PDF Ion Channels As Therapeutic Targets Part A 1St Edition Donev Ebook Full Chapter

Ion channels as therapeutic targets.
Part A 1st Edition Donev

Visit to download the full and correct content document:
https://textbookfull.com/product/ion-channels-as-therapeutic-targets-part-a-1st-edition
-donev/
More products digital (pdf, epub, mobi) instant
download maybe you interests ...
Ion channels as therapeutic targets. Part B 1st Edition

Donev
https://textbookfull.com/product/ion-channels-as-therapeutic-
targets-part-b-1st-edition-donev/
Ion Channels in Health and Disease 1st Edition Geoffrey

S. Pitt
https://textbookfull.com/product/ion-channels-in-health-and-
disease-1st-edition-geoffrey-s-pitt/
Damage Associated Molecular Patterns in Human Diseases

Volume 2 Danger Signals as Diagnostics Prognostics and
Therapeutic Targets Walter Gottlieb Land
https://textbookfull.com/product/damage-associated-molecular-
patterns-in-human-diseases-volume-2-danger-signals-as-
diagnostics-prognostics-and-therapeutic-targets-walter-gottlieb-
land/
Ion Transport Across Epithelial Tissues and Disease Ion

Channels and Transporters of Epithelia in Health and
Disease Vol 2 Kirk L. Hamilton
https://textbookfull.com/product/ion-transport-across-epithelial-
tissues-and-disease-ion-channels-and-transporters-of-epithelia-
in-health-and-disease-vol-2-kirk-l-hamilton/
Personalized medicine First Edition Donev
https://textbookfull.com/product/personalized-medicine-first-
edition-donev/
Unsteady Flow in Open Channels 1st Edition Jurjen A.

Battjes
https://textbookfull.com/product/unsteady-flow-in-open-
channels-1st-edition-jurjen-a-battjes/
Therapeutic Vaccines as Novel Immunotherapy Biological

and Clinical Concepts Hironori Nakagami
https://textbookfull.com/product/therapeutic-vaccines-as-novel-
immunotherapy-biological-and-clinical-concepts-hironori-nakagami/
A Single Trapped Rydberg Ion Gerard Higgins
https://textbookfull.com/product/a-single-trapped-rydberg-ion-
gerard-higgins/
Helium Ion Microscopy 1st Edition Gregor Hlawacek
https://textbookfull.com/product/helium-ion-microscopy-1st-
edition-gregor-hlawacek/
Academic Press is an imprint of Elsevier
50 Hampshire Street, 5th Floor, Cambridge, MA 02139, USA
525 B Street, Suite 1800, San Diego, CA 92101-4495, USA
The Boulevard, Langford Lane, Kidlington, Oxford OX5 1GB, UK
125 London Wall, London, EC2Y 5AS, UK
First edition 2016
Copyright © 2016 Elsevier Inc. All rights reserved.
No part of this publication may be reproduced or transmitted in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying, recording, or any information storage and
retrieval system, without permission in writing from the publisher. Details on how to seek
permission, further information about the Publisher’s permissions policies and our
arrangements with organizations such as the Copyright Clearance Center and the Copyright
Licensing Agency, can be found at our website: www.elsevier.com/permissions.
This book and the individual contributions contained in it are protected under copyright by
the Publisher (other than as may be noted herein).
Notices
Knowledge and best practice in this field are constantly changing. As new research and
experience broaden our understanding, changes in research methods, professional practices,
or medical treatment may become necessary.
Practitioners and researchers must always rely on their own experience and knowledge in
evaluating and using any information, methods, compounds, or experiments described
herein. In using such information or methods they should be mindful of their own safety and
the safety of others, including parties for whom they have a professional responsibility.
To the fullest extent of the law, neither the Publisher nor the authors, contributors, or editors,
assume any liability for any injury and/or damage to persons or property as a matter of
products liability, negligence or otherwise, or from any use or operation of any methods,
products, instructions, or ideas contained in the material herein.
ISBN: 978-0-12-804794-1
ISSN: 1876-1623
For information on all Academic Press publications

visit our website at http://store.elsevier.com
CONTRIBUTORS
Helena M. Abelaira
Laboratory of Neurosciences, Graduate Program in Health Sciences, Health Sciences Unit,
University of Southern Santa Catarina, Criciuma, Santa Catarina, Brazil
Rashmi K. Ambasta
Molecular Neuroscience and Functional Genomics Laboratory, Delhi Technological
University (Formerly DCE), Delhi, India
Adela Banciu
Department of Anatomy, Animal Physiology and Biophysics, Faculty of Biology, University
of Bucharest, Bucharest, Romania
Daniel Dumitru Banciu
Department of Anatomy, Animal Physiology and Biophysics, Faculty of Biology, University
of Bucharest, Bucharest, Romania
Xu Chen
College of Life Sciences, Shaanxi Normal University, Xi’an, Shaanxi, PR China
Jinke Cheng
Department of Biochemistry and Molecular Cell Biology, Shanghai Jiao Tong University
School of Medicine, Shanghai, PR China
Chantelle Fourie
Department of Physiology, Centre for Brain Research, University of Auckland, Auckland,
New Zealand
Roman V. Frolov
Division of Biophysics, Department of Physics, University of Oulu, Oulun Yliopisto,
Finland
Yan-Lin Fu
Department of Physiology and Biophysics, Case Western Reserve University School of
Medicine, Cleveland, Ohio, USA
Lucy Goodman
New Zealand
Zuleide M. Ignácio
Niraj Kumar Jha
ix
x Contributors
Saurabh Kumar Jha

Dhiraj Kumar
Pravir Kumar
University (Formerly DCE), Delhi, India, and Department of Neurology, Adjunct faculty,
Tufts University School of Medicine, Boston, Massachusetts, USA
Kevin Lee
New Zealand
Beulah Leitch
Department of Anatomy, University of Otago, Dunedin, New Zealand
Johanna M. Montgomery
New Zealand
Ting-Wei Mu
Department of Physiology and Biophysics, Case Western Reserve University School of
Medicine, Cleveland, Ohio, USA
Yitao Qi
João Quevedo
University of Southern Santa Catarina, Criciuma, Santa Catarina, Brazil; Center for
Translational Psychiatry; Center of Excellence on Mood Disorders, Department of
Psychiatry and Behavioral Sciences, Medical School, and Neuroscience Graduate Program,
Graduate School of Biomedical Sciences, The University of Texas Health Science Center at
Houston, Houston, Texas, USA
Beatrice Mihaela Radu
Department of Neurological and Movement Sciences, Section of Anatomy and Histology,
University of Verona, Verona, Italy, and Department of Anatomy, Animal Physiology and
Biophysics, Faculty of Biology, University of Bucharest, Bucharest, Romania
Mihai Radu
Department of Neurological and Movement Sciences, Section of Anatomy and Histology,
University of Verona, Verona, Italy, and Department of Life and Environmental Physics,
‘Horia Hulubei’ National Institute for Physics and Nuclear Engineering, Magurele, Romania
Gislaine Z. Reus
Contributors xi
Ana Lúcia S. Rodrigues

