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Ac. Ascórbico
Ac. Ascórbico
http://dx.doi.org/10.21577/1984-6835.20220048
Ascorbic acid (vitamin C) is essential to our body and can be found in leafy vegetables, legumes and fruits,
as well as in natural and industrialized juices. The concentration of vitamin C present in long life juices
is normally informed by the manufacturer on the package label. The objective of this work was to use an
electroanalytical technique, cyclic voltammetry, to determine the concentration of vitamin C in long-life
juices. From the dilution of a 100 mmol L-1 stock solution of ascorbic acid, the calibration curves were
prepared by the method of external standards or of standard addition. Cyclic voltammograms (CVs) were
recorded from 0 to +1.0 V, with v = 50 mV s-1. The solutions were prepared in the presence of KCl 0.34
mol L-1 as supporting electrolyte, including the samples. Measurements were taken in triplicate. It was
found that vitamin C is present in all juice brands analyzed, and in some cases in a concentration very
different from the value informed on the package label by the manufacturer. The present work showed
the viability of using the CV technique for the determination of vitamin C in a food product, which is
relevant for the teaching of electrochemistry.
Keywords: Cyclic voltammetry; ascorbic acid; vitamin C.
1. Introdução
Rev. Virtual Quim., 2022, 14(5), 927-936 This is an open-access article distributed under the 927
©2022 Sociedade Brasileira de Química terms of the Creative Commons Attribution License.
Determinação de Ácido Ascórbico em Sucos de Caixinha Longa Vida por Voltametria Cíclica
comprimido. No entanto, há situações onde doses elevadas farmacêuticos, etc)20. Os métodos mais utilizados são os
dessa vitamina, como 4 g ao dia, causam a destruição dos físico-químicos, dentre os quais estão os volumétricos e os
glóbulos vermelhos do sangue de paciente portador de espectrofotométricos.20 Recentemente, Hoehne e Marmitt20
deficiência de glicose-6-fosfato-desidrogenase eritrocitária. discutiram esses métodos de quantificação de AA em
Níveis bem menores, como 100 mg de vitamina C ao dia, diferentes tipos de amostras, com ênfase nos seus princípios,
são tolerados por pacientes sob diálise, devido ao risco de interferentes, vantagens e desvantagens.
formação de cálculos urinários.9 Os métodos volumétricos, devido à falta de
A insuficiência de vitamina C causa o escorbuto e especificidade, são úteis apenas na análise de amostras que
a anemia, e está associada a algumas anormalidades não contenham outros compostos redutores (além do ácido
psicológicas (depressão). Em contraste, o excesso de vitamina ascórbico). O método oficial da Association of Official
C afeta a absorção de vitamina B12, também relacionada à Analytical Chemists (AOAC), baseado na titulação de ácido
anemia, e pode causar distúrbios gastrointestinais, cálculo ascórbico com 2,6-dicloroindofenol em solução ácida, não
renal e excesso de absorção de ferro.2,10 Além disso, a ingestão é aplicável em todas as matrizes.21 Podem ser encontrados
excessiva de vitamina C pode causar obesidade.11 concentrações maiores do que as reais, devido à presença de
Assim, os humanos devem ingerir vitamina C para substâncias naturalmente presentes nas frutas, como taninos,
sobreviver.12 Uma ingestão diária de vitamina C (45 mg / betaninas, compostos de sulfidrila, Fe (II), Mn (II) e Co (II),
dia para um adulto) é necessária.13 Portanto, para controlar a e que podem ser oxidadas pelo corante.22 Além dos métodos
ingestão diária da vitamina C, a determinação quantitativa de volumétricos e espectrofotométricos, encontram aplicação
seu conteúdo em frutas e vegetais é crucial.14 A determinação os métodos eletroquímicos, luminescentes, fluorimétricos
