Product 9505

Read instructions carefully before starting test

for Histamine
REFRIGERATE at 2–8°C (35–46°F). DO NOT FREEZE

CERTIFICATE NO. 070703

HISTAMINE
High levels of histamine may develop in a variety of fish species as they decompose. These species
include tuna, mahi-mahi, marlin, bluefish, sardines, anchovy, bonito, herring and mackerel. Ingestion
of histamine may cause scombroid poisoning in humans, which may lead to a variety of symptoms,
including rash, nausea, vomiting, diarrhea, hypotension, palpitations and muscle weakness. Paralysis
and death have also been reported in cases of scombroid poisoning.
Because of its potential for human illness, the U.S. Food and Drug Administration (FDA) has ruled
that extensive refrigeration records and/or histamine testing must be included in a hazard analysis
and critical control point (HACCP) program for relevant fish species. The FDA has set an action level
of 50 parts per million (ppm) for histamine in domestic and imported fish.
INTENDED USE
Veratox for Histamine is intended for the quantitative analysis of histamine in scombroid species of
fish, such as tuna, bluefish and mahi-mahi, fish meal, and dry animal protein.
INTENDED USER
The test kit is designed for use by quality control personnel and others familiar with histamine analysis
in fish. Since technique is very important, operators should be trained by a Neogen representative or
someone who has completed Neogen training.
STORAGE REQUIREMENTS
The kit can be used until the expiration date on the label when stored refrigerated at 2–8°C (35–46°F).
Do not freeze.
ASSAY PRINCIPLES
Veratox for Histamine is a competitive direct enzyme-linked immunosorbent assay (CD-ELISA) that
allows the user to obtain exact concentrations of histamine in parts per million (ppm). Free histamine
in the samples and controls is allowed to compete with enzyme-labeled histamine (conjugate) for the
antibody binding sites. After a wash step, substrate is added, which reacts with the bound conjugate
to produce blue color. More blue color means less histamine. The test is read in a microwell reader to
yield optical densities. The optical densities of the controls form the standard curve, and the sample
optical densities are plotted against the curve to calculate the exact concentration of histamine.
MATERIALS PROVIDED
1. 48 antibody-coated microwells
2. 48 red-marked mixing wells
3. 6 yellow-labeled bottles of 0, 2.5, 5, 10, 20 and 50 ppm histamine controls
4. 1 blue-labeled bottle of histamine-HRP conjugate solution
5. 1 foil pouch of sample extract diluent buffer concentrate of 10 mM PBS dry powder
6. 1 bottle of 40 mL wash buffer concentrate of 10 mM PBS-Tween
7. 1 green-labeled bottle of K-Blue® Substrate solution
8. 1 red-labeled bottle of Red Stop solution
MATERIALS RECOMMENDED BUT NOT PROVIDED
1. Veratox for Histamine Extraction Kit (Neogen item 9510)—Contains 38 bottles, 38 filter syringes
and 38 tubes
2. Disposable bottles with 125 mL capacity (Neogen item 9398)
3. Filter syringes for histamine (Neogen item 9420H), Whatman #1 filter paper (Neogen item
9340), centrifuge or equivalent
4. Sample collection tubes (Neogen items 9421, 9421B)
5. 100 mL graduated cylinder
6. Blender
7. Test tube rack (Neogen item 9440)
8. Tubes, 15 mL, graduated (Neogen item 9474)
9. Scale capable of weighing 10–50 grams (Neogen item 9427)
10. Microwell strip reader with a 650 nm filter (Neogen item 9303)
11. Pipettor, 12-channel (Neogen item 9273)
12. Pipettor, 100 µL (Neogen item 9272)
13. Tips for 12-channel and 100 µL pipettors (Neogen items 9410, 9407, 9417)
14. Paper towels or equivalent absorbent material
15. Microwell holder (Neogen item 9402)
16. Timer (Neogen item 9426)
17. Waterproof marker
18. Wash bottle (Neogen item 9400)
19. 1 L bottle with lid (Neogen item 9472)
20. 2 reagent boats for 12-channel pipettor (Neogen item 9435)
21. Distilled or deionized water
PRECAUTIONS
1. Store test kit between 2–8°C (35–46°F) when not in use.
2. Do not use kit components beyond expiration date.
3. Glassware should not be used for extraction purposes. Histamine may adhere to glass, therefore
using glassware may affect test results.
4. Do not mix reagents from a kit with one serial number with reagents from a kit with a different
serial number.
5. Do not run more than 24 wells per test.
6. Follow proper pipetting techniques, including priming tips by filling and dispensing solution
once before use.
7. Use of incubation times other than those specified may give inaccurate results.
8. Kits should be brought to 18–30°C (64–86°F) prior to use.
9. Avoid prolonged storage of kits at ambient temperatures.
10. Do not freeze test kits.
11. To avoid cross-contamination, use clean pipette tips for each sample.
12. Commodity extracts should have a pH of 6–8 before testing. Excessively acidic or alkaline
samples should be adjusted. For instructions on adjusting pH, contact Neogen.

