Professional Documents
Culture Documents
Pengaruh Teknik Sterilisasi Explan Terhadap Tingkat Perolehan Kultur Jaringan Aksenik RAMIN (Gonystylus Bancanus)
Pengaruh Teknik Sterilisasi Explan Terhadap Tingkat Perolehan Kultur Jaringan Aksenik RAMIN (Gonystylus Bancanus)
Tanggal diterima: 16 Juni 2017, Tanggal direvisi: 09 Agustus 2017, Disetujui terbit: 04 Desember 2017
ABSTRACT
Since 2005, ramin has been included in CITES Appendix II and according to IUCN red list, ramin is also regarded
as vulnerable (VU A1cd). The Lack of information on explant sterilization techniques in ramin tissue culture is
one reason why there has not been enough initiation to develop ramin micro propagation. Plant tissue culture
contamination has economic impact due to its direct influence in losses during in vitro culture of plants. The aim
of this study was to observe the influence of explants sterilisation technique on acquisition rate of ramin axenic
tissue culture with the rate of contamination increase, acsenic culture acquisition and shoot elongation as
parameters. Ramin seedlings as explants source were collected from Tumbang Nusa, Central Kalimantan. Fifty
replicating explants of one nodule each in 3 techniques were used in this study based on in vitro incubation time:
sterilization 1 (24 hours incubation), sterilization 2 (48 hours incubation) and sterilization 3 (72 hours incubation)
with non metallic antimicrobial compounds namely detergent, ditiocarbamate with mankozeb active ingredient
(compound A), a compound containing 5.25% NaOCl added sodium hypochlorite and hydrogen oxide (compound
B), 70% alcohol (compound C) as explants surface sterilants. Murashige-Skoog was used as media for evaluation
of sterilization technique and explants regeneration on one year incubation. The results of this study indicate that
the lowest rate of contamination was found in sterilization 3 (28%) with the success number of axenic tissue
culture at 46%. The average shoot elongation of the axenic culture was 5.91 cm after 12 months subcultured in
every month.
Keywords: in vitro, contamination, mortality, non metallic antimicrobial
ABSTRAK
Sejak 2005, ramin termasuk dalam CITES Appendix II dan menurut daftar merah IUCN, ramin juga termasuk
kategori rentan (VU A1cd). Kurangnya informasi teknik sterilisasi eksplan pada kultur jaringan ramin merupakan
salah satu alasan mengapa belum ada cukup inisiasi untuk mengembangkan perbanyakan ramin secara mikro.
Kontaminasi pada kultur jaringan mempunyai dampak ekonomi akibat pengaruh langsung pada kerugian selama
kultur in vitro tanaman. Tujuan penelitian ini adalah untuk melakukan observasi pengaruh teknik sterilisasi
eksplan terhadap perolehan kultur aksenik ramin, dengan tingkat pertambahan kontaminasi, perolehan kultur
aksenik dan panjang tunas sebagai parameter. Anakan ramin digunakan sebagai sumber eksplan yang dikoleksi
dari Tumbang Nusa, Kalimantan Tengah. Lima puluh replikasi eksplan satu nodul masing-masing dalam 3 teknik
pada penelitian in yang berdasarkan waktu inkubasi in vitro yaitu sterilisasi 1 (24 jam inkubasi), sterilisasi 2 (48
jam inkubasi) dan sterilisasi 3 (72 jam inkubasi), dengan senyawa antimikrobia bukan logam yaitu detergent,
ditiokarbamat dengan bahan aktif mankozeb (senyawa A), senyawa berbahan aktif NaOCl 5,25% yang
ditambahkan sodium hipoklorit dan hydrogen oksida (senyawa B), alkohol 70% (senyawa C) untuk sterilisasi
permukaan eksplan. Murashige-skoog digunakan sebagai media untuk evaluasi teknik sterilisasi dan regenerasi
eksplan selama 1 tahun inkubasi. Hasil penelitian ini mengindikasikan bahwa pertambahan tingkat kontaminasi
terendah adalah pada pengulangan sterilisasi 3 (28%) dengan kultur aksenik tertinggi 46%. Rata-rata pemanjangan
tunas pada kultur aksenik ini adalah 5,91 cm setelah 1 tahun di subkultur setiap bulan.