Laboratory of Neurobiology of Depression, Department of Biochemistry, Center of
Biological Sciences, Federal University of Santa Catarina, Florianópolis, Santa Catarina,
Brazil
Susan Schenk
School of Psychology, Victoria University, Wellington, New Zealand
Gerald Seifert
Institute of Cellular Neurosciences, Medical Faculty, University of Bonn, Bonn, Germany
Christian Steinhäuser
Stephanie E. Titus
Center for Translational Psychiatry, Department of Psychiatry and Behavioral Sciences,
Medical School, The University of Texas Health Science Center at Houston, Houston,
Texas, USA
Talita Tuon
Ya-Juan Wang
Center for Proteomics and Bioinformatics and Department of Epidemiology and
Biostatistics, Case Western Reserve University School of Medicine, Cleveland, Ohio, USA
Matti Weckstr€ omw
Division of Biophysics, Department of Physics, University of Oulu, Oulun Yliopisto,
Finland
Johannes Weller
Hongmei Wu
w
Matti Weckstr€
om has died.
PREFACE
Ion channels are pore-forming membrane proteins expressed in almost all

cell types. These proteins trigger electrical signaling throughout the body
by gating the flow of ions across the cell membrane. Two characteristic fea-
tures of ion channels distinguish them from other types of ion transporter
proteins. First, this is the very high rate of ion transport through the channel
compared to other transporter proteins (often 106 ions per second or greater)
and second, ions pass through channels down their electrochemical gradient
without the participation of metabolic energy.
The sequencing of the human genome has identified more than 400
putative ion channels. However, only a fraction of these theoretically iden-
tified channels have been cloned and functionally characterized. The wide-
spread tissue distribution of ion channels, along with the multiple
physiological consequences of their opening and closing, makes targeting
of ion channels very promising targets for development of therapeutics.
The potential validation of ion channels as drug targets provides an enor-
mous market opportunity for their reemergence as key targets in drug dis-
covery. However, to realize the great potential of this target class, an
understanding of the validation of these targets as well as development of
suitable screening technologies that reflect the complexity of ion channel
structure and function remains key drivers for exploitation of this
opportunity.
In spite of some important drugs targeting ion channels which are today
in clinical use, as a class, ion channels remain underexploited in drug discov-
ery. Furthermore, many existing drugs are poorly selective with significant
toxicities or suboptimal efficacy. This thematic volume of the Advances in
Protein Chemistry and Structural Biology is dedicated to ion channels as ther-
apeutic targets and more specifically as promising treatment targets in neu-
rological and psychiatric disorders. Chapter 1 in this volume summarizes
current advances about the protein biogenesis process of the Cys-loop
receptors. Operating on individual biogenesis steps influences the receptor
cell surface level; thus, manipulating the proteostasis network components
can regulate the function of the receptors, representing an emerging thera-
peutic strategy for corresponding channelopathies. Chapter 2 proposes for
the first time a novel conceptual framework binding together transient
receptor potential (TRP) channels, voltage-gated sodium channels (Nav),
xiii
xiv Preface
and voltage-gated calcium channels (Cav). Authors propose a “flow-

excitation model” that takes into account the inputs mediated by TRP
and other similar channels, the outputs invariably provided by Cav channels,
and the regenerative transmission of signals in the neural networks, for
which Nav channels are responsible. This framework is used to examine
the function, structure, and pharmacology of these channel classes both at
cellular and whole-body physiological level. Building on that basis, the
pathologies arising from the direct or indirect malfunction of the channels
are discussed. The numerous pharmacological interventions affecting these
channels are also described. Part of those are well-established treatments, like
treatment of hypertension or some forms of epilepsy, but many others are
deeply problematic due to poor drug specificity, ion channel diversity,
and widespread expression of the channels in tissues other than those actually
targeted.
Chapter 3 reviews the potential role of ion channels in membrane phys-
iology and brain homeostasis where ion channels and their associated factors
have been characterized with their functional consequences in neurological
diseases. Furthermore, mechanistic role of perturbed ion channels identified
in various neurodegenerative disorders is discussed. Finally, ion channel
modulators have been investigated for their therapeutic intervention in
treating common neurodegenerative disorders. Chapter 4 is dedicated to
acid-sensing ion channels (ASICs) which are important pharmacological tar-
gets being involved in a variety of pathophysiological processes affecting
both the peripheral nervous system (e.g., peripheral pain, diabetic neurop-
athy) and the central nervous system (e.g., stroke, epilepsy, migraine, anx-
iety, fear, depression, neurodegenerative diseases). This review discusses the
role played by ASICs in different pathologies and the pharmacological agents
acting on ASICs that might represent promising drugs. Perspectives and lim-
itations in the use of ASICs antagonists and modulators as pharmaceutical
agents are also discussed.
Chapter 5 focuses on the glutamatergic system and its associated recep-
tors that are implicated in the pathophysiology of major depressive disorder.
The N-methyl-D-aspartate (NMDA), a glutamate receptor, is a binding
and/or modulation site for both classical antidepressants and new fast-acting
antidepressants. Thus, this review presents evidences describing the effect of
antidepressants that modulate NMDA receptors and the mechanisms that
contribute to the antidepressant response. Chapter 6 continues on the glut-
amatergic system. Glutamate is the major neurotransmitter that mediates
Preface xv
excitatory synaptic transmission in the brain through activation of

alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionate (AMPA) recep-
tors. These receptors have therefore been identified as a target for the devel-
opment of therapeutic treatments for neurological disorders including
epilepsy, neurodegenerative diseases, autism, and drug addiction. Their
therapeutic potential has since declined due to inconsistent results in clinical
trials. However, recent advances in basic biomedical research significantly
contribute to our knowledge of AMPA receptor structure, binding sites,
and interactions with auxiliary proteins. In particular, the large complex
of postsynaptic proteins that interact with AMPA receptor subunits has been
shown to control AMPA receptor insertion, location, pharmacology, syn-
aptic transmission, and plasticity. Thus, these proteins are now being con-
sidered as alternative therapeutic target sites for modulating AMPA receptors
in neurological disorders.
Chapter 7 is an experimental example of the role of the intercellular gap
junction inwardly rectifying K+ (Kir) channels and two-pore domain K+
(K2P) channels in brain homeostasis maintained by astrocytes. Authors com-
bined functional and molecular analyses to clarify how low pH affects K+
channel function in astrocytes freshly isolated from the developing mouse
hippocampus. No evidence has been found for the presence of ASIC and
transient receptor potential vanilloid receptors in hippocampal astrocytes.
However, the assembly of astrocytic K+ channels allows tolerating short,
transient acidification, and glial Kir4.1 and K2P channels can be considered
promising new targets in brain diseases accompanied by pH shifts. Chapter 8
in this volume discusses the ion channels modification by small ubiquitin-
like modifier (SUMO) proteins and their role in neurological channel-
opathies, especially the determinants of the channels’ regulation. SUMO
proteins covalently conjugate lysine residues in a large number of target pro-
teins and modify their functions. SUMO modification (SUMOylation) has
emerged as an important regulatory mechanism for protein stability, func-
tion, subcellular localization, and protein–protein interactions. It is until
recently that the physiological impacts of SUMOylation on the regulation
of neuronal K+ channels have been investigated. It is now clear that this ion
channel modification is a key determinant in the function of K+ channels,
and SUMOylation is implicated in a wide range of channelopathies, includ-
ing epilepsy and sudden death.
Nonetheless, ion channels remain a relatively underexploited family of
proteins for therapeutic interventions. A number of recent advances in both
xvi Preface
technology and biomedical knowledge suggest that these proteins are prom-
ising targets for future therapeutic development. Therefore, the aim of this
volume is to promote further research in the structure, function, and regu-
lation of different families of ion channels which would result in designing
new efficient targeted drugs with significantly fewer adverse effects.
DR. ROSSEN DONEV

