Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
Toxicologie Expérimentale
Toxicologie Expérimentale
I. Introduction
Les mdicaments usage humain ou vtrinaire doivent prsenter une scurit pour les sujets
auxquels ils sont destins. Cette scurit est apprcie par les investigations de toxicit
exprimentale chez lanimal. En effet aprs la mise en vidence dune proprit pharmacologique
intressante pouvant tre exploite en thrapeutique, la substance est soumise des tudes
toxicologiques pour apprcier les risques quelle prsente. Les essais de toxicit exprimentale se
divisent en deux groupes :
Ceux dont la ralisation est indispensable avant toute tentative dadministration lhomme
(essais pr-requis) :
Ceux pour lesquels on prend le risque de les raliser conjointement avec les tudes cliniques chez
lhomme :
Les tudes de toxicit exprimentale doivent tre effectues selon des protocoles biens tablis et
ralises dans des conditions de bonnes pratiques de laboratoire. Lvaluation exprimentale de la
toxicit globale dun mdicament permet de dterminer :
Cette valuation permet, aprs tude clinique chez lhomme, lapprciation du bnfice attendu
par rapport aux risques encourus.
La DL 50 correspond la dose capable de tuer, dans des conditions dtermines, la moiti des
animaux mis en exprience dans une mme espce animale.
a. Protocole exprimental
Gnralement, ce sont le rat et la souris qui sont slectionns pour dterminer la DL 50.
Quelquefois, une espce autre quun rongeur est utilise lorsque le schmas mtabolique chez la
souris et le rat est diffrent de celui de lhomme. La dtermination de la DL 50 se fait sur des
animaux des deux sexes, jeunes et gs, cause de leurs diffrences de sensibilit.
1. Voies dadministration
La substance est administre par deux voies, une qui est celle de lexposition humaine et lautre
assurant une biodisponibilit totale.
Une gamme de six doses ou plus est slectionne pour la dtermination de la DL 50. Le rapport
entre deux doses successives doit tre compris entre 1,2 et 1,5. Les lots sont constitus de 10
animaux identiques sur les plans espce, souche ou origine, sexe, ge et poids. Chaque lot
danimaux recevra une dose de la substance tester.
1. Dure dobservation
Aprs administration les animaux sont mis en observation pendant 14 jours. Sil y a apparition
des signes de toxicit, la dure dobservation est indtermine.
a. Examens
Lheure de la mort et le nombre de morts doivent tre nots ainsi que les symptmes. Des
examens macroscopiques doivent tre faits sur tous les animaux morts et au moins quelques
survivants(ceux qui prsentent des signes de morbidit). Lautopsie est en mesure de fournir des
informations sur lorgane cible.
a. Evaluation
Ltude de la toxicit aigu dun produit permet dtablir la relation entre la dose administre et
lintensit des effets observs ainsi que le calcul de la DL50 avec ses limites de confiance.
1. Calcul de la DL50
DL50= DL100 ab / n
Cest une mthode graphique qui consiste porter sur le papier semi log les pourcentages de
mortalit en fonction du logarithme dcimal des doses utilises.
% de mortalit
100
50
DL50 Log dose
Pour rendre linaire la courbe il faut porter sur le papier log-probit le pourcentage de mortalit en
fonction du log de la dose. Comme les produits des pourcentages 0 et 100% tendent vers linfini,
ceux ci sont remplacs par des valeurs corriges.
Correction de 0% :
Y0 = 50 / n
Correction de 100% :
n est le nombre danimaux des lots qui ont donn 0% et 100%de mortalit.
Probits
84
50
16
Log dose
DL16 DL50 DL84
Lcart la moyenne :
= 2 S / 2n
n est le nombre total danimaux dans les lots ayant donns des pourcentages de mortalit entre
et 93%
1.2.1) Rsultat
Index thrapeutique
1. Dfinition
Pour chaque mdicament, il est dfinit un index thrapeutique appel aussi marge de scurit qui
une valeur reprsentant le rapport entre la dose ltale 50 et la dose efficace 50 (DL50 / DE50).