Kata kunci: in vitro, kontaminasi, mortalitas, antimikrobia bukan logam
pengekspor terbesar dengan tujuan utama
I. PENDAHULUAN
negara-negara Eropa. Produksi kayu ramin terus
Ramin merupakan salah satu kayu ekspor menurun dari tahun ke tahun karena tingginya
utama Asia Tenggara. Indonesia merupakan eksploitasi tanpa diimbangi penanaman kembali.
131
Jurnal Pemuliaan Tanaman Hutan
Vol. 11 No. 2, Desember 2017, p. 131 - 138
Menurut Convention on International Trade in jamur dapat berupa miselium atau spora dorman
Endangered Species of Wild Fauna and Flora (Dworkin & Shah, 2010). Sel bakteri dapat
(CITES) (2017) ramin termasuk jenis pohon bertahan hidup dari pengaruh senyawa
dengan status terancam rawan punah karena antimikrobia tanpa mengalami perubahan
penyebarannya bersifat endemik dengan tingkat genetik, kondisi dorman ini dikenal sebagai
eksploitasi yang tinggi. Melalui Keputusan persister (persisters) dan berbeda dengan
Menteri Kehutanan No 121/Kpts-V/2001 telah ketahanan (resistant). Mikrobia dorman tidak
dilakukan penghentian sementara (moratorium) mengalami pertumbuhan, namun demikian
kegiatan penebangan dan perdagangan ramin di formasi sel dan status metabolisme sel belum
Indonesia dan keputusan tersebut masih berlaku diketahui sepenuhnya (Wood, Knabel, & Kwan,
sampai tahun 2017 ini. Dalam rangka pelestarian 2013). Sel-sel dorman dapat terbawa pada
dan peningkatan populasi jenis ramin, permukaan eksplan (eksternal) maupun di dalam
penanaman kembali pada bekas areal tebangan eksplan (internal) sehingga mempersulit proses
hutan alam rawa gambut memberikan sterilisasi yang secara standar dilakukan di
keuntungan secara ekonomis dan ekologis. permukaan jaringan eksplan. Penelitian
Ketersediaan anakan ramin asal biji yang efektivitas dan efisiensi berbagai jenis dan
memiliki daya hidup yang tinggi sampai saat ini konsentrasi senyawa antimikrobia pada
menjadi hambatan karena ketidak-pastian musim sterilisasi kultur jaringan untuk jenis akasia
berbunga, pertumbuhan yang lambat, (Elbasheer & Osman, 2017), jenis Durio
memerlukan situs spesifik. Di samping itu zibethinus (Hermayani, Retnoningsih, &
penelitian perbanyakan ramin sampai saat ini Rahayu, 2016), jenis Durio kutejensis Hassk.
belum menunjukkan hasil yang signifikan. (Kusuma et al., 2016). Sedangkan untuk tanaman
Fokus utama di berbagai topik penelitian jenis bukan pohon juga sudah dilaporkan seperti
kultur jaringan saat ini adalah pada pada Musa textilis Nee (Cobrado & Fernandez,
pengembangan protokol standar sterilisasi 2016), Coccinia abyssinica (Cobrado &
dengan tanaman sebagai sumber eksplan dari Fernandez, 2016), Dendrobium (Da Silva,
alam untuk menghasilkan kultur aksenik Winarto, Dobránszki, Cardoso, & Zeng, 2016).
(Cobrado & Fernandez, 2016; Kusuma, Tujuan penelitian ini adalah untuk
Kustiawan, & Ruchaemi, 2016). Penelitian melakukan observasi pengaruh teknik sterilisasi
mengenai pengaruh umur tanaman terhadap eksplan berdasarkan waktu inkubasi pada
kontaminasi juga menjadi fokus untuk perlakuan sterilisasi berulang terhadap tingkat
mendapatkan standar sterilisasi. Anakan ramin perolehan kultur jaringan aksenik ramin dengan
yang digunakan pada penelitian ini merupakan persentase kontaminasi, persentase kematian dan
hasil koleksi di sekitar tanaman induk yang panjang tunas sebagai parameter. Penelitian ini
tumbuh dari biji beberapa tahun sebelumnya dan penting dilakukan untuk menurunkan tingginya
sulit diketahui umur anakan secara pasti. Hal ini tingkat kontaminasi kultur jaringan tanaman
menjadi kendala untuk mengamati pengaruh hutan terutama jenis lambat tumbuh seperti
umur terhadap tingkat kontaminasi. Namun pohon ramin. Penelitian ini merupakan
demikian kisaran umur tingkat semai dapat kerjasama antara Balai Besar Penelitian dan
dipergunakan sebagai dasar penentuan. Pengembangan Bioteknologi dan Pemuliaan
Teknik sterilisasi secara berulang dengan Tanaman Hutan (BBPPBPTH) dengan Asia Pulp
waktu inkubasi tertentu setelah dikultur pada and Paper (APP).