de AA é necessária para o controle de qualidade de e cromatográficos.20
diferentes produtos. O presente trabalho utilizou a técnica de voltametria
O método recomendado pela Agência Nacional de cíclica, VC, para determinar a concentração de ácido ascórbico
Vigilância Sanitária (ANVISA) para determinação do AA (vitamina C) em produtos alimentícios (sucos de caixinha ou
em alimentos é baseado na volumetria de óxido-redução, longa vida), encontrados no comércio da cidade de Uberaba/
utilizando-se o iodato de potássio.15 Minas Gerais. Com isso, pretende-se contribuir com uma
De acordo com o Artigo 18 do Decreto nº 6.871 de proposta de atividade experimental para a determinação de
04 de Junho de 2009,16 podem ser chamadas de sucos as ácido ascórbico em amostras reais, com ênfase no uso dos
bebidas não fermentadas, não concentradas e não diluídas, métodos do padrão externo e da adição de padrão. Espera-
destinadas ao consumo, obtidas de frutas sadias e maduras, se com essa abordagem mostrar a aplicabilidade da VC
ou de vegetais. Também podem ser reconstituídos pela num produto do cotidiano dos estudantes. Muitas vezes,
diluição de suco concentrado ou desidratado, porém de os métodos do padrão externo e da adição de padrão são
modo a manter a concentração original do suco integral discutidos apenas conceitualmente nas aulas teóricas de
ou ao teor mínimo de sólidos solúveis estabelecido nos Química Analítica Instrumental, e são resolvidos exercícios,
respectivos padrões de identidade e qualidade para cada mas é importante a sua contextualização, visando tornar o
tipo de suco integral, sendo obrigatório constar na sua formalismo matemático envolvido menos abstrato, bem como
rotulagem a origem do suco utilizado para sua elaboração, disseminar o uso da eletroanálise nos cursos de graduação.
se concentrado ou desidratado.17 Apesar das suas vantagens, como alta sensibilidade e baixo
A declaração do ácido ascórbico na rotulagem é custo, há resistência a um maior uso por parte dos analistas,
voluntária, embora esteja presente em grande parte dos sucos o que pode estar relacionado ao fato da sua teoria básica ser
industrializados, notadamente naqueles com base em frutas considerada difícil e abrangente.23
cítricas,17 cujos produtos podem ser considerados de alto Os referenciais para o desenvolvimento da presente
conteúdo naquele nutriente (mínimo de 30% da Ingestão proposta de atividade experimental são de autores
Diária Recomendada – IDR) ou como fonte de vitamina C estrangeiros,6,24,25 ou seja, há escassez de trabalhos sobre
(mínimo de 15% da IDR).18 o assunto na língua portuguesa, para fins didáticos no
Há regulamentação vigente que estabelece os valores ensino superior. Ressalta-se que, visando contribuir
mínimos de ácido ascórbico (em mg/100 g) para alguns com uma conscientização dos estudantes com relação
sucos, cujos valores dependem do sabor do suco. Para à preocupação com o meio ambiente nas suas atitudes,
o suco de abacaxi é estabelecido o valor máximo de dentro ou fora da academia, o sistema eletroquímico foi
21,5 mg/100 g.19 miniaturizado em relação a outros estudos eletroquímicos
A vitamina C é bastante sensível ao processamento na literatura, que utilizam um volume vinte vezes maior
e armazenamento de produtos, sendo a sua retenção de amostra, ou seja, 100 mL de amostra, contra 5 mL no
considerada um índice de conservação e da qualidade presente trabalho, o que demandou um menor consumo de
nutricional dos mesmos. Dada a sua enorme relevância reagentes e, consequentemente, uma produção de menor
e vasta aplicação, vários métodos foram desenvolvidos quantidade de resíduos. Também é importante mencionar
para sua determinação em diversos tipos de amostras que o sinal analítico não foi afetado pelo volume de
(p. ex.: alimentos, bebidas, amostras biológicas, produtos solução utilizado.
