.UU. No obstante, hubo que
esperar más de 20 años hasta que la TE comenzara a difundirse y fue justamente
en la década del ’50 cuando nació el primer ternero a partir de un trabajo conjunto
del Departamento de Agricultura de los EE.UU. (USDA) y la Universidad de
Wisconsin. En esta época la transferencia era realizada en forma quirúrgica. El
progreso fue muy lento hasta los ’70, en que surgió la técnica de recuperación
embrionaria transcervical (no quirúrgica), que permitió a la TE adquirir las
condiciones para ser apta a nivel comercial. En este sentido, es necesario resaltar
los trabajos pioneros de los investigadores Elsden, Hasler y Seidel.

En la década del ’70 también comenzaron los primeros intentos de

micromanipulación de embriones. El primer ternero logrado a partir de un embrión
biopsiado para determinar el sexo nació en 1975. En 1981 nació el primer ternero
partiendo de un embrión producido in vitro.

Aporte de la TE a la ganadería

Hay muchas razones por las cuales un productor puede optar por utilizar la
TE en su establecimiento. La primera de ellas está vinculada con el gran potencial
de mejoramiento genético que tiene esta biotécnica. Así como la IA multiplica la
capacidad reproductiva de los toros, con la TE las hembras superiores pueden ser
más intensamente reproducidas en uno o varios establecimientos.

La superovulación y transferencia de embriones posibilita a una hembra

particular producir mucha mayor descendencia por año y a lo largo de su vida útil.

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En condiciones naturales una vaca suele dar una cría por año. La superovulación y
TE permite obtener 12 a 15 terneros por año de una vaca. En consecuencia se
pueden elevar los niveles de producción de un rodeo con mucha mayor rapidez que
si se dependiese del servicio natural.

Esos hijos pueden llevar los genes mejoradores de su madre, vinculados por
ejemplo con características de crecimiento (ganancia de peso predestete,
posdestete, etc.), y conformación (área de ojo de bife, espesor de grasa, grasa
intramuscular, etc.). Además, la TE evita el estrés del parto y sus complicaciones,
ayudando a que la hembra pueda ser más longeva.

Los embriones obtenidos pueden ser congelados y luego descongelados

antes de su transferencia, sin mayor pérdida en la tasa de gestación (50-60%). Esto
tiene un enorme impacto en la comercialización de genética, por dos aspectos: 1. El
embrión representa el producto genético que entraña menores riesgos sanitarios y
2. El transporte de embriones es la alternativa más económica de intercambio de
genética.

Enumeraremos entonces algunas de las ventajas que aporta la TE a la

ganadería bovina:

• Aumenta el número de crías a partir de una hembra genéticamente

superior.

• Acorta el intervalo generacional.

• Permite el almacenamiento por largo tiempo (congelamiento).

• Facilita la importación/exportación de bovinos.

• Ayuda al control de enfermedades.

• Facilita la producción de mellizos.

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Nivel de uso en la Argentina y en el mundo

Como vimos en la Unidad 1, en la actualidad son transferidos alrededor de

800.000 embriones por año (540.000 producidos in vivo y 250.000 in vitro).
Brasil es líder absoluto en América del Sur, con más de 280.000 transferencias
(in vivo + in vitro) y líder mundial en actividad in vitro con 86% de la actividad.

Para ver la evolución de la técnica, tomemos el ejemplo de la raza más

numerosa a nivel mundial: Angus. Vemos que en los EE.UU. la proporción de
terneros nacidos por TE del total de terneros registrados en 1987 era 3,6%, en
2002, 8,9% y en 2007, 11,5%. No obstante, en los países desarrollados hubo
una reducción en el crecimiento. En contraposición, en Sudamérica y Japón se
experimenta un sostenido aumento.

Respecto a la producción de embriones en Argentina, en 2008 se

colectaron 43.000 embriones de razas carniceras, de los cuales 21.000 eran
transferibles, según datos de CABIA (Cuadro 1).