penelitian ini berdasarkan pertimbangan
kemampuan mikrobia untuk bertahan atau
menghindar dari senyawa antimikrobia seperti
pada pembentukan dormansi. Bertahan hidup
132
Pengaruh Teknik Sterilisasi Explan Terhadap Tingkat Perolehan Kultur Jaringan Aksenik Ramin (Gonystylus bancanus)
Asri Insiana Putri, Toni Herawan, Prastyono, dan Liliek Haryjanto
II. BAHAN DAN METODE autoclave pada suhu 1210C; 1,2 kg/cm2 selama
30 menit.
Waktu dan tempat
Penelitian diawali dengan melakukan 2. Alat
eksplorasi dan pengangkutan anakan ramin dari Peralatan utama sterilisasi eksplan di
populasi Tumbang Nusa, Kalimantan Tengah laboratorium adalah autoclave, lamina air flow
pada bulan Januari 2015. Kegiatan dilakukan di (LAF), pH meter, microwave, hot steerer, shaker
persemaian dan laboratorium Kultur Jaringan, dan peralatan gelas dan logam standar untuk
Balai Besar Penelitian dan Pengembangan kultur jaringan.
Bioteknologi dan Pemuliaan Tanaman Hutan,
Rancangan penelitian
Yogyakarta. Perlakuan penelitian dilakukan pada
Sumber eksplan berasal dari 150 individu
bulan Agustus 2015 setelah dilakukan tata
anakan ramin hasil eksplorasi yang dipilih secara
persemaian dan persiapan sterilisasi peralatan
acak di persemaian. Masing-masing perlakuan
dan media untuk kultr jaringan. Pengamatan
teknik sterilisasi menggunakan 1 nodul pada
penelitian dilakukan selama 1 tahun dilanjutkan
posisi nodul ke-2 tunas aksiler anakan dengan
analisis data.
ukuran eksplan sekitar 2 cm yang diambil dari 50
Bahan dan alat penelitian individu sebagai ulangan. Teknik sterilisasi
1. Bahan dilakukan secara bertahap di luar dan di dalam
lamina air flow (LAF). Senyawa A merupakan
Bahan tanaman penelitian ini adalah
sterilan yang diaplikasikan pada eksplan dengan
anakan ramin hasil eksplorasi yang ditanam
mesin penggojok (shaker) di luar LAF berturut-
dalam polybag di persemaian sebagai sumber
turut pada larutan detergen dan larutan
eksplan setelah 6 bulan dilakukan prakondisi
ditiokarbamat masing-masing 5 g/l dalam air
dengan penyemprotan pestisida dan
kran selama 30 menit. Setelah dibilas sampai
pemeliharaan dengan pemberian paranet serta
bersih, sterilisasi dilanjutkan dengan senyawa B
pemupukan dasar N:P:K perbandingan 1:1:1.
dan C. Senyawa B (10 ml bahan aktif dilarutkan
Tunas aksiler satu nodul dipergunakan sebagai
menjadi 100 ml dalam aquadest steril) dan
eksplan untuk materi perlakuan sterilisasi. Bahan
senyawa C (70 ml alkohol dilarutkan dalam 100
kimia untuk sterilisasi menggunakan tiga
ml aquadest steril) merupakan sterilan yang
senyawa antimikrobia bukan logam yaitu
diaplikasikan pada eksplan dengan penggojokan
detergen, ditiokarbamat dengan bahan aktif
secara manual masing-masing selama 1 menit di
mankozeb (senyawa A), senyawa berbahan aktif
dalam LAF. Sterilisasi awal sebelum perlakuan
NaOCl 5,25% yang direaksikan dengan sodium
dilakukan diluar maupun di dalam LAF,
hipoklorit dan hydrogen oksida serta larutan
sedangkan sterilisasi berulang sesuai waktu
Tween20 (90%) sebagai larutan pelindung
inkubasi hanya dilakukan di dalam LAF. Setelah
jaringan eksplan (senyawa B), dan alkohol 70%
sterilisasi sesuai perlakuan, eksplan ditransfer
(senyawa C). Media MS dengan pengayaan
pada media tanam dan diinkubasi di ruang kultur.