Aos leitores interessados na fundamentação das técnicas 4, MF2021) e como eletrodo auxiliar um fio de platina de
voltamétricas, Pacheco e colaboradores23 publicaram uma 0,5 mm em espiral (Goodfellow).
revisão sobre os conceitos envolvidos na voltametria de Poliu-se o eletrodo de trabalho manualmente, antes de
varredura linear, voltametria cíclica, técnicas de pulso cada medida eletroquímica, fazendo-se um movimento em
(voltametria de pulso diferencial e voltametria de onda forma de oito sobre um pedaço de tecido macio (veludo),
quadrada), voltametria de redissolução e voltametria contendo duas gotas de suspensão de alumina 0,3 µm da
adsortiva de redissolução. Também, recomenda-se o artigo Fortel Indústria e Comércio Ltda. (Casa Verde, São Paulo).
de Elgrishi e colaboradores26, para aqueles que pretendem Após o polimento na presença de alumina, repetiu-se o
iniciar na técnica de voltametria cíclica, e de Paiola e polimento sobre outro pedaço de veludo, na ausência de
colaboradores27, o qual descreve o desenvolvimento de alumina, para remover o excesso de partículas de alumina.
uma célula eletroquímica miniaturizada para ser utilizada Por fim, o eletrodo foi lavado com água ultrapura e seco
em experimentos didáticos envolvendo voltametria cíclica, com papel macio.
em cursos de graduação, aplica os conceitos da Química Registrou-se os voltamogramas cíclicos, VCs, do ES,
Analítica Verde e proporciona o aprendizado de conceitos das soluções padrão e das amostras nas seguintes condições
de eletroquímica e química analítica. voltamétricas: velocidade de varredura do potencial, ν,
50 mV s-1 e faixa de potencial, E, de 0 a +1,0 V.
2. Experimental
2.2. Reagentes
2.1. Equipamentos, célula eletroquímica e condições Os reagentes utilizados neste trabalho foram: ácido
voltamétricas ascórbico, C6H8O6, 99,0 % (176,12 g mol-1), da Êxodo
Científica (Hortolândia-SP, Brasil); cloreto de potássio,
As medidas eletroquímicas foram realizadas em um KCl, 99% (74,56 g mol-1), da Vetec (Duque de Caxias-RJ,
potenciostato da Metrohm Autolab, modelo PGSTAT10 Brasil); amido solúvel da Synth (Diadema-SP, Brasil);
(Herisau, Suíça), interfaciado a um programa de computador iodeto de potássio, KI, 99,00 %, (166,00 g mol-1), da Êxodo
(GPES). Os volumes das soluções foram medidos usando Científica (Hortolândia-SP, Brasil); ácido sulfúrico, H2SO4,
micropipetas de 1000 µL (MDI) e de 5000 µL (Peguepet). 95-98% (98,08 g mol-1), da Neon (São Paulo-SP, Brasil); e
Todas as soluções foram preparadas em água ultrapura iodato de potássio, KIO3, 99,4 % (214,00 g mol-1), da Êxodo
obtida com purificador da Gehaka (Master System/ Científica (Hortolândia-SP, Brasil).
MS2000).
A célula eletroquímica utilizada nos experimentos, 2.3. Soluções e amostras
com os respectivos eletrodos, é apresentada na Figura 2.
Utilizou-se um disco de platina de 1 mm de diâmetro, área Neste experimento, o ácido ascórbico foi determinado
0,78 mm2 como eletrodo de trabalho (Microquímica), um em sucos longa vida por voltametria cíclica, utilizando
eletrodo de referência de Prata/Cloreto de Prata 3,0 mol L-1 os métodos do padrão externo e da adição de padrão.
de NaCl, saturado com AgCl (Bioanalytical Systems, RE- Esta prática de ensino necessitou de uma solução estoque
de ácido ascórbico 0,10 mol L-1 e de uma solução de
KCl 0,34 mol L-1, que atua como eletrólito de suporte, ES.
Para a preparação de 25,00mL de solução estoque de
ácido ascórbico 0,10 mol L-1 pesou-se uma massa de ácido
ascórbico igual a 0,4403 g, transferiu-se para um balão
volumétrico. Pesou-se 0,6338 g de KCl e transferiu-se
para o mesmo balão volumétrico, para tornar a solução
0,34 mol L-1 em KCl. Completou-se o volume do balão com
água ultrapura, até a sua marca de calibração.