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 Questions? Call 800/234-5333 or 517/372-9200
PROCEDURAL NOTES
1. Substrate. K-Blue Substrate is ready for use. The substrate should be clear to light blue —
discard if it has turned dark blue. Only pour the needed volume of substrate into a reagent boat.
Do not return unused substrate to the bottle. Cover the reagent boat to keep the substrate
protected from light until it is needed.
2. Controls. Six controls are provided with this kit. Neogen recommends using a combination of
at least 5 controls with each assay. This combination may vary. One possible combination is to
eliminate the 5 ppm control, to yield full quantitative test results in the range of 2.5 to 40 ppm.
Another possibility is to eliminate the 2.5 ppm control to yield results in the range of 5 to 40
ppm. All 6 controls may be used with a microwell reader for full quantitation of histamine in the
range of 2.5 to 40 ppm. If needed, contact Neogen for more information on the use of controls.
3. Sample extract diluent buffer. Prepare by adding foil pouch of extract buffer to 1 L of distilled
or deionized water. Swirl to mix. Store remaining buffer covered at room temperature.
4. Wash buffer. The wash buffer is supplied as a 25x concentrate. Prepare by mixing wash buffer
concentrate (40 mL) to 960 mL of distilled or deionized water. Swirl to mix. Do not shake. Store
remaining wash buffer at room temperature.
5. Antibody wells. Keep wells sealed in the foil pouch until needed. Remove wells from the foil
pouch only after the samples are extracted, and the test procedure is set to begin.
SAMPLE PREPARATION
A. Canned and pouched tuna: AOAC 937.07b
Place entire contents of can or pouch (meat and liquid) into a blender. Blend until homogenous.
Store samples at 2–8°C (35–46°F) until analyzed.
B. Fresh or thawed frozen raw fish: AOAC 937.07a
Clean and eviscerate three fish. Cut three cross-sectional pieces 2.5 cm (1 inch) thick, from back
of the pectoral fin, halfway to vent and one posterior to the vent. De-bone slices and blend or
grind combined samples until homogenous. Store samples at 2–8°C (35–46°F) until analyzed.
C. Dry Samples (example: Fishmeal)
The sample to be tested should be collected according to accepted sampling techniques and
be representative of the lot. After homogenization, grind part of the sample (minimum of 200
g) so at least 95% of the ground material passes through a 20 mesh sieve (about the particle
size of fine espresso).
SAMPLE EXTRACTION
If using Neogen’s Veratox for Histamine Extraction Kit (Neogen item #9510), follow the instructions in
that kit. Otherwise, continue with the instructions that follow. NOTE: Glassware should not be used
for extraction purposes as histamine may adhere to the glass.
Liquid/Wet Samples
1. Add 10 g of the homogenous mixture to a clean disposable extraction bottle containing 90 mL of
distilled or deionized water.
2. Tightly cap and vigorously shake the bottle for 15–20 seconds in order to suspend the fish
tissue in the water.
3. Wait approximately 5 minutes, then shake the bottle for 15–20 seconds in order to re-suspend
the fish tissue.
4. Wait an additional 5 minutes, and again shake the bottle for 15–20 seconds in order to re-suspend
the fish tissue. Allow the tissue to settle to the bottom of the bottle for about 30 seconds.
5. If necessary, filter the contents through folded filter paper or a histamine filter syringe (Neogen
#9420H) into a clean container. The sample is now ready for extract dilution.
ALTERNATIVE: Centrifuge the sample and use the clear supernatant as the sample for extract
dilution.

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Dry Samples
1. Add 10 g of the homogenous mixture to a clean disposable extraction bottle containing 100 mL
of distilled or deionized water.
2. Tightly cap and vigorously shake the bottle for 15–20 seconds in order to suspend the sample
in the water.
3. Wait approximately 5 minutes, then shake the bottle for 15–20 seconds in order to re-suspend
the sample.
4. Wait an additional 5 minutes, and again shake the bottle for 15–20 seconds in order to re-
suspend the sample. Allow the sample to settle to the bottom of the bottle for about 30 seconds.
5. If necessary, filter the contents through folded filter paper or a histamine filter syringe (Neogen
#9420H) into a clean container. The sample is now ready for extract dilution.
ALTERNATIVE: Centrifuge the sample and use the clear supernatant as the sample for extract
dilution.