Biomed Consult Ltd
United Kingdom
CHAPTER ONE
Proteostasis Maintenance of
Cys-Loop Receptors
Yan-Lin Fu*, Ya-Juan Wang†, Ting-Wei Mu*,1
*
Department of Physiology and Biophysics, Case Western Reserve University School of Medicine, Cleveland,
Ohio, USA
†
Center for Proteomics and Bioinformatics and Department of Epidemiology and Biostatistics, Case Western
Reserve University School of Medicine, Cleveland, Ohio, USA
1
Corresponding author: e-mail address: [email protected]
Contents
1. Introduction 2
2. Folding, Assembly, and Degradation of Cys-Loop Receptors in the ER 5
2.1 Folding and Assembly of Cys-Loop Receptors 5
2.2 ERAD of the Cys-Loop Receptors 8
3. Trafficking of Cys-Loop Receptors from ER to Golgi and to Plasma Membrane 10
4. Protein Quality Control of Cys-Loop Receptors on the Plasma Membrane 11
4.1 Clustering 11
4.2 Endocytosis 12
5. Other Regulations of Cys-Loop Receptors 13
5.1 Lipid Involvement in Trafficking and Clustering 13
5.2 Phosphorylation Signaling in the Biogenesis of the Receptors 14
6. Disease and Therapy 15
References 16
Abstract
The Cys-loop receptors play prominent roles in the nervous system. They include γ-
aminobutyric acid type A receptors, nicotinic acetylcholine receptors, 5-hydroxytrypta-
mine type-3 receptors, and glycine receptors. Proteostasis represents an optimal state of
the cellular proteome in normal physiology. The proteostasis network regulates the
folding, assembly, degradation, and trafficking of the Cys-loop receptors, ensuring their
efficient functional cell surface expressions. Here, we summarize current advances about
the protein biogenesis process of the Cys-loop receptors. Because operating on individ-
ual biogenesis steps influences the receptor cell surface level, manipulating the
proteostasis network components can regulate the function of the receptors, rep-
resenting an emerging therapeutic strategy for corresponding channelopathies.
Advances in Protein Chemistry and Structural Biology, Volume 103 # 2016 Elsevier Inc. 1
ISSN 1876-1623 All rights reserved.
http://dx.doi.org/10.1016/bs.apcsb.2015.11.002
2 Yan-Lin Fu et al.
1. INTRODUCTION
The Cys-loop receptors, belonging to ligand-gated channels family,
are activated by neurotransmitters, allowing ion flux through neuronal cell
membrane to maintain the neuronal activity of central nervous system
(CNS; Lester, Dibas, Dahan, Leite, & Dougherty, 2004). They include
γ-aminobutyric acid type A receptors (GABAARs), nicotinic acetylcholine
receptors (nAChRs), 5-hydroxytryptamine type-3 receptors (5-HT3Rs),
and glycine receptors (GlyRs). As the Cys-loop receptors are composed of five
homomeric or heteromeric subunits, they are also called pentameric ligand-
gated ion channels. The bacterial GLIC and ELIC and the Caenorhabditis
elegans GluCl are also in this superfamily.
The Cys-loop receptors have prominent roles in the nervous system. As
the most studied member, nAChRs are cation channels, permeable to Na+,
K+, and Ca2+ upon activation. They are responsible for synaptic transmis-
sion in the CNS, in autonomic ganglias, in the adrenal gland, and at neuro-
muscular junctions and other peripheral synapses. The receptors are
involved in diseases such as Alzheimer’s disease (AD), bipolar disease, and
myasthenia gravis. nAChRs located at different locations are composed of
different sets of subunit subtypes. α1, β1, γ, and δ subunits or α1, β1, δ,
and ε subunits form muscle-type nAChRs at a 2:1:1:1 ratio, whereas
α2–α10 and β2–β4 subunits compose the most neuronal-type receptors
with (α4)3(β2)2, (α4)2(β2)3, or (α7)5 subtypes predominantly found in
CNS and α3β4 subtypes in autonomic ganglion and adrenal gland (Gotti
et al., 2009; Hogg, Raggenbass, & Bertrand, 2003; Mazzaferro et al.,
2014; Palma, Bertrand, Binzoni, & Bertrand, 1996; Wu, Cheng, Jiang,
Melcher, & Xu, 2015; Xiao & Kellar, 2004).
5-HT3Rs, the only inotropic receptor in serotonin receptor family, are
also cation channels permeable to Na+, K+, and Ca2+ upon activation. They
are widely located at postsynaptic sites in hippocampus, cortex, substantia
nigra, and brain stem. They also exist in the presynaptic GABAergic nerve
terminals in the amygdala and CA1 region of the hippocampus, presynaptic
glutamatergic synapses, glial cell membranes in the medial nucleus of the sol-
itary tract where they play a major role in regulating the release of neuro-
transmitters such as GABA, dopamine, glutamate (Connolly, 2008). They
are involved in many clinical diseases such as drug addiction, cognitive func-
tion, schizophrenia, and satiety control. Its antagonists are used to treat
postinfectious irritable bowel syndrome and severe diarrhea-predominant
Proteostasis Maintenance of Cys-Loop Receptors 3
irritable bowel syndrome, chemotherapy-induced vomiting, and radiother-

apy-induced and postoperative nausea and vomiting (Wu et al., 2015). The
pentameric channels exist either as 5-HT3A homomeric receptors or as
5-HT3A/3B heteromeric receptors with a stoichiometry of 3(5-HT3B):2
(5-HT3A).
GABAARs are chloride channels. They are one of the main targets for
anesthesia, epilepsy, anxiety disorders, mood disorders, and schizophrenia
(Luscher, Fuchs, & Kilpatrick, 2011). GABAARs are expressed postsynap-
tically, mediating phasic inhibition. They are also expressed at perisynaptic
and extrasynaptic sites, mediating the tonic inhibition (Nusser, Hajos,
Somogyi, & Mody, 1998). There are abundance interchanges between
the receptors locating at postsynaptic and extrasynaptic sites. To date, there
are 19 GABAAR subunits belonging to eight classes based on sequence iden-
tity. They are α(1–6), β(1–3), γ(1–3), δ, ε, π, θ, and ρ(1–3) (Whiting et al.,
1999). There are alternatively spliced variants of several of these subunits.
For example, a short form (γ2S) and a long form (γ2L) of γ2 subunits exist,
and their difference is that an eight-amino-acid insert exists in the intracel-
lular loop domain (ICD) of the γ2L subunit (Kofuji, Wang, Moss, Huganir,
& Burt, 1991; Whiting, McKernan, & Iversen, 1990). The majority of
GABAAR subtypes expressed in the brain are composed of α1β2γ2, then
α2β3γ2 and α3β3γ2, which form the stoichiometry of 2α:2β:1γ (Vithlani,
Terunuma, & Moss, 2011).
Recently, high-resolution structures of the Cys-loop receptors, includ-
ing nAChR (Unwin, 2005), GluCl (Hibbs & Gouaux, 2011), GLIC
(Bocquet et al., 2009), ELIC (Hilf & Dutzler, 2008), 5-HT3R (Hassaine
et al., 2014), GABAAR (Miller & Aricescu, 2014), and GlyR (Du, Lu,
Wu, Cheng, & Gouaux, 2015), have been elucidated. The common struc-
tural feature of this superfamily is that five subunits form the receptor
(Fig. 1A). Each subunit has a large extracellular N-terminal domain, four
transmembrane (TM) helices (M1–M4), and a large ICD linking M3
and M4 (Fig. 1B). The signature disulfide bond is formed by two cysteine
residues, which are separated by 13 residues. This Cys-loop structure is
important in the intersubunit assembly because blocking its formation
negatively affects the receptor assembly (Green & Wanamaker, 1997).
The N-terminal domains of the five subunits form the ligand-binding
domain, which lies in the interfaces of adjacent subunits. The M2 transmem-
brane helices from five subunits form the channel pore, which allows the
flux of specific ions. M1 and M3 helices surround next to M2, and
M4 locates in the outermost area of the channel pore. The ICD between
4 Yan-Lin Fu et al.
A B
Extracellular
90°° Cys-loop
Cytosolic
Figure 1 Structural characteristics of the Cys-loop receptors. (A) The Cys-loop receptors
are pentameric, forming a central ion pore. (B) Each subunit has a large ER lumen
domain, four transmembrane helices, and a large intracellular loop domain (ICD)
between TM3 and TM4. The two cysteines that form the signature disulfide bond are
shown in sphere model. The cartoons are built from the crystal structures of GABAA
receptors (4COF).
M3 and M4 is important for modulating the trafficking of the receptors and