Para a preparação de 250,00 mL de uma solução
de KCl 0,34 mol L-1 pesou-se uma massa de KCl igual
a 6,3376 g e transferiu-se para um balão volumétrico.
Completou-se o volume do balão volumétrico com água
ultrapura, até a sua marca de calibração.
Foram analisados 11 sucos longa vida, de 6 marcas
diferentes, representadas por números (1, 2, 3, 4, 5 e 6), e 5
sabores (laranja, maçã, goiaba, pêssego e uva). A Tabela 1
Figura 2. Célula eletroquímica munida dos eletrodos de trabalho, de
apresenta os sucos analisados e os respectivos códigos.
referência e auxiliar. Amostra analisada: suco de uva. Eletrólito de Vale ressaltar que duas marcas referem-se à versão kids
suporte: KCl 0,34 mol L-1 do suco.
Tabela 1. Sucos analisados nesse trabalho e respectivos códigos corrente flui entre os eletrodos; esta corrente de fundo é
Suco Código* Suco Código* chamada de corrente capacitiva (devido ao carregamento
da camada dupla elétrica) ou de corrente não faradaica.
1 Laranja-1 7 Uva-4b
Esse VC da solução do ES é essencial para testar se todos
2 Laranja-2 8 Uva-4c (versão kids)
os componentes da célula eletroquímica estão em boas
3 Maçã-3 9 Uva-4d (versão kids) condições antes de registrar o VC na presença do analito
4 Goiaba-1 10 Uva-5 (linha contínua), ou seja, das soluções padrão ou da
5 Pêssego-4 11 Uva-6 (versão kids) amostra.26
6 Uva-4a Além disso, o VC do ES deve ser subtraído do
*Formado pelo sabor do suco e um número. O número refere-se a uma dada VC das soluções padrão ou da amostra, pelo próprio
marca. No caso dos sucos Uva-4 e Uva-4 (versão kids), as letras a, b e c, programa de computador que monitora o potenciostato, e
d referem-se a sucos de mesmo sabor e marca, porém de lotes diferentes. posteriormente determina a altura do pico. Nesse caso, a
altura do pico refere-se à corrente de oxidação do ácido
Todas as soluções de ácido ascórbico foram preparadas ascórbico, em µA.
imediatamente antes do uso e guardadas ao abrigo da
luz durante a execução dos experimentos, para evitar a
degradação do ácido ascórbico. As embalagens de suco
foram abertas imediatamente antes do uso, pelo mesmo
motivo.
Figura 4. (a) Voltamogramas cíclicos das soluções padrão de ácido ascórbico. (b) Curva de calibração (corrente em função da concentração
de ácido ascórbico). Método do padrão externo
Figura 5. Voltamogramas cíclicos representativos dos sucos analisados. Código do suco: (a) Uva-6 (versão kids). As curvas referem-se a
análises diferentes de uma mesma marca de suco. (b) Laranja-2; Goiaba-1; Pêssego-4
A concentração de ácido ascórbico, em mmol L-1 e em Considerando que o Instituto Nacional de Metrologia,
mg L-1, foi calculada a partir do valor da corrente de pico Normalização e Qualidade Industrial (INMETRO)
anódico. O valor de corrente foi substituído na equação da estabelece um desvio padrão relativo (sr) máximo aceitável
curva analítica, y = –0,22348 + 3,80285x, e obteve-se o através da equação de Horwitz,29 onde C é a razão entre a
valor de concentração de ácido ascórbico, em mmol L-1, o massa do analito e a massa da amostra. Para concentrações
qual foi multiplicado pela massa molar do ácido ascórbico, de 200 mg L-1, 2x10-4, substituindo na equação de Horwitz,
176,12 g mol -1, obtendo-se a concentração de ácido Equação (2), tem-se um sr máximo de 7,2%:
ascórbico, em mg L-1.