Efficacit Ltalit
Marge
de
scurit
50
Log dose
DE50 DL50
1. Signification
Les mdicaments faible index thrapeutique sont hautement toxiques car la dose ltale se
rapproche de la dose efficace. Ces substances ncessitent un suivi thrapeutique au cours de leur
administration (les cardiotoniques, la thophylline). En ce qui concerne les mdicaments index
thrapeutique moyen la toxicit es t significative (les antibiotiques). Pour les mdicaments
index thrapeutique trs large, la toxicit est trs faible (lacide ascorbique).
davoir des informations sur les effets toxiques potentiels aprs exposition rpte ;
de connatre les organes cibles ;
la mise en vidence deffets rversibles ou irrversibles ;
lexistence ou non de phnomnes cumulatifs et deffets retards.
Dans ce genre dtude, il est donc vitable dutiliser un lot tmoin recevant de leau
physiologique, afin de minimiser les risques dinterprtation des phnomnes pathologiques
indpendants de ladministration du produit.
A. Essai de la toxicit court terme
a. Protocole exprimental
Les espces animales choisies et lhomme doivent prsenter des similitudes sur le plan
pharmacocintique, ltude est effectue sur les deux sexes de deux espces de mammifre dont
lune est diffrente des rongeurs (rat et chien). Pour obtenir des donnes exploitables
statistiquement, on doit utiliser un nombre gal danimaux de chaque sexe pour chaque lot. (voir
tableau)
1. Voie dadministration
Pour la plus part des substances, la voie habituelle est la voie orale, par incorporation dans la
nourriture ou dans leau potable, sil y a risque de raction avec les constituants alimentaires. Si
le produit est dun got dsagrable, il est administr par gavage ou dans une capsule.
1. Dose et Dure
Il est recommand dutiliser une dose forte pouvant produire des signes caractristiques de
toxicit, mais insuffisante pour tuer les animaux ; Une dose faible sans effet toxique, mais active
sur le plan pharmacodynamique ; Une dose intermdiaire, moyenne gomtrique des deux doses
prcdentes. Les doses sont slectionnes sur la base des rsultats des tudes de toxicit aigu
(dl50 et pente de la droite dose rponse ). La dure de ses tudes est en gnral de 90 jours chez
le rat, et jusqu 6 mois voir une ou deux annes chez le chien.
1. Examens
On effectue:
Les animaux morts au cours de ltude et les survivants sacrifis au terme de lessai sont
autopsis. les organes prlevs sont pess et les examens histopathologiques appropris sont
effectus.
a. Rsultats
Lvaluation des rsultats doit prendre en considration la mortalit, la prsence ou labsence des
anomalies comportementales et biologiques ainsi que lidentification des organes cibls et leurs
lsions.
Ltude de la toxicit subaigu nous permet de connatre la dose sans effet observ de la
substance teste chez lanimal. Cette dose sera utilise ultrieurement en clinique et en
toxicologie exprimentale.
Le rat est lanimal de choix, suivi du chien et des primates. Chaque lot exprimental et le lot
tmoin comprennent un nombre identique de mles et de femelles, soit entre 40 et 100 individus
pour les rats, un nombre plus faible de chiens et de primates est admis.
La voie dadministration est la mme que dans les tudes court terme. Les doses utilises
tiennent compte la fois de lusage thrapeutique envisag pour la nouvelle molcule, et des
rsultats des tudes antrieures de toxicologie. Les doses utilises ne doivent pas compromettre la
vie des animaux pendant du temps de lessai. La dure des tudes est gnralement de 2 ans
chez le rat, les chiens et les primates peuvent tre maintenus sept ans ou plus.
1. Examens
a. Rsultats
Lobjectif des tudes de toxicit long terme est de dfinir la nature de la toxicit et de
dterminer la dose sans effet observ. Si la toxicit nest pas trop grave et quune dose sans effet
observ tait dfinie, une dose journalire peut tre extrapole partir des donnes animales, tout
en appliquant le facteur de scurit qui est gale 100. Si les donnes toxicologiques drives de
travaux scientifiques chez lhomme sont insuffisantes, le facteur de scurit, dans le cas contraire,
est abaiss.