Cuadro 1. Colección y transferencia de embriones bovinos de razas carniceras en

Argentina.
Adaptado de CABIA*
Año

1998 1999 2000 2001 2002 2004 2005 2006 2007 2008

Número de colectas 1.907 2.708 1.728 1.439 1.492 2.646 3.421 3.343 4.545 3.692

Nº embriones transferibles 11.594 14.949 10.088 9.085 7.876 15.386 17.380 16.512 23.803 21.315

Nº embriones transferidos 4.839 5.865 4.505 3.588 2.123 4.800 5.069 5.349 7.196 5.063
frescos
Nº embriones transferidos 3.264 4.613 4.505 2.839 3.734 6.161 6.869 7.471 7.196 4.930
congelados nacionales
Nº embriones transferidos 1.555 1.660 1.234 2.976 1.174 1.147 1.324 1.561 114 584
congelados importados
Nº embriones exportados 242 409 250 - 550 143 761 1.523 3.586 5.755

Nº embriones 6.495 9.143 4.715 5.662 5.044 10.206 12.276 12.401 11.325 12.444
almacenados

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La técnica de TE

Si bien el objetivo del curso es analizar el posible uso e impacto de las

biotecnologías reproductivas en los rodeos bovinos, y no aprender
minuciosamente cómo llevarlas a cabo, haremos una somera descripción de
cómo se realiza esta técnica.

Selección de la donante

El primer paso, y probablemente el más importante en todo programa de

TE, es la selección de la vaca donante. La hembra debe estar libre de
enfermedades, anormalidades reproductivas y defectos genéticos, en adecuada
condición corporal y ciclando. Pero estas condiciones no garantizan el éxito de
emprendimiento. Uno de los aspectos clave es el económico. En este sentido se
debe pensar si los hijos que puedan producirse a partir de ella justifican la
inversión en la técnica. Por eso es esencial que la donante tenga características
genéticas de importancia económica.

Superovulación

Una vez que la vaca donante es seleccionada, se inicia un tratamiento con

hormonas gonadotróficas (FSH) para lograr el crecimiento y ovulación de la
mayor cantidad de folículos posible. Este proceso se denomina superovulación.

La respuesta al tratamiento superovulatorio es muy variable,

considerándose que en general el 33% de los animales da una buena
respuesta, el 33% regular y el 33% no responde. La respuesta es muy variable
de vaca en vaca. La mayoría responde con la producción de 5 a 7 embriones
transferibles, pero el rango puede ser 0 a 12. Algunas vacas directamente no
responden; otras producen pocos embriones de buena calidad y otras, muchos
embriones de baja calidad con el mismo tratamiento.

Si bien hay diferentes esquemas superovulatorios, una alternativa es el uso

de la hormona FSH (ej. Folltropin®, Pluset®) administrada en 2 dosis diarias
decrecientes durante 4 días, combinado con la colocación de dispositivos
intravaginales liberadores de progesterona (DIV), estradiol (benzoato de
estradiol; BE) y prostaglandina (PG). El esquema puede verse en el Cuadro 2.

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Cuadro 2. Esquema de superovulación en base a progesterona,
estrógenos y PG.
Día Actividad

0 Colocación del DIV + 50 mg de progesterona im + BE

AM : 60mg de FSH
5
PM : 60 mg de FSH

AM : 40 mg de FSH
6
PM : 40 mg de FSH

AM : 30 mg de FSH + PG
7
PM : 30 mg de FSH + Retiro del DIV

AM : 20 mg de FSH
8
PM : 20 mg de FSH

9 Detección de celo e IA a las 0, 12 y 24 hs de detectado

16 Lavaje y transferencia en fresco

Inseminación

Una correcta IA de la donante es critica para el resultado de la TE. La

superovulación genera la liberación de una gran cantidad de ovocitos durante 6
a 12 horas, por lo que la llegada de espermatozoides viables en el momento
adecuado es fundamental. Habitualmente la IA se realiza a las 12 y 24 hs de
detectado el celo.

Recolección de los embriones

La recuperación de los embriones se realiza mediante lavaje uterino o

flushing a los 7 días de la IA. Es decir, se introduce un líquido especial en el
útero, se masajea y se retira, con la finalidad que el líquido arrastre consigo los
embriones.

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Existen distintas técnicas e instrumental para realizar la recuperación
embrionaria. Solamente relataremos una.

Al día 7 la donante es sujetada en una casilla con cepo. Se evacua el recto

y se higieniza la zona perineal. Se aplica una anestesia epidural en la base de la
cola para bloquear las contracciones y facilitar la maniobra.

El líquido de lavaje (solución de PBS) es introducido en el útero mediante

un catéter flexible plástico que es ingresado por la vagina y colocado en el
cuerno uterino gracias a una maniobra similar a la de IA.