Um modo de avaliar a exatidão do método é por meio sr = 2(1 – 0,5logC) (2)
do cálculo do erro relativo (Er), expresso em percentagem
conforme a Equação (1):29 Fez-se a suposição que a fração mássica, C (razão
analito/matriz) seja 200 ppm (mg/kg), que é um valor típico,
(1) considerando 200 mg de vitamina C em 1 L de amostra
analisada (suco) e que d = 1 g cm-3.
A partir dos resultados da Tabela 1S (ver Material
sendo: Xlab = valor obtido ou média aritmética de valores Suplementar), observa-se que, em geral, o método
obtidos experimentalmente. Nesse caso utilizou-se as duas eletroquímico apresentou precisão, pois os valores de desvio
formas de cálculo e os valores estão reunidos na Tabela padrão relativo (sr) foram menores de 7,2%, exceto para os
1S (ver Material Suplementar). Xv = valor admitido como sucos Goiaba-1 e Uva-4b, cujos valores de sr foram 13,3%
verdadeiro (considerou-se os valores presentes nos rótulos e 8,3%, respectivamente.
das embalagens de suco). Segundo Fabris; João e Borges,30 o INMETRO e a
(10)
“Método 364/IV - Determinação de vitamina C com iodato 103,3±0,2 mg/250 mL, não havendo diferença significativa
de potássio”15 e os resultados foram concordantes com entre os todos os valores encontrados. Dessa forma,
aqueles obtidos pelo método eletroquímico. os autores6 concluíram que o suco analisado continha
Os índices de recuperação do analito adicionado mais vitamina C do que a quantidade indicada no rótulo
apontaram que a matriz não exerceu efeito sobre o mesmo, (60 mg/250 mL).
e portanto a matriz também não exerceria efeito sobre o O método desenvolvido por Pisoschi, Danet e
analito contido na amostra. No entanto, a presença de analito Kalinowski,24 baseado na voltametria cíclica, apresentou
adicionado, em uma forma mais facilmente detectável do que exatidão para determinação de vitamina C em suco de frutas;
o analito originalmente presente na amostra, pode ocasionar a recuperação de quantidades conhecidas de ácido ascórbico
avaliações excessivamente otimistas de recuperação. 29 variou entre 94,35% e 104%. Pisoschi e colaboradores25
Ou seja, tais índices de recuperação não descartam também desenvolveram um método para determinar a
completamente um possível efeito de matriz. De fato, o valor concentração de ácido ascórbico em sucos de frutas e vinho
de coeficiente angular da curva de calibração obtida pelo por voltametria de pulso diferencial, VPD, sendo o índice
método dos padrões externos foi significativamente maior do de recuperação compreendido entre 94,74 e 104,97%. Os
que aqueles das curvas de calibração referentes ao método resultados da avaliação do ácido ascórbico por VPD foram
da adição de padrão (comparar Figuras 4(b) e 7), o que pode concordantes com aqueles obtidos por VC.
ser indicativo de interferência dos constituintes da matriz.28 Ainda, Pisoschi e colaboradores 25 estudaram a
Dessa forma, a partir dos resultados obtidos por voltametria interferência do ácido cítrico, do ácido tartárico, do ânion
cíclica para os sucos analisados, pelos métodos dos padrões benzoato e da glicose no comportamento eletroquímico
externos e da adição de padrão, considera-se que o método do ácido ascórbico, utilizando a VPD, e eletrodo de
da adição de padrão é mais recomendado do que o método trabalho de platina ou de pasta de carbono, e mostraram
dos padrões externos. Ao determinar cálcio no leite em pó, que, nas concentrações comumente encontradas em sucos,
por meio da técnica de Fluorescência de Raios X, Chan e refrigerantes e vinhos, esses compostos orgânicos não
Palmer33 observaram que, quando existe efeitos de matriz, o causam interferências significativas na determinação do
método da adição de padrão fornece resultados mais exatos ácido ascórbico. Pisoschi, Danet e Kalinowski24 chegaram na
do que o método dos padrões externos. mesma conclusão, avaliando a interferência desses mesmos
Nesse trabalho os autores utilizaram como eletrodo de compostos na determinação de ácido ascórbico por VC e
trabalho um disco de platina, especialmente porque esse utilizando eletrodo de disco de platina, em suco de fruta
é mais viável para utilização nas aulas práticas no ensino longa vida ou natural.