SAMPLE EXTRACT DILUTION

Because of the sensitivity of the ELISA format, the sample extract must be diluted before performing
the test (see Procedural Note 3 for preparing the sample extract diluent buffer).
1. Add 10 mL of sample extract diluent buffer to a clean test tube or bottle.
2. Using a clean pipette tip, add 100 µL of the extract to the sample extract diluent buffer. Gently
swirl to mix.
3. The sample is now ready to test. Repeat for all samples.
NOTE: For optimal performance with expected results greater than 40 ppm, a further dilution
of the sample extract using extract diluent buffer is recommended. Begin with a 1:1 dilution,
repeating dilution and retesting if necessary until the new result (prior to application of the dilution
factor) is less than 40 ppm. Corrected values require multiplying by 2x for total X repetitions of
these additional 1:1 dilutions. Samples should be tested within 4 hours of extraction.
TEST PROCEDURE
Allow all reagents to warm to 18–30°C (64–86°F) prior to use.
1. Remove 1 red-marked mixing well for each sample to be tested plus 5 red-marked wells for
controls, and place in the well holder.
2. Remove an equal number of antibody-coated wells. Return antibody wells that will not be used
immediately to the foil pack with desiccant. Reseal the foil pack to protect the antibody. Mark
one end of strip with a “1,” and place strip in the well holder with the marked end on the left.
Do not mark on the inside or bottom of the wells.
3. Mix each reagent by swirling the reagent bottle prior to use.
4. Add 100 µL of conjugate from the blue-labeled bottle to each red-marked mixing well.
5. The controls (see Procedural Note 2) are supplied ready to use—do not dilute. Using a new
pipette tip for each, transfer 100 µL of controls and diluted samples to the red-marked mixing
wells as shown:
If concerned about histamine levels between 2.5 and 40 ppm:
0 2.5 10 20 50 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 Strip 1
S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 S16 S17 S18 S19 Strip 2
If concerned about histamine levels between 5 and 40 ppm:
0 5 10 20 50 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 Strip 1
S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 S16 S17 S18 S19 Strip 2
6. Using a 12-channel pipettor, mix the liquid in the wells by pipetting up and down 3 times. Transfer
100 µL to the antibody-coated wells.

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 Questions? Call 800/234-5333 or 517/372-9200
7. Incubate for 10 minutes at room temperature 18 –30°C (64 – 86°F) mixing for the first 10 –20
seconds by sliding the microwell holder back and forth on a flat surface without splashing
reagents from the wells. Discard red-marked mixing wells.
8. Shake out the contents of the antibody wells. Fill each antibody well with diluted wash buffer
and dump them out. Repeat this step 3 times, then turn the wells upside down and tap out the
remaining liquid on an absorbent towel.
9. Pour the needed volume of substrate from the green-labeled bottle into the green-labeled reagent
boat, and with new tips on the 12-channel pipettor, pipette 100 µL of substrate into the wells.
10. Incubate for 10 minutes at room temperature 18–30°C (64–86°F) mixing for the first 10 –20
seconds by sliding back and forth on a flat surface. Discard remaining substrate and rinse the
reagent boat with water.
11. Pour Red Stop solution from the red-labeled bottle (same volume as substrate) into the red-
labeled reagent boat. Using the same pipette tips on the 12-channel pipettor as were used to
dispense substrate, add 100 µL Red Stop to each well and mix by sliding back and forth on a
flat surface. Discard the tips.
12. Wipe the bottom of the microwells with a dry cloth or towel and read in a microwell reader us-
ing a 650 nm filter and Neogen Veratox software comparing to the standard curve to calculate
results. Air bubbles should be eliminated, as they could affect analytical results. Results should
be read within 20 minutes of completion of the test.
13. All materials are safe to be disposed of in the trash.
RETESTING
If positives occur in commodities not previously tested, confirm with an additional approved method
prior to taking action. Results between 2.5 and 40 ppm are quantitative. For optimal performance,
results of greater than 40 ppm should be diluted 1:1 with extract diluent buffer as described in the
Sample Extract Dilution section.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Limit of detection: 2 ppm (determined by the mean average of 10 histamine free samples plus
3 standard deviations)
Limit of quantitation: 2.5 ppm (described as the lowest concentration point on the calibration curve
that this test can reliably detect histamine)
Range of quantitation: 2.5–40 ppm (for optimal performance, results greater than 40 ppm require
a further dilution; see Sample Extract Dilution for further instructions.)
Validated matrices: Fresh, canned and pouched tuna in oil or water*, mahi-mahi, bluefish and fish meal.
*AOAC-RI validated matrix
CUSTOMER SERVICE
Neogen Customer Assistance and Technical Services can be reached by using the contact infor-
mation on the back of this booklet. Training on this product, and all Neogen test kits, is available.
SDS INFORMATION AVAILABLE
Safety data sheets (SDS) are available for this test kit, and all of Neogen’s test kits, on Neogen’s
website at foodsafety.neogen.com, or by calling Neogen at 800/234-5333 or 517/372-9200.
TERMS AND CONDITIONS
For Neogen’s full terms and conditions, please visit www.neogen.com/en/terms-and-conditions.
WARRANTY
Neogen Corporation makes no warranty of any kind, either expressed or implied, except that the
materials from which its products are made are of standard quality. If any materials are defective,
Neogen will provide a replacement of the product. Buyer assumes all risk and liability resulting
from the use of this product. There is no warranty of merchantability of this product or of the fit-
ness of the product for any purpose. Neogen shall not be liable for any damages, including special
or consequential damage, or expense arising directly or indirectly from the use of this product.