hormon 6-BAP (Benzylaminopurine) 1 mg/l;
Inkubasi eksplan dimaksudkan untuk memberi
NAA (Naphthalene acetic acid) 0,5 mg/l; 100
kesempatan pecahnya dormansi kontaminan
mg myo inositol; pyridoxine-HCl 0,5 mg/l;
berdasarkan waktu tertentu. Perlakuan sterilisasi
thiamine-HCl 0,1 mg/l; nicotinic-acid 0,5 mg/l;
berdasarkan waktu inkubasi eksplan yaitu pada
glysine 2 mg/l; 30 g/l sucrose and 10 g/l agar;
sterilisasi 1 (24 jam inkubasi), sterilisasi 2 (48
dengan pengaturan pH 5,7 menggunakan NaOH
jam inkubasi) dan sterilisasi 3 (72 jam inkubasi)
dan/atau HCl. Sterilisasi media menggunakan
sebagaimana ditunjukkan pada Tabel 1.
133
Jurnal Pemuliaan Tanaman Hutan
Vol. 11 No. 2, Desember 2017, p. 131 - 138
Di luar LAF
Di dalam
(senyawa A) dan
Sterilisasi 2 Inkubasi LAF Inkubasi Inkubasi
di dalam LAF
(senyawa
(senyawa B dan C)
B dan C)
Di luar LAF
Di dalam
(senyawa A) dan
Sterilisasi 3 Inkubasi Inkubasi LAF Inkubasi
di dalam LAF
(senyawa
(senyawa B dan C)
B dan C)
134
Pengaruh Teknik Sterilisasi Explan Terhadap Tingkat Perolehan Kultur Jaringan Aksenik Ramin (Gonystylus bancanus)
Asri Insiana Putri, Toni Herawan, Prastyono, dan Liliek Haryjanto
rendahnya stabilitas kontaminasi sampai periode hal ini adalah akibat proses-proses sterilisasi
waktu tertentu. senyawa-senyawa kimia sterilan. Kontaminan
Secara konvensional, sterilisasi dapat tumbuh cepat atau lambat berkaitan dengan
permukaan eksplan dilakukan dengan beberapa dormansi. Kontaminan akan berkembang cepat
cara diantaranya dengan perendaman etanol (Zin, secara kompetitif pada lingkungan kultur yang
Sarmin, Ghadin, Basri, & Sidik, 2015), mempunyai ketersediaan nutrien tinggi, dan akan
perendaman sikloheksana, pencucian dengan berkembang lambat menggunakan strategi
sodium hipoklorit dan penyimpanan semalam anabiosis (pengurangan metabolisme sel pada
dalam lemari pendingin (Webster, Mitchell, & waktu tertentu saat keadaan lingkungan tidak
Ahmad, 2003) serta perendaman etanol, menguntungkan) selama mengalami dormansi
perendaman natrium klorat dan pencucian (Rappé & Giovannoni, 2003).
dengan kalsium hipoklorit karbonat dan sodium Berbagai penelitian mengenai sterilisasi
azida (Madhurama, Sonam, Gupta, & Kharwar, permukaan eksplan pada perbanyakan in vitro
2014). Metode-metode sterilisasi tersebut belum menunjukkan perbedaan teknik pada setiap jenis
mempertimbangkan kondisi dorman kontaminan dan umur pohon dengan kombinasi jenis sterilan
sebagai parameter in vitro. Keterbaruan dalam maupun waktu sterilisasi, sehingga memerlukan
penelitian ini adalah menggunakan perlakuan penelitian individual spesies untuk protokol
waktu untuk menekan kondisi dormansi kultur jaringan. Kontaminasi in vitro sebesar 3 %
kontaminan dengan modifikasi metode dasar sampai dengan 15 % setiap subkultur untuk jenis
konvensional sterilisasi permukaan eksplan tanaman hias seperti Hemerocallis, Astilbe atau
tanaman yang berasal dari alam agar efektifitas Delphinium) dinilai pada taraf kewajaran.
