République Algérien Démocratique et Populaire

Centre universitaire Salhi Ahmed Naama

Institut des Sciences et Technologies
Département des sciences de la nature et de la vie
Master 1 Microbiologie Appliquée -S1-
Matière :

Méthodes
eléctrophorétiques

Présenter par :
Chaina Fatiha. Responsable de la matière :
Hatite Ikram. Dr.Lagha.N.
Lalaoua Ines.
Tadj Asma .
Teibi Hanane.
2020-2021
Plan de travail
1. Introduction
2. Historique

3. Définition

4. Principe
5.Type d’élecrtophorése

6. Electrophorése en champs pulsé

7. Applications
8. Conclusion
9. Références bibliographiques
 1. Introduction

Dans le domaine de la biologie et notamment pour la séparation et la

caractérisation des molécules , l'électrophorèse et la chromatographie sont considérées

comme principaux techniques qui sont les plus utilisées.

01
 2. Historique

1984: Électrophorèse en champ pulsé 1984

1975: Électrophorèse bidimensionelle

1975

1952-1957-1959
La technique de immuno-électrophorétique.
Élaboration de la technique d’électrophorèse sur 1952
membraine d’acétate de cellulose.
Électrophorèse sur gel de polyacrylamide.

1939: la technique d’électrophorèse sur 1939

papier.

02
 3. Définition:

L’électrophorese est une méthode d’analyse

(identification et dosage) qualitative et quantitative , et

de séparation basé sur la migration différentielle des

particules , chargé électriquement sous l’influence d’un

champ électrique.

• Le préfixe " électro" fait référence à l’électricité.

• et "phorèse" vient du grec phoresis qui signifie "porter Figure1: Représente l’appareillage de l’électrophorèse sur
gel qui existe dans le laboratoire de recherche de notre
d’un côté à l’autre. CUN.
03
 4. Principe:
Consiste se mettre un mélange de molécule à un champ électrique ce qui entraine la
migration des molécules chargés négativement vers le pole positif (anode) et celle qui sont
chargés positivement vers le pole négatif (cathode). En fonction des différentes
paramètres:
Charge Forme

Conditions
physico-chimiques

Nature de
Masse
Support
Figure2: Principe d’électrophorèse.

04
 5.Types d’électrophorése:

1.Électrophorèse en veine liquide

(libre).
Électrophorèse

2. Électrophorèse de zone.

05
 Électrophorèse en
veine liquide (libre)
 5.1. Électrophorèse en veine liquide (libre) :

La migration des particules s’effectuent au sein d’un liquide de composition

déterminée, dans un tube U de section carrée; la séparation des molécules n’est pas
totale, mais les frontières qui se forment sont mises en évidences par des méthodes
optiques (absorption UV , indice de réfraction……).

Figure3: Electrophorèse libre (tube U).

06
Électrophorèse de zone
 5.2 Électrophorèse de zone

La migration se fait au sein d’un liquide d’une phase liquide imprégnant un solide
poreux ou un gel. Elle aboutit à la séparation plus ou moins parfaite des fractions
protéique sous forme de zones distinctes. Le support doit être homogène, poreux,
physiquement et chimiquement inactif.

07
 Electrophorèse de
zone

Sur papier Sur gel

Sur gel d’agarose

Sur gel de polyacrylamide

Sur acétate de
cellulose
E. bidimensionnelle

E. en champ pulsé
08
 La différence entre électrophorèse de zone et libre

Électrophorèse de zone Électrophorèse libre

Est réalisé dans un tube en U de section Permet de stabiliser la phase liquide grâce à
carrée . l’utilisation d’un support poreux imprégné
d’un solvant tamponné.
Permet une bonne détermination des Les fractions séparées migrent comme
mobilités électrophorétiques. des -zones- individuelles.

Appareillage couteux.

La mise en œuvre longue et délicate.

09
Électrophorèse en champs pulsé
ECP/PFGE
 1. Définition et principe

Type d’électrophorèse qui permet de

séparer des ADN de grande taille ( 50 000
pb à 10 millions de pb ).

Consiste à changer la polarité du champ

électrique alternativement au cours du
temps.

Figure4: GIF animé représente le principe d’ECP

10
 2.Appareillages

Figure 5:appareil de migration pour l’électrophorèse de l’ADN champ pulsé (Brodeur,2006)

11
 3. Etapes

01 Lyse bactérienne

02 Restriction d’ADN

03 Réalisation de l’électrophorése

04 Visualisation d’ADN
12
visualisation

1) Un gel d'agarose avant éclairage 2) Le gel est exposé à des rayonnements

sous ultraviolets ultraviolets, le BET colore l'ADN en une
couleur rouge-orangée.

13
 7. Applications d’électrophorèse

L'électrophorèse permet la séparation

de molécules chargées : Déterminer le nombre de sous-unités
Protéines / Peptides / Acides aminés d'une protéine .
/Acides nucléiques / Nucléotides

Séquencer l'ADN et de déterminer

D'évaluer le degré de purification
la taille de fragments d'ADN.
d'une protéine ;
De séparer des acides nucléiques
De séparer des protéines pour les
pour les analyser par la technique du
révéler par la technique du Western
Northen blot (ARN) ou du Southern
blot .
blot (ADN).

14
 8.Conclusion

L'importance du phénomène d'électrophorèse, outre son intérêt théorique

propre, réside dans l'utilisa lion très large qu'on en fait, à des fins analyliques ou
préparatives, plus particulièrement pour l'étude et le fractionnement des protéines
et des acides nucléiques.

15
 9. Références bibliographiques

 L. Juzan, J.J. Pernelle, P. Dabert. 2012, Les outils de la biologie moléculaire pour
l’analyse microbiologique des boues activées. Sciences Eaux and Territoires : la Revue
du IRSTEA, IRSTEA, p. 78
 Ercolini, D., 2004, « PCR-DGGE fingerprinting: novel strategies for detection of
microbes in food », J Microbiol Methods, 56(3):297-314.
 Aguilar Isabelle, 2008. Exemple d’électrophorèse sur fragments d’ADN.
 Daniel Richard, 2015.Rappels de Biologie Moléculaire.
Merci pour votre

attention