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 TESTING KITS AVAILABLE FROM NEOGEN
Natural toxins
• Aflatoxin, DON, ochratoxin, zearalenone, T-2/HT-2 toxins, fumonisin, histamine
Foodborne bacteria
• E. coli O157:H7, Salmonella, Listeria, Listeria monocytogenes, Campylobacter,
Staphylococcus aureus, Salmonella enteriditis
Sanitation
• ATP, yeast and mold, total plate count, generic E. coli and total coliforms, protein
residues
Food allergens
• Almonds, crustaceans, eggs, gliadin, hazelnut, milk, mustard, peanuts, sesame, soy,
walnuts, multi-treenut
Genetic modification
• CP4 (Roundup Ready®)
Ruminant by-products
• Meat and bone meal, feed
Species Identification
• Raw and cooked meat samples

North America Brazil

Neogen Headquarters Neogen do Brasil
800-234-5333 (USA/Canada) +55 19 3935.3727
[email protected] [email protected]
foodsafety.neogen.com www.neogendobrasil.com.br
Europe, Middle East and Africa China
Neogen Europe Neogen Bio-Scientific Technology
+ 44 (0) 1292 525 600 Tel: +86 21 6271 7013
[email protected] [email protected]
www.neogeneurope.com www.neogenchina.com.cn
Mexico India
Neogen Latinoamerica Neogen Food and Animal Security
+52 (55) 5254-8235 +91 484 2306598, 2301582
[email protected] [email protected]
www.neogenlac.com www.neogenindia.com

©Neogen Corporation, 2018. Neogen, Veratox and K-Blue are registered trademarks of Neogen Corporation.
All other brand and product names are trademarks or registered trademarks of their respective companies.
16004H V-Hist-ES_1118
 Producto 9505

Por favor lea cuidadosamente las instrucciones antes de realizar la prueba

para Histamina
REFRIGERAR A 2–8°C (35–46°F) • NO CONGELAR

CERTIFICATE NO. 070703

HISTAMINA
Altos niveles de histamina se pueden desarrollar en una variedad de especies de peces a medida que
se descomponen. Estas especies incluyen el atún, dorado, marlin, pez azul, sardinas, anchoas, pez
bonito, arenque y caballa. La ingestión de histamina puede causar intoxicación por escombroides
en los humanos, que puede conducir a una variedad de síntomas, incluyendo salpullido, náuseas,
vómito, diarrea, hipotensión, palpitaciones y debilidad muscular. También se han reportado parálisis
y muerte en casos de intoxicación por escombroides.
Debido a su potencial para causar enfermedades humanas, la Administración de Alimentos
y Medicamentos de los Estados Unidos (FDA) ha determinado que los registros extensivos de
refrigeración y/o las pruebas de histamina deben incluirse en un sistema de análisis de peligros
y de puntos críticos de control (HACCP) para las especies relevantes. La FDA ha establecido un
nivel de acción de 50 partes por millón (ppm) de histamina en pescados domésticos e importados.
USO PREVISTO
Veratox® para Histamina está indicada para el análisis cualitativo de histamina en especies de
peces escombroides como el atún, el pez azul, en harina de pescado y en proteína animal seca.
USUARIO PREVISTO
El kit de prueba está diseñado para ser utilizado por personal de control de calidad y otros
familiarizados con el análisis de histamina en peces. Dado a que la técnica es muy importante,
los operadores deben ser entrenados por un representante de Neogen o por alguien que haya
completado el entrenamiento de Neogen.
ALMACENAMIENTO
Este kit puede utilizarse hasta la fecha de vencimiento en la etiqueta si se almacena refrigerado a
2-8°C (35-46°F). No congelar.
FUNDAMENTOS DEL ANÁLISIS
Veratox para Histamina es un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas-directo competitivo
(ELISA-CD), que permite al usuario obtener concentraciones exactas de histamina en partes por
millón (ppm). La histamina libre en las muestras y los controles compite con la histamina marcada
con la enzima (conjugado) para los sitios de unión de los anticuerpos. Después de un paso de lavado
se añade sustrato, que reacciona con el conjugado unido para producir color azul. Más color azul
significa menos histamina. La prueba se lee en un lector de micropocillos para obtener densidades
ópticas. Las densidades ópticas de los controles forman la curva estándar y las densidades ópticas
de la muestra se trazan contra la curva para calcular la concentración exacta de histamina.