kultur aksenik ramin lebih meningkat. Beberapa Kontaminasi in vitro terbaik untuk tanaman buah
perlakuan sterilisasi berulang dengan jangka dengan sterilan bukan logam (NaOCl dan CaCl2)
waktu inkubasi tertentu pada penelitian ini sebesar 17,69 ± 2,47% dan dengan sterilan logam
dimaksudkan agar senyawa steraltan (senyawa (HgCl2 dan AgNO3) sebesar sekitar 13,27 ±
anti mikrobia) dapat bereaksi terhadap sel-sel 1,92% menjadi standar yang digunakan saat ini
mikrobia kontaminan sewaktu bebas dari kondisi (Leifert & Waites, 1994).
dorman. Rata-rata tingkat pertambahan
kontaminasi pada perbanyakan kultur jaringan
Tabel 2. Analisis keragaman teknik sterilisasi pohon lambat tumbuh ramin dengan sumber
terhadap tingkat kontaminasi eksplan dari alam sebesar 28% eksplan
Jumlah Nilai Nilai F terkontaminasi sampai dengan 12 kali subkultur
Sumber variasi df
kuadrat F P tabel
termasuk rendah. Perbedaan potensi
Teknik 2 231,78 0,01* 3,28
sterilisasi 8570,07 pertumbuhan dan status metabolik endogen jenis
Galat 33 610,08 tanaman (Chern, Hosokawa, Cherubini, & Cline,
Total 35 9180,15 1993) menyebabkan perbedaan tingkat interaksi
Keterangan: * : berbeda nyata pada taraf 5% dengan lingkungan makro maupun mikro,
sehingga mengakibatkan perbedaan diversitas
Dormansi adalah suatu kondisi untuk
kontaminan kultur jaringan. Penggunaan agen
mempertahankan hidup dari lingkungan yang
sterilisasi yang tepat merupakan upaya penting
tidak menguntungkan dan dapat terjadi pada
untuk mendapatkan lingkungan pertumbuhan
jamur maupun bakteri sebagai kontaminan utama
optimal dan kapasitas regenerasi eksplan pada
pada permukaan jaringan eksplan (exogenously
kultur jaringan (Ahmad, Hafeez-Ur-Rahman,
dormant) maupun di dalam jaringan eksplan
Ahmed, & Laghari, 2003). Penelitian ini
(endogenously dormant) (Jones & Lennon,
menggunakan agen sterilisasi sodium hipoklorit
2010). Lingkungan tidak menguntungkan dalam
(NaClO), pembentuk dua substansi setelah
135
Jurnal Pemuliaan Tanaman Hutan
Vol. 11 No. 2, Desember 2017, p. 131 - 138
Tingginya kematian eksplan di kultur kontaminan jamur endogen atau endofitik dapat
yang tidak terkontaminasi pada perlakuan berubah menjadi patogen tanaman inang bila
sterilisasi 2 ditengarai karena pada periode waktu kultur aksenik tidak didapatkan pada kondisi
tertentu. Kontaminan endogen terbebas dari lingkungan in vitro.