subunit clustering on cell membrane. It also affects the channel conductance
by influencing the accessibility of the channel pore to ions (Thompson,
Lester, & Lummis, 2010). The TM domains play an important role in chan-
nel folding, assembly, and gating.
Proteostasis maintenance of Cys-loop receptors ensures their normal
functional (Balch, Morimoto, Dillin, & Kelly, 2008). The proteostasis net-
work regulates their functional cell surface expression levels by operating on
their folding, assembly, trafficking, and degradation along protein biogenesis
pathways (Fig. 2). To function, individual subunits of Cys-loop receptors
need to fold into their native structures and assemble correctly with other
subunits in the endoplasmic reticulum (ER). Properly assembled receptors
will be able to be transported from the ER through Golgi to cell surface.
Unassembled subunits or misfolded subunits will undergo the ER-associated
degradation (ERAD) pathway, being retrotranslocated into the cytosol and
degraded by the proteasome (Guerriero & Brodsky, 2012; Olzmann,
Kopito, & Christianson, 2013; Smith, Ploegh, & Weissman, 2011; Wang,
Tayo, et al., 2014). Problems in any step during the biogenesis of the
Cys-loop receptors affect the normal surface expression level of the recep-
tors, thus causing diseases. For example, many mutations of human
GABAARs lead to epilepsy by abolishing the folding, assembly, and traffick-
ing of the mutant receptors (Macdonald, Kang, & Gallagher, 2010). Also,
the receptors on the cell surface undergo continuous endocytosis and
Plasma
membrane
Trafficking
Assembly
Chaperone-assisted
folding
Golgi
Cys-loop
receptors Endocytosis
ER-associated
degradation
Endoplasmic
reticulum
Proteasome
Figure 2 Protein biogenesis pathway of the Cys-loop receptors. The receptor subunit
proteins are cotranslationally translocated onto the ER membrane. Molecular chaper-
ones both in the ER and in the cytosol assist their folding. Properly folded subunits
assemble into a pentamer, which is then transported from the ER to Golgi and to
the plasma membrane. Misfolded proteins and unassembled subunits are degraded
by the ER-associated degradation pathway. The receptors on the plasma membrane
undergo endocytosis.
membrane insertion. Factors that affect this balance will influence the
potency of the receptor-mediated neuron activity.
In this review, we present the proteostasis maintenance of the Cys-loop
receptors. We summarize the folding and assembly characteristics of the
Cys-loop receptors in the ER and their trafficking from the ER to Golgi.
We also discuss the clustering, the endocytosis and recycling of the receptors
on the plasma membrane.
2. FOLDING, ASSEMBLY, AND DEGRADATION OF

CYS-LOOP RECEPTORS IN THE ER
2.1 Folding and Assembly of Cys-Loop Receptors
The correct synthesis and folding of individual subunits and the subunit
assembly at specific forms are required for them to exit the ER for
6 Yan-Lin Fu et al.
subsequent trafficking to the Golgi and plasma membrane. This is evidenced

first by previous study showing that only certain assembly of subunits can
form functional surface receptors. Expression of α1, β2, or the long splice
variant of γ2 subunits (γ2L) of GABAARs alone in the heterologous cells
can lead to the formation of homomeric assemblies in the ER, but they fail
to exit the ER (Connolly, Krishek, McDonald, Smart, & Moss, 1996).
Coexpression of α and β but not α and γ or β and γ can lead to limited func-
tional surface expression of the receptors (Luscher et al., 2011). When α, β,
and γ subunits are coexpressed, the formation of 2α and 2β and 1γ subunit is
strongly favored against other forms (Luscher et al., 2011). The preference of
formation for certain assembly receptor subtypes may be due to the fact that
forming the correct assembly structure hides the ER retention signal in the
single receptor subunits. The γ2L subunits containing an eight-amino-acid
ER retention signal are retained in the ER when expressed alone, whereas
the γ2S subunits without this retention signal are able to exit the ER and
translocate onto cell surface even when expressed by themselves
(Connolly, Uren, et al., 1999). The 5-HT3B subunits cannot form a
homopentamer since this subunit contains the ER retrieval signal, which
can only be masked in the presence of the 5-HT3A subunits (Boyd,
Doward, Kirkness, Millar, & Connolly, 2003). Mutation of a motif within
a conserved transmembrane domain of nAChR subunits enables them to
exit the ER, whereas insertion of this motif to proteins that originally suc-
cessfully transported to cell surface makes them retained in ER. Assembly of
native nAChR subunits into pentameric receptors covers this motif, leading
to successful traffick from the ER to cell surface (Wang et al., 2002).
Pathogenic mutations affect the subunit folding or receptor assembly,
resulting in loss of functional surface expression of the Cys-loop receptors.
For example, the R43Q mutation in the γ2 subunit of GABAARs interupts
its association with the αβ subunit complex, leading to its retention in the
ER (Frugier et al., 2007). GABAARs containing only αβ subunits have
reduced channel function, leading to childhood absence epilepsy and febrile
seizure. The D219N and A322D mutations in the α1 subunit of GABAARs
are linked to idiopathic generalized epilepsy by affecting the folding and
assembly of the subunit, which leads to their enhanced ERAD and impaired
surface expression (Gallagher, Ding, Maheshwari, & Macdonald, 2007;
Han, Guan, Wang, Hatzoglou, & Mu, 2015). The R177G mutations in
the γ2 subunits undermine the subunits folding or assembly and lead to epi-
lepsy phenotype (Todd, Gurba, Botzolakis, Stanic, & Macdonald, 2014).
For nAChRs, β4R348C negatively affects the ER exit of nAChRs and leads
to reduced agonist-induced currents and amyotrophic lateral sclerosis

(Richards et al., 2011). The S143L, C128S, and R147L mutations located
at N-terminal extracellular domain of ε subunits for nAChRs influence the
subunit assembly and are linked to congenital myasthenic syndromes (Engel,
Ohno, & Sine, 1999).
Although it is essential for the Cys-loop receptors to acquire their correct
folding and assembly status, these processes are difficult because each recep-
tor, being a pentamer, has a large-molecular weight, which is about
250 kDa, and each subunit has multitransmembrane domains. As a result,
the assembly process is generally inefficient and slow. Only 25% of newly
synthesized GABAARs are assembled into heteromeric receptors, and
30% of the translated α subunits of nAChRs are assembled (Gorrie et al.,
1997; Wanamaker, Christianson, & Green, 2003). The half-life of the
nAChR assembly is more than 90 min, much longer than 7–10 min, the
half-life of influenza hemagglutinin to form homotrimers (Wanamaker et
al., 2003). The Green group has determined the assembly models of nAChR
by using pulse chase and coimmunoprecipitation assays with subunits
sequence-specific antibodies (Wanamaker et al., 2003). However, no fold-
ing and assembly models of other Cys-loop receptor are available yet.
The assembly of Cys-loop receptors depends on the N-terminal signal.
The N-terminal extension and putative α-helix in the α1, β2, and γ2 sub-
units of GABAARs are required for the intersubunit assembly and thus can
affect the cell surface expression level of the receptors (Wong, Tae, &
Cromer, 2015). Also, N-terminal extension and α-helix of ρ1 GABAC
receptors, which also belong to Cys-loop receptor family, are also required
for the normal assembly, trafficking, and cell surface expression of the recep-
tors (Wong, Tae, & Cromer, 2014). Previous studies determined the specific
amino acids located at the N-terminus that are important for the subunit
assembly for GABAARs, nAChRs (Kreienkamp, Maeda, Sine, & Taylor,
1995; Sumikawa, 1992; Sumikawa & Nishizaki, 1994; Tsetlin, Kuzmin,
& Kasheverov, 2011), and GlyRs (Kuhse, Laube, Magalei, & Betz, 1993;
Tsetlin et al., 2011). However, the assembly of 5-HT3Rs (Connolly &
Wafford, 2004), nAChRs (Avramopoulou, Mamalaki, & Tzartos, 2004),
GlyRs (Kuhse et al., 1993), but not GABAARs (Buller, Hastings, Kirkness,
& Fraser, 1994), depends on N-glycosylation status as all cys-loop channels
are glycoproteins. In addition, recent study showed that C-terminal
motifs in nAChRs may also be important for subunit assembly (Lo,
Botzolakis, Tang, & Macdonald, 2008). A highly conserved aspartate residue
at the boundary of the M3–M4 loop and the M4 domain is required for
8 Yan-Lin Fu et al.
GABAAR surface expression. Mutation of this residue interrupts the