El catéter tiene 40 cm de largo, y puede ser de 2 o 3 vías (sonda Foley),

con un estilete metálico que le da rigidez.
El catéter es enhebrado a través del cuello
uterino con la guía de una mano y brazo
dentro del recto, y fijado a uno de los dos
cuernos insuflando con solución fisiológica
o aire un “balón de goma” por una de las
vías . Esto permite mantener el catéter e Sonda Foley de doble vía.

su lugar y evita el reflujo de la solución de lavaje. Luego se retira el estilete

metálico. La otra vía del catéter es conectada mediante una tubuladura de goma
látex o silicona a un envase con la
Manguito inflable solución de lavaje. La tercera vía está
conectada mediante otra tubuladura a un

Filtro de embriones.

envase de recolección que puede

tener un filtro para facilitar la
búsqueda en un menor volumen de
líquido.

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 BIOTECNOLOGÍAS DE LA REPRODUCCIÓN APLICADAS AL BOVINO
La solución de lavaje es introducida en el cuerno uterino. Puede hacerse
por gravedad, colocando el frasco aproximadamente 1 m por arriba del lomo de
la vaca o con una jeringa.

Se masajea con la mano que está dentro del recto para facilitar el lavaje. El
líquido es luego retirado por el mismo catéter y colectado pasando por un filtro
en una placa de Petri. Este procedimiento es repetido en el otro cuerno. El
lavaje puede llevar unos 30 minutos.

Filtro de embriones

Figura 1. Esquemas de dos tipos de circuitos de recolección de embriones.

A la izquierda un circuito cerrado. A la derecha uno abierto (inyección y recolección
con una jeringa). Tomado de Palma y col., 2001.

Búsqueda y evaluación de los embriones

Con la ayuda del aumento dado por una

lupa estereoscópica, los embriones son
buscados y evaluados por su morfología. A
esta altura habitualmente se encuentran en el
estado de mórula o blastocisto temprano.

Pueden ser clasificados en distintos

grados: 1 Excelentes o buenos; 2 regulares; 3
pobres y 4 degenerados. Equipo de laboratorio de embriología

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 M.V. Sergio A. Marcantonio
Sincronización de las receptoras y transferencia propiamente dicha

El manejo de las receptoras es otro de los pasos críticos. Las receptoras

deben ser reproductivamente aptas y responder adecuadamente al futuro
trabajo de parto y crianza. Debe estar en buena condición corporal y ciclando
regularmente.

Para lograr la máxima preñez, la receptora debe estar en condiciones

anátomo-fisiológicas lo más parecidas a la donante. Al momento de la
transferencia, las receptoras deben estar en el mismo día del ciclo que la
donante (máximo 24 hs de diferencia). Hay diferentes formas de sincronizarlas.
Independiente de ello, el objetivo es lograr que los embriones sean transferidos
a receptoras que se encuentren en los días 6, 7 u 8 del ciclo. Una forma es
mediante la aplicación de PG a hembras con CL. Otro método puede ser en
base a GnRH y PG o con el uso de dispositivos intravaginales, estrógenos y PG.

Figura 2. Esquema de sincronización de donante y receptoras.

Para transferir el embrión también hay muchas alternativas e instrumental.

Una forma es utilizando la pistola de Cassou y el embrión cargado en pajuelas
de 0,25 ml. Cada embrión se carga en una pajuela.

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 BIOTECNOLOGÍAS DE LA REPRODUCCIÓN APLICADAS AL BOVINO
Se prepara la receptora con anestesia
epidural. La pajuela con el embrión es armada
en una pistola de TE. Se introduce la pistola a
través de la vagina, se enhebra el cuello y se
lleva su extremo hacia el cuerno del mismo lado
del ovario que tiene el cuerpo lúteo. Se
descarga el embrión en el extremo anterior del
cuerno (por delante de la bifurcación externa de
los cuernos). Implantación de un embrión

Uso de embriones congelados

Existen diferentes métodos de congelación de embriones bovinos. Los más

frecuentes son: 1. Método convencional y 2. Transferencia directa (DT).

Como adelantamos en la Unidad 2, en el método convencional se utiliza

como crioprotector el glicerol. Debido a su toxicidad, es necesario retirarlo del
embrión mediante sucesivos “lavajes” durante la descongelación.

En la DT se utiliza etilenglicol como crioprotector, y los embriones pueden

ser transferidos directamente luego de la descongelación. Otra alternativa de
preservación es la vitrificación.