kondisi dorman akibat kondisi lingkungan yang Hasil pengamatan pemanjangan tunas
lebih menguntungkan dibandingkan perlakuan aksiler pada kultur aksenik ramin (Tabel 3)
sterilisasi 1 maupun sterilisasi 3. Hal ini menunjukkan bahwa pengulangan sterilisasi
mengakibatkan kerusakan sel-sel jaringan dan berpengaruh positif terhadap rata-rata panjang
perubahan kimia hormon yang bersifat tidak tunas. Panjang tunas pada perlakuan sterilisasi 3
dapat balik (irreversible). Waktu periode spesifik lebih tinggi tinggi dan berbeda nyata
dengan konsentrasi agen sterilisasi tertentu dapat dibandingkan perlakuan lain setelah 12 bulan
terjadi pada pohon lambat tumbuh seperti halnya pengamatan. Hal ini dimungkinkan karena
ramin yang diperoleh langsung dari alam yang tingginya pengaruh toksisitas agen sterilisasi
dikenal mempunyai mikrobia kontaminan pada sel-sel kontaminan, sehingga meningkatkan
endogen maupun eksogen yang sulit perolehan kultur aksenik dan memberi
dikendalikan merupakan upaya penting untuk kesempatan pertumbuhan jaringan eksplan yang
protokol kultur aksenik. Kultur aksenik lebih besar. Kontaminan yang dapat bertahan
merupakan salah satu upaya pula untuk menjaga pada perlakuan sterilisasi 3 ditengarai berkaitan
setrilitas tanaman dari serangan patogen selama dengan kemampuannya untuk membentuk
inkubasi atau pada waktu pengiriman materi ke kondisi dormansi yang lebih lama. Pemanjangan
wilayah lain. Cassells (2016) melaporkan bahwa tunas pada kultur aksenik, diawali dengan adanya
136
Pengaruh Teknik Sterilisasi Explan Terhadap Tingkat Perolehan Kultur Jaringan Aksenik Ramin (Gonystylus bancanus)
Asri Insiana Putri, Toni Herawan, Prastyono, dan Liliek Haryjanto
respon nodul terhadap media kultur dan auksin dan sitokinin, sampai dengan
menandakan kesesuaian kesetimbangan hormon terbentuknya daun (Gambar 2).
1 2 3
Gambar 2. Pemanjangan tunas pada kultur aksenik ramin: inisiasi tunas pucuk (1), pemanjangan tunas (2) dan
pemanjangan tunas diikuti dengan pembentukan daun (3)
IV. KESIMPULAN
DAFTAR PUSTAKA
Teknik sterilisasi eksplan ramin Ahmad, T., Hafeez-Ur-Rahman, Ahmed, C. M. S., &
berdasarkan waktu inkubasi pada perlakuan Laghari, M. H. (2003). Effect of culture media
and growth regulators on micropropagation of
sterilisasi berulang menggunakan sterilan bukan peach rootstock GF 677. Pakistan Journal of
logam berpengaruh nyata terhadap beberapa Botany, 35(3), 331–338.
parameter yaitu: 1) rata-rata tingkat pertambahan Cassells, A. C. (2016). Detection and Elimination of
kontaminasi, 2) peningkatan perolehan kultur Microbial Endophytes and Prevention of
Contamination in Plant Tissue Culture. In R.
jaringan aksenik, dan 3) peningkatan panjang
N. Trigiano & D. J. Gray (Eds.), Plant Tissue
tunas eksplan, dan hal ini ditengarai akibat faktor Culture, Development, and Biotechnology (p.
dormansi kontaminan eksternal maupun internal 608). CRC Press.
pada eksplan. Sterilisasi 3 yaitu sterilisasi Chern, A., Hosokawa, Z., Cherubini, C., & Cline, M.
berulang dengan masa inkubasi selama 72 jam G. (1993). Effects of Node Position on Lateral
Bud Outgrowth in the Decapitated Shoot of
merupakan teknik terbaik untuk eksplan ramin. Ipomoea nil. The Ohio Journal of Science,
93(1), 11–13.
UCAPAN TERIMA KASIH
Cobrado, J., & Fernandez, A. (2016). Common Fungi
Ucapan terima kasih kami sampaikan Contamination Affecting Tissue-cultured
kepada Kepala Balai Besar Penelitian dan Abaca (Musa textiles Nee) during Initial Stage
of Micropropagation. Asian Research Journal
Pengembangan Bioteknologi dan Pemuliaan of Agriculture, 1(2), 1–7.
Tanaman Hutan beserta staf atas segala sarana https://doi.org/10.9734/ARJA/2016/28353
dan prasarana. Demikian pula penghargaan Da Silva, J. A. T., Winarto, B., Dobránszki, J.,
kepada Asia Pulp and Paper serta staf atas Cardoso, J. C., & Zeng, S. (2016). Tissue
bantuan finansial maupun material yang telah disinfection for preparation of Dendrobium in
vitro culture. Folia Horticulturae, 28(1), 57–
diberikan selama penelitian. Ucapan terima kasih 75. https://doi.org/10.1515/fhort-2016-0008
kami sampaikan pula kepada Endin Izudin,
Dworkin, J., & Shah, I. M. (2010). Exit from
Suprihati, Arif Setiawan dan Rudi Hartono atas dormancy in microbial organisms. Nature
segala bantuan teknis yang diberikan. Reviews Microbiology, 8, 890–896.