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MATERIALES PROPORCIONADOS
1. 48 tiras de 12 micropocillos recubiertos con anticuerpo
2. 48 tiras de 12 micropocillos para mezcla marcados en rojo
3. 24 botellas con etiquetas amarillas (4 botellas de cada control de histamina de 0, 2.5, 5, 10,
20 y 50 ppm)
4. 4 botellas con etiquetas azules con solución de conjugado de histamina-HRP
5. 8 bolsas de aluminio con buffer diluyente de extracto de muestra concentrado de 10 mM de
PBS en polvo
6. 4 bolsas de aluminio de buffer de lavado concentrado de 10 mM de PBS-Tween
7. 4 botellas con etiquetas verdes de solución de sustrato K-Blue®
8. 4 botellas con etiquetas rojas de solución detenedora Red Stop
MATERIALES RECOMENDADOS, PERO NO PROPORCIONADOS
1. Kit de extracción de Veratox para Histamina (producto Neogen 9510) – contiene 38 botellas,
38 jeringuillas con filtro y 38 tubos
2. Botellas desechables con capacidad de 125 mL (producto Neogen 9398)
3. Jeringuilla con filtro para histamina (producto Neogen 9420H), filtro de papel Whatman No 1
(producto Neogen 9430), centrífuga o equivalente
4. Tubos para recolección de muestras (producto Neogen 9421, 9421B)
5. Cilindro graduado de 100 mL
6. Licuadora
7. Gradilla para tubos de ensayo (producto Neogen 9440)
8. Tubos graduados de 15 mL (producto Neogen 9474)
9. Balanza capaz de pesar 10–50 gramos (producto Neogen 9427)
10. Lector de micropocillos con filtro de 650 nm (producto Neogen 9303)
11. Pipeta de 12 canales (producto Neogen 9273)
12. Pipeta de 100 µL (producto Neogen 9272)
13. Puntas para pipeta de 12 canales y de 100 µL (producto Neogen 9410, 9407, 9417)
14. Toallas de papel absorbente o de un material equivalente
15. Gradilla para micropocillos (producto Neogen 9402)
16. Cronómetro (producto Neogen 9426)
17. Marcador a prueba de agua
18. Piseta de lavado (producto Neogen 9400)
19. Botella de 1 L con tapa (producto Neogen 9472)
20. 2 botes de reactivos para usar con una pipeta de 12 canales (producto Neogen 9435)
21. Agua destilada o desionizada
PRECAUCIONES
1. Almacene el kit de prueba entre 2–8°C (35–46°F) cuando no lo utilice.
2. No utilice componentes del kit después de la fecha de vencimiento.
3. No deben utilizarse materiales de vidrio para el proceso de extracción. La histamina puede
adherirse al vidrio, por lo que el uso de éstos puede afectar los resultados de la prueba.
4. No mezcle reactivos de un kit con los reactivos de otro kit con un número de serie diferente.
5. No ejecute más de 24 micropocillos por prueba.
6. Siga las técnicas de pipeteo apropiadas, incluyendo la preparación de las puntas llenándolas
y dispensando solución antes de usarlas.
7. El uso de tiempos de incubación distintos a los especificados pueden dar resultados inexactos.
8. Permita que el kit alcance una temperatura entre 18–30°C (68–82 F) antes de su uso.
9. Evite el almacenamiento prolongado de los kits a temperatura ambiente.
10. No congele los kits de prueba.
11. Para evitar la contaminación cruzada, utilice puntas de pipeta limpias para cada muestra.
12. Los extractos de productos deben tener un pH de 6–8 antes de la prueba. Las muestras
excesivamente ácidas o alcalinas deben ser ajustadas. Por favor contacte a Neogen para
obtener instrucciones sobre el ajuste del pH.

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 ¿Tiene preguntas? Llame a Neogen al +1 800-234-5333 o +1 517-372-9200