superior. No entanto, em pesquisas na área de eletroanalítica,
o desenvolvimento de eletrodos quimicamente modificados 4. Conclusões
(EQM) vem desde a década de 70, e tendo como finalidade
principal melhorar a seletividade para detecção de diversos
tipos de analito. O termo EQM relaciona-se com a inserção O presente trabalho mostrou a viabilidade da utilização
de espécies quimicamente ativas à superfície dos eletrodos, de uma técnica eletroanalítica, a voltametria cíclica, para
com o objetivo de intensificar as propriedades eletroanalíticas, a determinação de vitamina C em um produto alimentício.
melhorando as interações com o analito, aumentando a O método utilizado é simples, rápido, não exige tratamento
reatividade e a seletividade entre solução/eletrodo.34 da amostra e não produz resíduos tóxicos. Além disso, o
Os EQM’s permitiram estudos mais complexos para sistema eletroquímico foi miniaturizado.
diferentes analitos e amostras reais. Há uma diversidade Verificou-se que a vitamina C está presente em todas
de materiais modificantes (orgânicos, inorgânicos, as marcas de suco analisadas, sendo que em alguns casos
organometálicos e nanomateriais). Grande parte dos analitos em uma concentração bem diferente do valor informado no
são compostos orgânicos e biológicos, com aplicações na rótulo da embalagem, pelo fabricante. Chama atenção a alta
área da saúde e meio ambiente. As aplicações visam uma concentração de ácido ascórbico encontrada no suco kids
melhora na qualidade de vida da população, resultante denominado Uva-6, em relação ao que foi declarado nos
da detecção e monitoramento de diversas substâncias rótulos dos produtos. Até mesmo uma análise qualitativa
(defensivos agrícolas, princípios ativos de medicamentos e permite perceber que as correntes de oxidação do ácido
estudo de perfis biológicos).34 ascórbico dessa amostra são muito mais elevadas do
King, Friend e Kariuki, 6 utilizando a técnica de que aquelas das outras, o que mostra a importância do
voltametria cíclica (método da adição de padrão) desenvolvimento de métodos (eletro)químicos de análise
encontraram a concentração de 107,9±7,0 mg/250 mL de desses produtos alimentícios.
ácido ascórbico em suco de laranja usando um eletrodo Considerando os resultados das 11 amostras analisadas,
alternativo de grafite de lápis; usando um eletrodo de o método da adição de padrão apresentou-se mais
carbono comercial a quantidade de vitamina C determinada apropriado, em comparação com o método dos padrões
foi de 97,7±5,9 mg/250 mL. A quantidade de vitamina externos. Isso pode estar relacionado ao fato do primeiro
C no suco determinada por titulação iodimétrica foi de compensar possíveis efeitos de matriz. O presente trabalho
apresenta-se como uma ótima ferramenta didática para 8. Coutinho, M. S.; Morais, C. L. M.; Neves, A. C. O.; Menezes,
explorar, na prática, conceitos envolvidos na disciplina de F. G.; Lima, K. M. G.; Colorimetric determination of ascorbic
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concedida por meio do Edital nº 13/2020/PROPPG/UFTM, 13. BRASIL. Ministério da Saúde. Agência Nacional de Vigilância
de 17/04/2020. Os autores agradecem à Rede Mineira de Sanitária (ANVISA). Resolução da Diretoria Colegiada (RDC)
Química (RQ-MG)/FAPEMIG (Processos REDE-113/10; nº 269, de 22 de setembro de 2005. Regulamento Técnico sobre
CEX-RED-00010-14), pelo fomento, e ao Comitê Especial a Ingestão Diária Recomendada (IDR) de Proteína, Vitaminas e
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autorizou o uso do laboratório durante a pandemia, para 14. Zhaoa, W. Z.; Caoa, P. P.; Zhua, Y. Y.; Liua, S.; Gaob, H. W.;
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