Elbasheer, Y. H. A., & Osman, E. E. (2017). Effective
and economical explants surface sterilization
protocol for microbial contamination of field
grown explants in vitro cultures of some forest
137
Jurnal Pemuliaan Tanaman Hutan
Vol. 11 No. 2, Desember 2017, p. 131 - 138
trees ; Acacia senegal as a model. Basic Ndakidemi, C. F., Mneney, E., & Ndakidemi, P. A.
Research Journal of Microbiology, 4(2), 12– (2013). Development of Sanitation Protocol
17. Retrieved from for Leaf Explants of B . huillensis for in Vitro
http://basicresearchjournals.org/microbiology Culture, 2013(December), 2425–2430.
/abstract/Elbadri and Yahia.html
Odutayo, O. I., Amusa, N. A., Okutade, O. O., &
Hermayani, N., Retnoningsih, A., & Rahayu, E. S. Ogunsanwo, Y. R. (2007). Determination of
(2016). International Conference on Recent the sources of microbial contaminants of
Trends in Physics 2016 (ICRTP2016). Journal cultured plant tissues. Plant Pathology
of Physics: Conference Series, 755, 11001. Journal, 6(1), 77–81.
https://doi.org/10.1088/1742-
Rappé, M. S., & Giovannoni, S. J. (2003). The
6596/755/1/011001
uncultured microbial majority. Annu Rev
Jones, S. E., & Lennon, J. T. (2010). Dormancy Microbiol., 57, 369–94.
contributes to the maintenance of microbial
Webster, S. A., Mitchell, S. A., & Ahmad, M. H.
diversity. Proc Natl Acad Sci U S A., 107(13),
(2003). A novel surface sterilization method
5881–5886.
for reducing microbial contamination of field
https://doi.org/10.1073/pnas.0912765107
grown medicinal explants intended for in vitro
Kusuma, R., Kustiawan, W., & Ruchaemi, A. (2016). culture. In Vitro Cellular & Developmental
Sterilization Method For In Vitro Propagation Biology - Plant, 1–8. Retrieved from
Explant Embryo Of Durio kutejensis (Hassk.) http://www.kitchenculturekit.com/surfaceSter
& Becc From Kalimantan. International ilizationMitchell2003.pdf
Journal of Scientific & Technology Research,
Wood, T. K., Knabel, S. J., & Kwan, W. (2013).
5(10), 1–6.
Bacterial Persister Cell Formation and
Leifert, C., & Waites, W. M. (1994). Dealing with Dormancy. Applied and Environmental
microbial contaminants in plant tissue and cell Microbiology, 79(23), 7116–7121.
culture: hazard analysis and critical control https://doi.org/10.1128/AEM.02636-13
points. In P. J. Lumsden, J. R. Nicholas, & W.
Zin, N. M., Sarmin, N. I., Ghadin, N., Basri, D. F., &
J. Davies (Eds.), Physiology, Growth and
Sidik, N. M. (2015). Antimicrobials Synthetic
Development of Plants in Culture (1st ed.).
and Natural Compounds. (D. Dhanasekaran,
Netherlands: Kluwer Academic Publishers.
N. Thajuddin, & A. Panneerselvam, Eds.).
https://doi.org/https://doi.org/10.1007/978-
CRC Press. Retrieved from
94-011-0790-7_42
https://www.crcpress.com/Antimicrobials-
Madhurama, G., Sonam, D., Gupta, U. P., & Kharwar, Synthetic-and-Natural-
R. N. (2014). No Title. African Journal of Compounds/Dhanasekaran-Thajuddin-
Microbiology Research, 8(2), 184–191. Panneerselvam/p/book/9781498715621#goog
lePreviewContainer
Mng’omba, S. A., Sileshi, G., du Toit, E. S., & K., A.
F. (2012). Efficacy and Utilization of
Fungicides and Other Antibiotics for Aseptic
Plant Cultures. In D. Dhanasekaran (Ed.),
Fungicides for Pland and Animal Diseases
(pp. 245–254). InTech Europe.
https://doi.org/10.5772/1130
138