NOTAS DE PROCEDIMIENTO
1. Sustrato. El sustrato K-Blue está listo para su uso. El sustrato debe ser color transparente o
azul claro – deséchelo si el líquido se ha tornado azul oscuro. Solamente vierta el volumen
necesario dentro del bote de reactivos. No regrese a la botella el sustrato que no fue utilizado.
Cubra el bote de reactivos para mantener el sustrato protegido de la luz hasta que lo necesite.
2. Controles. Se incluyen 6 controles con este kit. Neogen recomienda utilizar una combinación
de al menos 5 controles con cada prueba. Esta combinación puede variar. Una posible
combinación es eliminar el control de 5 ppm, para obtener resultados correspondientes a un
análisis cuantitativo completo en el rango de 2.5 a 40 ppm. Otra posibilidad es eliminar el
control de 2.5 ppm para obtener resultados en el rango de 5 a 40 ppm. Los 6 controles pueden
utilizarse con un lector de micropocillos para una cuantificación completa de la histamina en
el rango de 2.5 a 40 ppm. Si es necesario, contacte a Neogen para obtener más información
sobre el uso de los controles.
3. Buffer diluyente de extractos de muestras. Prepare añadiendo una bolsa de aluminio
del buffer de extractos (10 mM PBS) a 1 L de agua destilada o desionizada. Revuelva para
mezclar. No agite. Etiqueta la botella apropiadamente. Almacene el buffer restante cubierto
a temperatura ambiente.
4. Buffer de lavado. Prepare añadiendo el buffer de lavado concentrado (10 mM PBS-Tween)
a 1 L de agua destilada o desionizada. Revuelva para mezclar. No agite. Etiqueta la botella
apropiadamente. Almacene el buffer de lavado restante cubierto a temperatura ambiente.
5. Micropocillos recubiertos con anticuerpo. Mantenga los micropocillos sellados en la bolsa
de aluminio hasta que los necesite. Retire los micropocillos de la bolsa de aluminio después
de la extracción de las muestras y cuando esté listo para comenzar la prueba.
PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
A. Atún enlatado y en bolsas: AOAC 937.07b
Coloque todo el contenido de la lata/bolsa (carne y líquido) en una licuadora. Licue hasta obtener
una mezcla homogénea. Almacene las muestras a 2–8oC (35–46oF) hasta que sean analizadas.
B. Pescado crudo fresco o descongelado: AOAC 937.07a
Limpie y destripe tres pescados. Corte tres pedazos transversales de 2.5 cm (1 pulgada) de
espesor, desde la parte posterior de la aleta pectoral hasta la mitad de la cavidad abdominal
y un corte posterior a la cavidad abdominal. Deshuese los filetes y licue o muela las muestras
juntas hasta obtener una mezcla homogénea. Almacene las muestras entre 2–8oC (35–46oF)
hasta que sean analizadas.
C. Muestras secas (ejemplo: harina de pescado)
La muestra a ser analizada debe ser recolectada de acuerdo con las técnicas de muestreo
aceptadas y ser representativa del lote. Después de la homogeneización, muela parte de la
muestra (mínimo de 200 g) de modo que al menos el 95% del material molido pase a través
de un tamiz de malla 20 (aproximadamente el tamaño de partícula de café fino).
EXTRACCIÓN DE LA MUESTRA
Si está usando el Kit de Extracción de Veratox para Histamina de Neogen (Producto Neogen 9510),
siga las instrucciones de ese kit. De lo contrario, continúe con las instrucciones que siguen.
NOTA: Los productos de vidrio no se deben utilizar para fines de extracción, ya que la histamina
puede adherirse al vidrio.
Muestras líquidas/húmedas
1. Añada 10 g de la mezcla homogénea a una botella de extracción desechable limpia que
contenga 90 mL de agua destilada o desionizada.
2. Tape bien y agite vigorosamente la botella durante 15–20 segundos para suspender el tejido
del pescado en el agua.
3. Espere aproximadamente 5 minutos, luego agite la botella durante 15–20 segundos para
volver a suspender el tejido del pescado.
4. Espere 5 minutos más y agite nuevamente la botella durante 15–20 segundos para volver a
suspender el tejido del pescado. Deje que el tejido se asiente en el fondo de la botella durante
unos 30 segundos.
5. Si es necesario, filtre el contenido a través de papel de filtro plegado o con una jeringuilla con
filtro para histamina (Producto Neogen 9420H) en un recipiente limpio. La muestra está lista
para la dilución del extracto.
ALTERNATIVA: Centrifugue la muestra y utilice el sobrenadante transparente como muestra
para la dilución del extracto.
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Muestras secas
1. Añada 10 g de la mezcla homogénea a una botella de extracción desechable limpia que
contenga 100 mL de agua destilada o desionizada.
2. Tape bien y agite vigorosamente la botella durante 15–20 segundos para suspender la muestra
en el agua.
3. Espere aproximadamente 5 minutos, luego agite la botella durante 15–20 segundos para
volver a suspender la muestra.
4. Espere 5 minutos más y agite nuevamente la botella durante 15–20 segundos para volver a
suspender la muestra. Deje que la muestra se asiente en el fondo de la botella durante unos
30 segundos.
5. Si es necesario, filtre el contenido a través de papel de filtro plegado o con una jeringuilla con
filtro para histamina (Producto Neogen 9420H) en un recipiente limpio. La muestra está lista
para la dilución del extracto.
ALTERNATIVA: Centrifugue la muestra y utilice el sobrenadante transparente como muestra
para la dilución del extracto.
DILUCIÓN DEL EXTRACTO DE LAS MUESTRAS
Debido a la sensibilidad del formato ELISA, el extracto de la muestra debe diluirse antes de realizar
la prueba (vea la Nota Relativa al Procedimiento No 3 para preparar la solución diluyente de
extractos de muestras).
1. Añada 10 mL del buffer diluyente de extractos de muestras en un tubo de ensayo o una
botella limpia.
2. Utilizando una punta de pipeta limpia, añada 100 μL del extracto al buffer diluyente de extractos
de muestras. Revuelva suavemente para mezclar.
3. La muestra está lista para ser analizada. Repita estos pasos para todas las muestras.
NOTA: Para un rendimiento óptimo con resultados esperados superiores a 40 ppm, se
recomienda una dilución adicional del extracto de muestra usando el buffer diluyente de
extracto. Comience con una dilución 1:1, repitiendo la dilución y análisis si es necesario hasta
que el nuevo resultado (antes de la aplicación del factor de dilución) sea inferior a 40 ppm. Los
valores corregidos deben ser multiplicados por 2x para un total X de repeticiones de diluciones
adicionales 1:1. Se deben analizar las muestras dentro de las 4 horas después de la extracción.
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
Permita que todos los reactivos se calienten a una temperatura entre 18–30°C (64–86°F) antes
de su uso.
1. Retire 1 micropocillo para mezcla marcado en rojo para cada muestra a ser analizada, más 5
micropocillos marcados en rojo para los controles, y colóquelos en la gradilla para micropocillos.
2. Retire el mismo número de micropocillos recubiertos con anticuerpos. Devuelva inmediatamente
a la bolsa de aluminio con desecante los micropocillos que no se vayan a utilizar. Vuelva a
sellar la bolsa de aluminio para proteger el anticuerpo. Marque un extremo de la tira con un
“1” y coloque la tira en la gradilla para micropocillos con el extremo marcado a la izquierda.
Nunca marque los micropocillos en el interior o en la parte inferior.
3. Mezcle cada reactivo revolviendo cada botella antes de su uso.
4. Pipetee 100 μL de conjugado de la botella con etiqueta azul a cada uno de los micropocillos
para mezcla marcados en rojo.
5. Los controles (vea la Nota Relativa al Procedimiento No 2) están listos para ser utilizados;
no los diluya. Usando una punta de pipeta nueva, transfiera 100 μL de los controles y de
muestras diluidas a los micropocillos para mezcla marcados en rojo de la siguiente manera:
Si le preocupan los niveles de histamina entre 2.5 y 40 ppm:
0 2.5 10 20 50 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 Tira 1
S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 S16 S17 S18 S19 Tira 2
Si le preocupan los niveles de histamina entre 5 y 40 ppm:
0 5 10 20 50 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 Tira 1
S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 S16 S17 S18 S19 Tira 2