GABAAR assembly (Lo et al., 2008).
Many chaperones play a critical role in the folding and assembly process of
the Cys-loop receptors. BiP (also known as Grp78), an Hsp70 family protein
in the ER, binds the hydrophobic patches of a protein. BiP associates more
strongly to misfolded mutant GABAA receptors harboring an A322D muta-
tion in the α1 subunit compared to the wild-type receptors (Di, Han, Wang,
Chance, & Mu, 2013), indicating that BiP acts early in the protein-folding
step by binding to the unfolded proteins. Consistently, BiP associates more
strongly with unassembled nAChRs subunits (Wanamaker et al., 2003). Cal-
nexin, an ER membrane-bound L-type lectin protein, checks the protein-
folding status by recognizing the specific glycan structures on the polypep-
tide. Increasing the calcium concentration in the ER using L-type calcium
channel blockers promotes the trafficking of misfolding-prone mutant α1
subunit harboring the D219N mutation of GABAA receptors by increasing
its interaction with calnexin (Han, Guan, et al., 2015). The binding of a chap-
erone to the unassembled or unfolded proteins stabilizes the folding interme-
diates and increases their success rate of proper folding and assembly. ERp57,
a protein disulfide isomerase, and calreticulin, an ER soluble homologue of
calnexin, associate with nAChRs subunits and may promote the subunit sta-
bility (Wanamaker et al., 2003; Wanamaker & Green, 2007). RIC-3 (resis-
tance to inhibitors of acetylcholinesterase 3) is an ER-localized
transmembrane protein and serves as a chaperone for 5-HT3Rs. It enhances
the folding, assembly, and ER exit of 5-HT3R (Castillo et al., 2006; Millar,
2008). However, RIC-3’s effect on nAChR is relatively unclear yet. Over-
expression of RIC-3 enhances the surface expression of α7-nAChRs but
reduces that of α4β2-nAChRs by inhibiting the trafficking of the receptors
onto cell surface (Castillo et al., 2005).
2.2 ERAD of the Cys-Loop Receptors

The folding and assembly process of the Cys-loop receptors are slow with a
high level of failure rate. The subunits that fail to assemble or fold are
degraded by ERAD (Olzmann et al., 2013; Smith et al., 2011; Vembar &
Brodsky, 2008). Cells utilize this classical pathway to recognize and ubiq-
uitinate unfolded proteins in the ER, extract them to cytosol, and deliver
them to protein degradation complex in cytosol called the proteasome. This
whole process is accomplished with the synchronized action of a series of
both the soluble and membrane ER chaperone proteins and the cytosolic
chaperones, which can be collectively called ERAD machinery.
ERAD influences the trafficking and cell surface expression levels of the
Cys-loop receptors. PLIC1 negatively regulates GABAAR degradation by
inhibiting ubiquitination (Tsetlin et al., 2011). PLIC1 and its paralog PLIC2
share an ubiquitin-like proteasome-binding domain. The association of this
domain with the ICD of GABAAR subunits slows their ubiquitination and
enhances their functional surface expression (Bedford et al., 2001; Luscher et
al., 2011; Wu, Wang, Zheleznyak, & Brown, 1999). Ring finger protein 34,
an E3 ubiquitin ligase, interacts with the ICD of the γ2 subunits of GABAARs
and reduces their expression by promoting the degradation of the receptors
through both lysosomal and proteasomal degradation pathways (Jin et al.,
2014). VCP is a type II member of AAA ATPase. Its prominent function
is to extract the ubiquitinated misfolded proteins in the ER to the cytosolic
proteasome for degradation. Inhibiting VCP using eeyarestatin I significantly
enhances the trafficking of both wild type and mutant α1 subunits harboring
the A322D mutation of GABAARs (Han, Di, Fu, & Mu, 2015). Further-
more, coapplication of suberanilohydroxamic acid, a proteostasis regulator,
with eeyarestatin I additively promotes the forward trafficking of misfolding-
prone α1 subunit harboring the A322D mutation of GABAARs and enhances
their functional cell surface expression (Di et al., 2013; Han, Di, et al., 2015).
For nAChRs, blockage of the proteasome function increases their assembly
in the ER, leading to their enhanced surface expression in cultured myotubes
(Christianson & Green, 2004; Wanamaker et al., 2003). Long-term inhibi-
tion of neuronal activity drastically enhances the ubiquitination level of
GABAARs and decreases their cell surface stability, whereas increasing the
level of neuronal activity decreases the ubiquitination of GABAARs and pro-
motes their stability on the plasma membrane. Neuron activity itself can reg-
ulate the potency of GABAAR-mediated effects through ubiquitination
(Saliba, Michels, Jacob, Pangalos, & Moss, 2007). Based on the above evi-
dence, modulating the ERAD rate is a promising way to enhance the surface
trafficking of Cys-loop receptors. It will be of great interest to elucidate the
ERAD machinery, such as critical E3 ligases and retrotranslocation channels,
for the Cys-loop receptors. A tandem mass spectrometry-based proteomics
approach identifies potential proteostasis network components for GABAA
receptors, enabling follow-up studies on their ERAD machinery (Wang,
Han, Tabib, Yates, & Mu, 2013).
In addition, other factors affect the trafficking of Cys-loop receptors
through different mechanisms. For nAChRs, “14-3-3” proteins promote
their trafficking through covering the COPI recognition signals and decreas-
ing the ER retention of the receptors (Mrowiec & Schwappach, 2006).
10 Yan-Lin Fu et al.
Phosphorylation of α4-nAChR subunits at a protein kinase A (PKA) con-

sensus sequence enhances the interaction of 14-3-3 proteins to the α4 sub-
units in the ER and promotes the assembly of complete α4β2-nAChRs
(Bermudez & Moroni, 2006).
3. TRAFFICKING OF CYS-LOOP RECEPTORS FROM ER TO

GOLGI AND TO PLASMA MEMBRANE
Golgi-specific DHHC (Asp-His-His-Cys) zinc finger protein
(GODZ), which belongs to DHHC family palmitoyl acyltransferase, specif-
ically palmitoylates the γ2 subunits of GABAARs. The palmitoylation is
required for targeting the receptors to inhibitory synapses. Knockdown of
GODZ causes the loss of GABAARs, thus leading to reduced GABAAR-
medicated miniature inhibitory synaptic current amplitude and frequency
(Fang et al., 2006; Keller et al., 2004; Luscher et al., 2011).
The brefeldin A-inhibited GDP/GTP exchange factor 2 (BIG2) inter-
acts with the ICD of β subunits of GABAARs. It enhances the trafficking of
β3-containing GABAARs by promoting the membrane budding of vesicles
from Golgi apparatus (Shin, Morinaga, Noda, & Nakayama, 2004).
The GABAAR-associated protein (GABARAP), which belongs to a
ubiquitin-like family protein in mammals and is enriched in Golgi and
other somatodendritic membrane compartments, facilitates the trafficking
of GABAARs in hippocampus neuron onto plasma membrane through
connecting the γ subunits with microtubules (Nymann-Andersen et al.,
2002; Wang, Bedford, Brandon, Moss, & Olsen, 1999). This GABARAP
effect also depends on the interaction of phospholipids to GABARAP
(Chen, Chang, Leil, & Olsen, 2007).
Phospholipase C-related catalytically inactive protein (PRIP) is inosi-
tol 1,4,5-trisphosphate-binding proteins. It may serve as a bridge protein
which connects γ2-containing GABAARs with GABARAP and promotes
the trafficking of the receptors. Interrupting the interaction of PRIP
with γ2 subunits of GABAARs decreases the surface expression level of
the receptors in both cultured cell lines and neurons (Mizokami et al.,
2007).
VILIP-1, a neuronal protein, enhances the surface expression of α4β2-
nAChRs in hippocampal neurons by promoting their exit from the trans-
Golgi network. This effect is activated by increasing intracellular Ca2+.
As a result, it is an important factor that mediates the neuron activity-
induced surface expression level change of the receptors (Zhao et al., 2009).
Protein Unc-50, which is found in nematode C. elegans but evolution-

arily conserved, is needed for the transport of specific types of nAChRs onto
the cell surface with unknown mechanism (Eimer et al., 2007).
4. PROTEIN QUALITY CONTROL OF CYS-LOOP