A. Indications
Les essais de cancrogense sont indiqus pour les produits qui prsentent une analogie
structurale troite avec les composs cancrognes ; les produits qui, lors de ltude
toxicologique long terme, ont provoqu des manifestations suspectes et les produits destins
une administration vie (les antihypertenseurs, les antidiabtiques oraux).
A. Protocole exprimental
a. Espce, nombre danimaux, dure du traitement
Les espces animales choisies doivent prsenter, avec lhomme, des similitudes mtaboliques vis
vis de la substance tester. Les espces utilises sont la souris, le rat et lhamster.
Gnralement, on commence les tests avec des lots de 50 animaux de chaque sexe par dose, y
compris les lots tmoins (un lot tmoin par sexe) qui reoit uniquement le vhicule cest dire
lexcipient. Le traitement est de 24 mois pour la souris et lhamster , et de 30 mois pour le rat.
La substance tester doit tre donne lanimal par la voie de lexposition chez lhomme. Les
essais sont effectus trois niveaux posologiques. Une dose forte qui produit des signes de
toxicit sans rduire significativement la dure de vie des animaux. Elle est drive partir des
tudes de la toxicit 90 jours. Les deux doses infrieures sont des fractions de la dose la plus
forte (sur et ou ). Les deux lots tmoins recevront, par la mme voie dadministration,
uniquement lexcipient.
a. Examens
a. Evaluation
Par ces tests on recherche si le produit est capable dendommager les chromosomes de
mammifres. In vitro ces essais sont raliss sur des cellules de mammifres en culture, par
analyse des chromosomes en mtaphase. In vivo les tests sont raliss sur les cellules de la
moelle osseuse dun rongeur, chez lequel, aprs administration du produit tester, on compte le
nombre de micronuclus dans les rythrocytes polychromatiques ou on analyse les chromosomes
des cellules en mtaphase.
La cellule rpond aux agressions de lADN par les substances chimiques, par des rparations
enzymatiques pour liminer la partie endommage et la remplacer par un fragment nouvellement
synthtis. Pour valuer une lsion primaire de lADN, on se rfre aux tudes de crossing-over
mitotique chez saccharomyces cervisiae.
A. Evaluation
Si les rsultats des essais effectus sont ngatifs, on peut conclure que le risque de la
mutagenicit est suffisamment faible chez lhomme. Par contre si les rsultats des essais effectus
sont positifs, on peut conclure que le produit test possde des proprits mutagnes.
Cette tude a pour but de dterminer si le traitement des animaux mles et femelles, par le produit
tester, entrane leur strilit ou des malformations chez la descendance, suite laltration des
gamtes mles ou des gamtes femelles. Dans cette tude, on ralise trois combinaisons :
accouplement de mles traits avec des femelles non traites ; accouplement de mles non traits
avec des femelles traites et accouplement de mles traits avec des femelles traites.
Les femelles gestantes sont traites par le produit tester pendant la priode de lorganogense
embryonnaire ; deux jours avant la mise bas, les femelles sont sacrifies et les utrus prlevs.
Pour chaque femelle, on note les sites dimplantation, de rsorption, le poids et le sexe du ftus.
Les femelles sont traites par le produit tester de la fin de la gestation jusqu la fin de la
lactation. Cette tude a pour but de dceler les perturbations de la croissance du ftus, de la
parturition et de la lactation.
*** Les procdures opratoires constituent un travail original du laboratoire, elles peuvent
tre labores dans un premier temps partir de certains ouvrages.
Lors de la rdaction, une procdure opratoire doit comprendre :
un titre ;
un numro ;
le nom et la signature du responsable de son criture ;
la date
Type Espces animales Sexe Age Nombre / Dose (s) Voie (s)
dessai lot
Reproduction :
Rat++ M+F
celle(s)
Rat / Souris M+F A 08 01 dexposition chez
Segment 2 lhomme
celle(s)
Rat / Souris M+F A 08 01 dexposition chez
Segment 3 lhomme