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 ¿Tiene preguntas? Llame a Neogen al +1 800-234-5333 o +1 517-372-9200

6. Usando una pipeta de 12 canales con pipetas nuevas, mezcle el líquido de los micropocillos
pipeteando hacia arriba y hacia abajo 3 veces. Transfiera 100 µL a los micropocillos recubiertos
con anticuerpo.
7. Incube por 10 minutos a temperatura ambiente entre 18–30°C (64–86°F), mezclando durante
los primeros 10–20 segundos deslizando la gradilla de micropocillos hacia atrás y hacia
adelante sobre una superficie plana, sin salpicar los reactivos en los micropocillos. Deseche
los micropocillos para mezcla marcados en rojo.
8. Sacuda los micropocillos para vaciar su contenido. Llene los micropocillos con buffer de
lavado diluido y vacíelos. Repita este paso 3 veces, luego invierta los micropocillos y golpéelos
ligeramente sobre una toalla de papel absorbente para eliminar toda el agua restante.
9. Vierta el volumen necesario de sustrato de la botella con etiqueta verde en un bote de reactivos
con etiqueta verde. Luego, usando puntas nuevas en la pipeta de 12 canales, pipetee 100 µL
de sustrato a los micropocillos.
10. Incube por 10 minutos a temperatura ambiente entre 18–30°C (64–86°F), mezclando
durante los primeros 10–20 segundos deslizando la gradilla de micropocillos hacia atrás y
hacia adelante sobre una superficie plana. Deseche el sustrato restante y enjuague el bote
de reactivos con agua.
11. Vierta la solución Red Stop de la botella con etiqueta roja (mismo volumen que el sustrato) en
el bote de reactivos con etiqueta roja. Usando las mismas puntas en la pipeta de 12 canales
utilizadas para vertir el sustrato, agregue 100 µL de la solución Red Stop a cada micropocillo
y mezcle deslizándolos hacia atrás y hacia adelante sobre una superficie plana. Deseche las
puntas.
12. Pase una toalla o paño seco por el exterior de los micropocillos y lea en un lector usando un
filtro de 650 nm y el software Veratox de Neogen comparando la curva con la curva estándar
para calcular los resultados. Elimine las burbujas de aire, ya que podrían afectar los resultados
analíticos. Los resultados deben leerse dentro de los 20 minutos después de completar la prueba.
13. Todos los materiales son seguros para desechar en la basura.
REPETICIÓN DE LA PRUEBA
Si se obtienen resultados positivos en productos que no se habían analizado previamente, confírmelos
con un método aprobado adicional antes de tomar acción. Los resultados entre 2.5 y 40 ppm son
cuantitativos. Para un rendimiento óptimo, los resultados superiores a 40 ppm deben diluirse 1:1
con la solución diluyente de extracto de muestra, como se describe en la sección Dilución del
extracto de muestras.
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
Límite de detección: 2 ppm (determinado por el promedio de 10 muestras libres de histamina,
más 3 desviaciones estándar).
Límite de cuantificación: 2.5 ppm (descrito como el punto de concentración más bajo de la curva
de calibración que esta prueba puede detectar con fiabilidad la histamina).
Rango de cuantificación: 2.5–40 ppm (para un rendimiento óptimo, los resultados superiores a
40 ppm requieren una dilución adicional; véase “Dilución del extracto de las muestras” para
obtener más instrucciones).
Matrices validadas: Atún fresco, enlatado y en bolsas en aceite o en agua*, dorado, pez azul y
harina de pescado.
*Matriz validada por el AOAC-RI