RECEPTORS ON THE PLASMA MEMBRANE
4.1 Clustering
Restriction of Cys-loop receptors to designated sites on the postsynaptic
plasma membrane is also tightly regulated. This process is important for
shaping the postsynaptic sites types and regulating the receptors-mediated
inhibitory or excitatory effect.
Gephyrin regulates the clustering of GlyRs and GABAARs. Gephyrin is
a scaffold protein that mainly accumulates in inhibitory GABAergic and
glycinergic synapses in various brain regions. Glycine receptors were the first
to be found depending on gephyrin to cluster at postsynaptic sites. Glycerine
β loop interacts with E domain of gephyrin. Gephyrin is also involved in the
intracellular trafficking and lateral movement of glycine receptors (Fritschy,
Harvey, & Schwarz, 2008). Gephyrin-induced clustering of GABAARs is
subunit-specific. Gephyrin knockout in mice diminishes the number of
α2, α3, β2/3, and γ2 subunits-containing synaptic sites, but not the α1-,
α5-containing synaptic sites without affecting the number of total inhibitory
synaptic sites (Jacob, Moss, & Jurd, 2008). This could be due to the fact that
there are only certain types of GABAAR subunits that can associate with
gephyrin. Gephyrin E domain associates with a 10-amino acid hydrophobic
motif within the intracellular domain of the GABAAR α2, α3, and gephyrin
also interacts weakly with γ2, and β3 subunits (Kneussel et al., 2001; Tretter
et al., 2008). Gepyrin is also important in regulating the neuron activity plas-
ticity. Long-term inhibitory potentiation of neurons in visual cortex
increases GABAAR-mediated inhibitory postsynaptic currents by inducing
the CaMKII phosphorylation of the GABAAR β3S383 residue and enhances
gephyrin clustering of β3-containing GABAARs. Phosphorylation-
dependent interaction of Pin, a peptidyl-prolyl isomerase, with gephyrin
modulates gephyrin interaction with glycine receptors and thus their cluster-
ing (Fritschy et al., 2008). Collybistin, a guanidine exchange factor activating
cdc-42, forms a binding complex with gephyrin. Knockout of collybistin in
mice does not affect glycinergic synaptic transmission but decreases
GABAergic synaptic transmission. Collybistin is not required for
gephyrin-mediated GlyR clustering but necessary for gephyrin-mediated
clustering of certain GABAARs at inhibitory postsynaptic sites (Chiou et al.,

2011; Papadopoulos & Soykan, 2011; Saiepour et al., 2010).
GABAARs clustering is also mediated by gephyrin-independent path-
way. Radixin, which belongs to ERM (ezrin, radixin, moesin) family pro-
teins, is known to mediate the clustering of α5-containing GABAARs.
Depleting of radixin or changing the radixin F-actin-binding motif in neu-
rons disrupts the formation of α5 subunit-containing GABAAR clustering
(Loebrich, Bahring, Katsuno, Tsukita, & Kneussel, 2006).
The clustering of nAChR in neuromuscular junction depends on agrin, a
heparan sulfate proteoglycan secreted by the presynaptic motor neuron, and
rapsyn, an intracellular scaffolding protein for Wnt signal. Agrin activates the
muscle-specific tyrosine kinase MuSK under the assist of rapsyn, resulting in
the phosphorylation of the β subunit of nAChRs and the local receptor clus-
tering at the nerve terminus (Lee et al., 2008; Piguet, Schreiter, Segura,
Vogel, & Hovius, 2011). 14-3-3 proteins, which, as mentioned above, assists
the assembly of α4 subunit-containing nAChRs, could also be involved
in the clustering of α3-containing nAChRs at synapses on the surfaces of
ganglionic neurons (Rosenberg et al., 2008).
4.2 Endocytosis
Surface receptors undergo consistent recycling between cell surface and
intracellular endosomes (Connolly, Kittler, et al., 1999; Connolly, Uren,
et al., 1999). The internalized receptors are either recycled back onto cell
surface through early and recycling endosomes or degraded through late
endosomes in the lysosomes. The regulation of the balance between the
internalization and recycling/degradation is also important in regulating
the availability of the surface expression of receptors and their mediated neu-
ronal excitatory or inhibitory effect.
For GABAARs, clathrin adaptor protein AP2 binds to the β and γ sub-
units, which in turn interact with clathrin, the GTPase dynamin, and other
binding partners and form the GABAARs containing clathrin-coated pits
(Kittler et al., 2000).
Many important factors regulate the endocytosis and recycling process of
Cys-loop receptors. For GABAARs, huntingtin-associated protein 1
(HAP1), which is an adaptor protein for kinesin superfamily motor protein
5 (KIF5) (Twelvetrees et al., 2010), inhibits the degradation of endocytosed
β1–3-containing GABAARs through the KIF5-dependent trafficking,
favors the receptor recycling, and increases their surface expression and
receptor-mediated inhibitory effect (Kittler et al., 2004). GABAAR-
interacting factor, GRIF-1, and its paralog TRAK1, also interact with KIF5.
They could be involved in the KIF5-dependent trafficking of GABAARs
(Luscher et al., 2011). BIG2, a guanine exchange factor mentioned earlier,
may also involved in the endocytic recycling of GABAARs (Luscher et al.,
2011). Inhibiting the lysosomal activity (Arancibia-Carcamo et al., 2009;
Kittler et al., 2004), preventing the trafficking of ubiquitinated γ2 sub-
unit-containing GABAARs to lysosomes (Arancibia-Carcamo et al.,
2009), or disrupting the ubiquitination at lysine residues in the intracellular
domain of the γ2 subunit (Arancibia-Carcamo et al., 2009) enhances the
accumulation of GABAARs at synapses.
Giant ankyrin-G, an extended fibrous polypeptide with 2600 residues, is
present in extrasynaptic microdomains on the somatodendritic surfaces of
hippocampal and cortical neurons and disrupts GABAAR endocytosis by
interacting with the GABARAP (Tseng, Jenkins, Tanaka, Mooney, &
Bennett, 2015). This process may be involved in the formation of
GABAAR-mediated circuitry in the cerebral cortex. Human mutations in
the giant ankyrin exon are linked to autism and severe cognitive dysfunction
(Iqbal et al., 2013).
The internalization rate also depends on the extracellular conformation
of the GABAARs and the presence of GABAAR agonists or antagonists.
GABAARs that contain the R43Q mutant γ2 subunits have an increased
clathrin-mediated and dynamin-dependent endocytosis, which can be
reduced by receptor antagonists. Furthermore, receptor agonists enhance
the endocytosis of both endogenous and recombinant wild-type GABAARs
in both cultured neurons and COS-7 cells (Chaumont et al., 2013).
The nAChR agonist, antagonist α-bungarotoxin, and cross-linking anti-
nAChR antibodies promote the internalization of nAChRs (Akaaboune,
Culican, Turney, & Lichtman, 1999; St John, 2009; St John & Gordon,
2001). This process depends on actin activation, but it still happens without
functional clathrin, caveolin, or dynamin (St John, 2009). Neuregulins 1β
(NRG1β), which belongs to EGF family, induces the rapid internalization
of α7-nAChRs from the surface of these neurons. Its effect relies on tyrosine
phosphorylation and activation of actin cytoskeleton.
5. OTHER REGULATIONS OF CYS-LOOP RECEPTORS