TE a tiempo fijo
Uno de los principales componentes del costo de la TE está dado por el
mantenimiento de las receptoras. El costo de mantenimiento se ve elevado por
el costo de la ineficiencia para detectar sus celos, que provoca que algunas
receptoras no puedan ser utilizadas. Esto llevó a incursionar en programas que
permitan controlar hormonalmente la ovulación y prescindir de la detección de
celos, transfiriendo los embriones a tiempo fijo (TETF).

Uno de los protocolos que puede utilizarse está descripto en el Cuadro 3.

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Cuadro 3. Esquema de sincronización de receptoras para TETF.

Día Actividad realizada

0 Colocación Dispositivo intravaginal (DIV) + benzoato de estradiol (BE)

5 Inyección de PG + 400 UI de eCG

8 Retiro DIV

9 Inyección BE

10 Considerado día de celo

17 TETF a las receptoras con cuerpo lúteo, diagnosticado mediante ecografía

Figura 3. Esquema del proceso de TE.

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 BIOTECNOLOGÍAS DE LA REPRODUCCIÓN APLICADAS AL BOVINO

Resultados
Normalmente se logra un 55-70% de preñez con embriones frescos y 50-
65% con embriones congelados. Pero son muchos los factores que pueden
modificar los resultados.

Costos de la TE
El costo puede variar enormemente de una situación a otra. Existen
muchas formas por la cuales un productor puede acceder a un servicio de TE.
Puede ser que el grupo profesional transferencista realice el trabajo en el
campo, o que las vacas donantes sean llevadas a un centro de TE. Otra opción
es que el productor haya comprado embriones congelados (nacionales o
extranjeros) para ser transferidos a sus receptoras.

Otro factor que afecta el costo de la TE es el número de donantes. Uno de

los componentes más importantes del costo está representado por las
receptoras (300-400 kg/año).

Cuadro 4. Costos estimados de la TE con embriones congelados.

Item Costo

Tratamiento (drogas y lavaje) 180 kg

Dosis de semen (2) 30 kg

Congelación (20 kg/embrión) 120 kg

Costo por embrión 55 kg

Implantación (30 kg/implante) 30 kg

Costo por preñez (55%) 150 kg

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Resumen

La transferencia embrionaria (TE) consiste en recolectar el embrión

del tracto reproductivo de una hembra (denominada donante) y transferirlo
dentro del tracto reproductivo de otra hembra (receptora) para que continúe
la gestación, para y críe a ese hijo. En el caso del bovino, la TE incluye un
tratamiento de superovulación o superestimulación, lo que aumenta la
eficiencia de la técnica al permitir recuperar una mayor cantidad de
embriones por donante.

El progreso de la TE fue muy lento hasta los ’70, en que surgió la

técnica de recuperación embrionaria transcervical (no quirúrgica), que le
permitió adquirir las condiciones para ser apta a nivel comercial.

Hay muchas razones por las cuales un productor puede optar por
utilizar la TE en su establecimiento. La primera de ellas está vinculada con el
gran potencial de mejoramiento genético que tiene esta biotécnica. La
superovulación y transferencia de embriones posibilita a una hembra
particular producir mucha mayor descendencia por año y a lo largo de su
vida útil. Asimismo, los embriones obtenidos pueden ser congelados y luego
descongelados antes de su transferencia, lo que otorga un enorme impacto
en la comercialización de genética, por dos aspectos: 1. El embrión
representa el producto genético que entraña menores riesgos sanitarios y 2.
El transporte de embriones es la alternativa más económica de intercambio
de genética.

La técnica implica los siguientes pasos: selección de la donante,

tratamiento superovulatorio, IA, recuperación o lavaje de los embriones,
transferencia a receptoras sincronizadas o congelación.

Normalmente se logra un 55-70% de preñez con embriones frescos y

50-65% con embriones congelados. Pero son muchos los factores que
pueden modificar los resultados.

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BIOTECNOLOGÍAS DE LA REPRODUCCIÓN APLICADAS AL BOVINO

Bibliografía

Cabodevila, J. 1997. Transferencia de embriones y biotécnicas derivadas. En:

Suplemento especial Therios de Reproducción en Bovinos.

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Nicaragua.

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Ithaca NY (www.ivis.org)

Palma, G.A. 2001. Briotecnología de la Reproducción. Ediciones INTA.

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