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SERVICIO AL CLIENTE
Puede contactar los Servicios Técnicos y Asistencia al Cliente de Neogen usando la información de
contacto en la parte posterior de este folleto. Entrenamiento para este producto, y para todos los
kits de Neogen, está disponible.
INFORMACIÓN DE HOJAS DE SEGURIDAD (SDS) DISPONIBLE
Las Hojas de Seguridad (SDS) para este kit, y para todos los kits de Neogen, están disponibles
en la página electrónica de Neogen foodsafety.neogen.com/sp, o llamando a Neogen al
+1 800/234-5333 o +1 517/372-9200.
TÉRMINOS Y CONDICIONES
Por favor visite www.neogen.com/sp/terms-and-conditions para los términos y condiciones com-
pletos de Neogen.
GARANTÍA
Neogen Corporation no ofrece ningún tipo de garantía expresa o implícita, excepto que los materiales
utilizados en la fabricación de los productos son de calidad estándar. Si cualquiera de sus materiales
resulta defectuoso, Neogen proveerá un reemplazo del producto. El comprador asume toda la
responsabilidad y riesgos resultantes por el uso de este producto. No hay ningún tipo de garantía
de comerciabilidad de este producto o de la idoneidad de éste para cualquier propósito. Neogen
no será responsable de ningún daño, incluyendo daños especiales o consecuenciales, o de gastos
derivados directa o indirectamente del uso del producto.

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 ¿Tiene preguntas? Llame a Neogen al +1 800-234-5333 o +1 517-372-9200

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 KITS DE PRUEBAS DISPONIBLES DE NEOGEN
Toxinas naturales
• Aflatoxina, DON, ocratoxina, zearalenona, toxinas T-2/HT-2, fumonisina, histamina
Bacterias transmitidas por los alimentos
• E. coli O157:H7, Salmonella, Listeria, Listeria monocytogenes, Campylobacter,
Staphylococcus aureus, Salmonella enteriditis
Saneamiento
• Trifosfato de adenosina (ATP), mohos y levaduras, recuento total en placa,
E. coli genérico y total de coliformes, residuos proteicos
Alérgenos alimentarios
• Almendras, crustáceos, huevos, gliadina, avellana, leche, mostaza, maní, ajonjolí, soya, nuez
de nogal, múltiples frutos secos
Modificación genética
• CP4 (Roundup Ready®)
Subproductos de rumiantes
• Harina de carne y huesos, concentrado animal
Identificación de especies
• Muestras de carnes crudas y cocinadas

Norteamérica Brasil
Oficinas corporativas de Neogen Neogen do Brasil
+1 800-234-5333 (EEUU/Canadá) +55 19 3935.3727
[email protected] [email protected]
foodsafety.neogen.com/sp www.neogendobrasil.com.br
Europa, Medio Oriente y África China
Neogen Europe Neogen Bio-Scientific Technology
+ 44 (0) 1292 525 600 Tel: +86 21 6271 7013
[email protected] [email protected]
www.neogeneurope.com www.neogenchina.com.cn
México India
Neogen Latinoamérica Neogen Food and Animal Security
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