5.1 Lipid Involvement in Trafficking and Clustering
Phosphatidylethanolamine is required for the surface expression of
GABAARS in cultured neurons under the assistance of GRBARAP
(Chen & Olsen, 2007). Membrane sphingolipids and other lipids promote
the surface expression level of muscle-type nAChRs by affecting the biosyn-
thesis process in ER (Baier & Barrantes, 2007). Decreasing the membrane
cholesterol promotes the endocytosis of nAChRs and decreases their cell
expression level (Borroni et al., 2007). The underlying mechanism is that
membrane lipid serves as lipid rafts, which is required for the trafficking
and membrane stabilization of the receptors.
5.2 Phosphorylation Signaling in the Biogenesis of the

Receptors
Phosphorylation affects the Cys-loop receptor channel properties (Swope,
Moss, Raymond, & Huganir, 1999) and modulates the efficacy of recep-
tor-mediated effect by influencing their trafficking, endocytosis, and
recycling process. Neuronal activities that lead to the change in the intracel-
lular calcium signal regulate the activity of kinases and phosphatases,
resulting in the altered the biogenesis process and thus the surface expression
level of the receptors. For example, enhanced excitatory synaptic activities
activate phosphatase calcineurin through Ca2+/calmodulin pathway
followed by an increase in intracellular Ca2+ concentration. Activated cal-
cineurin dephosphorylates Ser327 in the GABAAR γ2 subunit, which leads
to the enhanced lateral mobility of the receptors, decreased cluster size of
GABAARs, and reduced GABAergic mIPSC (Bannai et al., 2009). Cal-
cineurin is also involved in downregulation of the α2-containing GABAAR
membrane expression level in prolonged seizures activity linked to benzo-
diazepine pharmacoresistance (Eckel, Szulc, Walker, & Kittler, 2015).
PRIP, as mentioned above, modulates the GABAAR surface expression
level by affecting the phosphorylation of the receptors. PRIP inactivates
the protein phosphatase 1α (PP1α), which dephosphorylates the GABAARs
phosphorylated by PKA. As a result, PRIP positively regulates the receptor
surface expression and receptor-mediated inhibition effect in hippocampal
neuron (Kittler & Moss, 2003; Terunuma et al., 2004; Yoshimura et al.,
2001).
Many neurosteroids or neurotrophic factors regulate the surface expres-
sion level of receptor by affecting the trafficking, endocytosis, and recycling
process. For example, neurosteroids promote the PKC phosphorylation of
α4 subunit Ser443 site, which enhances the insertion of the α4 subunit-
containing GABAARs and leads to increased tonic inhibition (Abramian
et al., 2010). However, the same neurosteroid does not have any effect on
the α1- and α5-containing GABAARs, which mediate the phasic inhibition
(Abramian et al., 2014, 2010; Comenencia-Ortiz, Moss, & Davies, 2014).

Brain-derived neurotrophic factor induces an initial fast, but short increases
in GABAARs-induced mIPSC through the phosphorylation of β3 Ser408/
409 by PKC and RACK-1 (receptor for activated c-kinase), which leads to
decreased endocytosis of the receptors. A following long-lasting down-
regulation of GABAARs-induced mIPSC is due to increased clathrin-
mediated endocytosis of GABAARs by dephosphorylating β3 subunits of
GABAARs (Jovanovic, Thomas, Kittler, Smart, & Moss, 2004).
Phosphorylation also affects the trafficking, endocytosis, and recycling
process of nAChRs and 5-HT3Rs. For example, inhibition of protein tyro-
sine kinases (PTKs) enhances α7-nAChR-mediated responses to ACh both
in oocytes and in hippocampal neurons. The application of a protein tyro-
sine phosphatase inhibitor leads to the depression of such responses. PTKs
promote the exocytosis of α7-containing nAChRs (Cho et al., 2005). Pro-
tein tyrosine phosphatases enhance the turnover rate of nAChRs and they
are required for proper recycling of nAChRs onto cell surface, whereas acti-
vation of the serine/threonine PKA slows the turnover of nAChRs
(Bruneau & Akaaboune, 2006; Qu, Moritz, & Huganir, 1990; Sava,
Barisone, Di Mauro, Fumagalli, & Sala, 2001; Xu & Salpeter, 1995).
PKC enhances the trafficking of the 5-HT3Rs onto the cell surface and this
effect is mediated through an actin-dependent pathway (Sun, Hu, Moradel,
Weight, & Zhang, 2003).
6. DISEASE AND THERAPY

Proteostasis deficiency of the Cys-loop receptors causes numerous dis-
eases. For example, deficient trafficking or enhanced internalization of
nAChRs is linked to AD, bipolar disease, and myasthenia gravis. Deficien-
cies in the folding and assembly of GABAARs lead to genetic epilepsy. One
emerging therapeutic strategy for such diseases is to adapt proteostasis net-
work to restore the function of trafficking-deficient receptors (Balch et al.,
2008). Two classes of small molecules are employed: proteostasis regulators
and pharmacological chaperones (Mu et al., 2008; Wang, Di, & Mu, 2014).
Proteostasis regulators operate on the proteostasis network components
to correct the folding and trafficking deficiency. For example, sub-
eranilohydroxamic acid, acting as a proteostasis regulator, enhances the
functional cell surface expression of the A322D α1 subunit of GABAARs
partially by increasing the BiP protein level and the interaction between
the calnexin and the mutant α1 subunit in the ER (Di et al., 2013).
Verapamil, an L-type calcium channel blocker, acting as a proteostasis reg-

