td6 l2 Microbiologie Reponses
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# avril 2014
L2 Microbiologie, TD06
Nutrition et croissance des bactéries
B- Le terme facteur de croissance désigne une substance qui doit entrer impérativement dans
la composition d’un milieu de culture destiné à étudier la croissance des microorganismes.
Vrai.
Exercice 2: Afin d’étudier les besoins nutritionnels de 3 souches A, B et C, on les ensemence sur les 3
milieux suivants.
Composants Quantité
K2HPO4 1g
NO3K 0,5g
MgSO4, 7 H2O 0,2g
CaCl2 0,1g
NaCl 0,1g
Eau distillée 1 litre
Souche A: Prototrophe vis à vis des minéreaux et hétérotrophe vis à vis du carbone (glucose).
Souche B: auxotrophe vis à vis des acides aminés.
Souche C: auxotrophe vis à vis des acides aminés et vitamines apportés par les extraits de levures.
3- Dans certains cas, une vitamine peut être dosée par son effet sur la croissance d’une
bactérie.
a- Quelle caractéristique la bactérie utilisée doit-elle posséder ?
Determination du besoin cellulaire pour un nutriment et quantification des vitamines dans les
produits alimentaires.
Exercice 3 :
Analyse des types trophiques des souches I et II à l’aide des milieux de culture A, B et C.
Composition des milieux donnée en g/L
Milieu A
Phosphate d’ammonium 0,2
Phosphate monopotassique 1
Sulfate de magnésium 0,2
Chlorure de calcium 0,1
Chlorure de sodium 5
Milieu B
Milieu A + citrate trisodique 2
Milieu C
Milieu A + les additifs suivants :
Biotine (10-8), Histidine (10-5), Méthionine (2.10-5), Thiamine (10-6), Pyridoxine (10-6), Acide
nicotinique (10-6), Tryptophane (2.10-5), Panthothénate de calcium (10-5), oligoéléments et glucose
(5)
Souches/milieux A B C
c- Quel est le type trophique vis-à-vis du carbone et des besoins nutritionnels spécifiques
de la souche I ?
La souche I cultivée sur milieu type A plus citrate trisodique qui lui apporte le carbone organique.
C’est une souche hétérotrophe vis à vis du carbone. C’est une souche prototrophe vis à vis des
autres composés, tous minéreaux et chimiotrophes.
On ensemence le milieu B à partir d'une colonie par ce qu’on apporterait par les peptiones des
éléments carbonés et vitaminiques qui masquerait le fait que pour se développer la souche I ne
necessite que du citrate comme apport du C.
Chimioorganotrophe et hétérotrophe.
Elements minéreaux présents en faible quantité apportent les éléments minéreaux necessaires
pour les cofacteurs des enzymes: Mn, Zn, Co, Cu, Ni.
les acides aminés (construction des protéines) et les vitamines sont les cofacteurs enzymatiques et
ils font les transformations métaboliques. Par exemple, le thiamine (B1) enleves les groupes CO2
des metabolites.
On contamine 5 ml de milieu B avec 10 6 Staphylocoques et 102 bactéries appelées souche n°II dans
l’expérience précédente.
Staphylococques:
Nt=N0*2n
8e8=2e5*2n.. n=nombre des generations=11.9. Temps de generation=30 min.
Souche II:
Nt=N0*2n
3e3=2e1*2n. Nombre des generations=7.22. Temps de generation=50 min.
D'habitude la souche II ne pousse pas dans le milieu B. Donc, elle bénéficie de l’apport nutritif
apporté par les staphylocoques.
Les colonies de la souche II forment les satellites autour des colonies Staphylococques.
Exercice 4 :
Cet organisme croit dans l’air ambiant sur des boites de Pétri contenant de l’agar et une solution de
sels minéraux (une source de N, P, S, K, Mg, Fe et autres oligoéléments). Certains minéraux sont
sous forme oxydée, tandis que d’autres, comme le Fe, sont sous forme réduite. Si tous les éléments
sont fournis sous forme oxydée, l’organisme ne croit pas. A l’aide de ces informations, répondez aux
questions suivantes :
h- Quelle est sa source d’énergie la plus probable ? Oxydation des composés minéreaux
comme le Fer
Exercice 5 :
36 colonies bactériennes ont poussé sur un milieu de culture solide ensemencé à partir de 0,1 ml
prélevé à partir d’une dilution de 10-3 d’un échantillon de contenu intestinal. Combien de cellules par
ml estime-t-on dans la culture d’origine ?
A- 360 B- 3 600 C- 360 000 D- 1 800 000 E- 3 600 000
Exercice 6 :
En utilisant la formule Nt = N0x2n, calculer le nombre de bactérie dans une mayonnaise contaminée
après inoculation de 4 cellules de Staphylococcus aureus et incubation à température ambiante
pendant 24 heures. Le temps de génération de S. aureus dans ces conditions est d’une heure.
Exercice 7 :
Une suspension de bactéries de concentration 4x108 bactéries/ml est diluée au 2x10-5. 0,1 ml de la
solution diluée est étalée sur une boite de Pétri et incubée une nuit à 37°C.
E- Cette culture est incubée à 37°C pendant 10h. Quelles caractéristiques doivent posséder les
bactéries pour croitre dans ces conditions ?
Résistance à l’ampicilline
32,000/500 = 64 bactéries/ml
N0 = 64 cellules par ml
Nt = ?
G = t/n t = 600 min n = t/G n= 600/30 n = 20
Nt = N0 x 2n Nt Nt = 16 x 2 20
Soit : 67,108,864 cellules/ml Nt = 1.7. 107
Exercice 8 :
Déterminez (moyenne), à partir du nombre de colonies dénombrées dans les 3 boîtes (milieux
gélosés) et du schéma de dilution ci-dessous, le nombre de cellules bactériennes (UFC) présentes
dans 500 ml de l’échantillon (détaillez vos calculs).
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Informations Supplémentaires
J Monod, Recherches sur la croissance des cultures bactériennes. Hermann, Paris, 1958.
C Taux de croissance
Classification des microbes par leurs metabolismes:
La source de carbone :
organique = organotrophe
non-organique = lithotrophe (ie l'eau)
la lumiere=phototrophe
les chimies=chimiotrophe
Prototrophie: capacité de proliférer dans un milieu de base (milieu minimum) sans nécessiter la
présence de facteurs de croissance particuliers.
Hydrolysat de caséine: une substance protéique (protéine) qui constitue la majeure partie des
composants azotés du lait. Caséine fournit des acides aminés, les glucides, et deux éléments
inorganiques, le calcium et le phosphore.
Tryptone: un mélange des peptides provenant de la digestion de la caséine par la protéase trypsin.
Extrait de levure: levure autolysée. Extrait de levure est un mélange d'acides aminés, des peptides,
des vitamines et des hydrates de carbone solubles dans l'eau et peut être utilisé comme additif pour
les milieux de culture.
Peptone: un mélange de peptides et d'acides aminés formée par l'hydrolyse d'une protéine.
Dosage d'un nutriment pour determiner son effet sur la crossance. On quantifie la croissance des
cellules en fontion de la quantité d'un nutriment pour calculer le besoin de la cellule.