ulator, enhances the function of the D219N α1 subunit of GABAARs by
promoting calnexin-assisted folding (Han, Guan, et al., 2015). Pharmaco-
logical chaperones directly bind the receptors, stabilize the assembly inter-
mediates, increase the successful rate of this process, and promote the surface
expression level of the receptors. Agonists and antagonists are candidates of
pharmacological chaperones for Cys-loop receptors. For example, nicotine
and its metabolite cotinine upregulate the surface expression level of
nAChRs by serving as pharmacological chaperones, promoting the stabili-
zation of the nAChRs in the ER (Fox, Moonschi, & Richards, 2015; Lester
et al., 2009). Similarly, GABAAR agonists and a competitive antagonist
bicuculline enhance the surface expression level of GABAARs by acting
as pharmacological chaperones. The application of brefeldin A, which
inhibits the formation of COPI-mediated transport vesicles from ER to
Golgi, antagonizes this effect (Eshaq et al., 2010). Combining proteostasis
regulators and pharmacological chaperones is expected to achieve better
therapeutic effects.
REFERENCES
Abramian, A. M., Comenencia-Ortiz, E., Modgil, A., Vien, T. N., Nakamura, Y.,
Moore, Y. E., et al. (2014). Neurosteroids promote phosphorylation and membrane
insertion of extrasynaptic GABAA receptors. Proceedings of the National Academy of Sciences
of the United States of America, 111, 7132–7137.
Abramian, A. M., Comenencia-Ortiz, E., Vithlani, M., Tretter, E. V., Sieghart, W.,
Davies, P. A., et al. (2010). Protein kinase C phosphorylation regulates membrane inser-
tion of GABAA receptor subtypes that mediate tonic inhibition. The Journal of Biological
Chemistry, 285, 41795–41805.
Akaaboune, M., Culican, S. M., Turney, S. G., & Lichtman, J. W. (1999). Rapid and revers-
ible effects of activity on acetylcholine receptor density at the neuromuscular junction in
vivo. Science, 286, 503–507.
Arancibia-Carcamo, I. L., Yuen, E. Y., Muir, J., Lumb, M. J., Michels, G., Saliba, R. S.,
et al. (2009). Ubiquitin-dependent lysosomal targeting of GABA(A) receptors regulates
neuronal inhibition. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of
America, 106, 17552–17557.
Avramopoulou, V., Mamalaki, A., & Tzartos, S. J. (2004). Soluble, oligomeric, and ligand-
binding extracellular domain of the human alpha7 acetylcholine receptor expressed in
yeast: Replacement of the hydrophobic cysteine loop by the hydrophilic loop of the
ACh-binding protein enhances protein solubility. The Journal of Biological Chemistry,
279, 38287–38293.
Baier, C. J., & Barrantes, F. J. (2007). Sphingolipids are necessary for nicotinic
acetylcholine receptor export in the early secretory pathway. Journal of Neurochemistry,
101, 1072–1084.
Balch, W. E., Morimoto, R. I., Dillin, A., & Kelly, J. W. (2008). Adapting proteostasis for
disease intervention. Science, 319, 916–919.
Bannai, H., Levi, S., Schweizer, C., Inoue, T., Launey, T., Racine, V., et al. (2009). Activ-
ity-dependent tuning of inhibitory neurotransmission based on GABAAR diffusion
dynamics. Neuron, 62, 670–682.
Bedford, F. K., Kittler, J. T., Muller, E., Thomas, P., Uren, J. M., Merlo, D., et al. (2001).
GABA(A) receptor cell surface number and subunit stability are regulated by the
ubiquitin-like protein Plic-1. Nature Neuroscience, 4, 908–916.
Bermudez, I., & Moroni, M. (2006). Phosphorylation and function of alpha4beta2 receptor.
Journal of Molecular Neuroscience, 30, 97–98.
Bocquet, N., Nury, H., Baaden, M., Le Poupon, C., Changeux, J. P., Delarue, M.,
et al. (2009). X-ray structure of a pentameric ligand-gated ion channel in an apparently
open conformation. Nature, 457, 111–114.
Borroni, V., Baier, C. J., Lang, T., Bonini, I., White, M. M., Garbus, I., et al. (2007). Cho-
lesterol depletion activates rapid internalization of submicron-sized acetylcholine recep-
tor domains at the cell membrane. Molecular Membrane Biology, 24, 1–15.
Boyd, G. W., Doward, A. I., Kirkness, E. F., Millar, N. S., & Connolly, C. N. (2003).
Cell surface expression of 5-hydroxytryptamine type 3 receptors is controlled by an
endoplasmic reticulum retention signal. The Journal of Biological Chemistry, 278,
27681–27687.
Bruneau, E. G., & Akaaboune, M. (2006). The dynamics of recycled acetylcholine receptors
at the neuromuscular junction in vivo. Development, 133, 4485–4493.
Buller, A. L., Hastings, G. A., Kirkness, E. F., & Fraser, C. M. (1994). Site-directed muta-
genesis of N-linked glycosylation sites on the gamma-aminobutyric acid type A receptor
alpha 1 subunit. Molecular Pharmacology, 46, 858–865.
Castillo, M., Mulet, J., Gutierrez, L. M., Ortiz, J. A., Castelan, F., Gerber, S., et al. (2005).
Dual role of the RIC-3 protein in trafficking of serotonin and nicotinic acetylcholine
receptors. The Journal of Biological Chemistry, 280, 27062–27068.
Castillo, M., Mulet, J., Gutierrez, L. M., Ortiz, J. A., Castelan, F., Gerber, S., et al. (2006).
Role of the RIC-3 protein in trafficking of serotonin and nicotinic acetylcholine recep-
tors. Journal of Molecular Neuroscience, 30, 153–156.
Chaumont, S., Andre, C., Perrais, D., Boue-Grabot, E., Taly, A., & Garret, M. (2013). Ago-
nist-dependent endocytosis of gamma-aminobutyric acid type A (GABAA) receptors
revealed by a gamma2(R43Q) epilepsy mutation. The Journal of Biological Chemistry,
288, 28254–28265.
Chen, Z. W., Chang, C. S., Leil, T. A., & Olsen, R. W. (2007). C-terminal modification is
required for GABARAP-mediated GABA(A) receptor trafficking. The Journal of Neuro-
science, 27, 6655–6663.
Chen, Z. W., & Olsen, R. W. (2007). GABAA receptor associated proteins: A key factor
regulating GABAA receptor function. Journal of Neurochemistry, 100, 279–294.
Chiou, T. T., Bonhomme, B., Jin, H., Miralles, C. P., Xiao, H., Fu, Z., et al. (2011). Dif-
ferential regulation of the postsynaptic clustering of gamma-aminobutyric acid type A
(GABAA) receptors by collybistin isoforms. The Journal of Biological Chemistry, 286,
22456–22468.
Cho, C. H., Song, W., Leitzell, K., Teo, E., Meleth, A. D., Quick, M. W., et al. (2005).
Rapid upregulation of alpha7 nicotinic acetylcholine receptors by tyrosine dephosphor-
ylation. The Journal of Neuroscience, 25, 3712–3723.
Christianson, J. C., & Green, W. N. (2004). Regulation of nicotinic receptor expression by
the ubiquitin-proteasome system. The EMBO Journal, 23, 4156–4165.
Comenencia-Ortiz, E., Moss, S. J., & Davies, P. A. (2014). Phosphorylation of GABAA
receptors influences receptor trafficking and neurosteroid actions. Psychopharmacology,
231, 3453–3465.
Connolly, C. N. (2008). Trafficking of 5-HT(3) and GABA(A) receptors (Review). Molec-
ular Membrane Biology, 25, 293–301.
Connolly, C. N., Kittler, J. T., Thomas, P., Uren, J. M., Brandon, N. J., Smart, T. G.,
et al. (1999). Cell surface stability of gamma-aminobutyric acid type A receptors. Depen-
dence on protein kinase C activity and subunit composition. The Journal of Biological
Chemistry, 274, 36565–36572.
Connolly, C. N., Krishek, B. J., McDonald, B. J., Smart, T. G., & Moss, S. J. (1996). Assem-
bly and cell surface expression of heteromeric and homomeric gamma-aminobutyric acid
type A receptors. The Journal of Biological Chemistry, 271, 89–96.
Connolly, C. N., Uren, J. M., Thomas, P., Gorrie, G. H., Gibson, A., Smart, T. G.,
et al. (1999). Subcellular localization and endocytosis of homomeric gamma2 subunit
splice variants of gamma-aminobutyric acid type A receptors. Molecular and Cellular Neu-
rosciences, 13, 259–271.
Connolly, C. N., & Wafford, K. A. (2004). The Cys-loop superfamily of ligand-gated ion
channels: The impact of receptor structure on function. Biochemical Society Transactions,
32, 529–534.
Di, X. J., Han, D. Y., Wang, Y. J., Chance, M. R., & Mu, T. W. (2013). SAHA enhances
Proteostasis of epilepsy-associated alpha1(A322D)beta2gamma2 GABA(A) receptors.
Chemistry & Biology, 20, 1456–1468.
Du, J., Lu, W., Wu, S., Cheng, Y., & Gouaux, E. (2015). Glycine receptor mechanism
elucidated by electron cryo-microscopy. Nature, 526, 224–229.
Eckel, R., Szulc, B., Walker, M. C., & Kittler, J. T. (2015). Activation of calcineurin under-
lies altered trafficking of alpha2 subunit containing GABAA receptors during prolonged
epileptiform activity. Neuropharmacology, 88, 82–90.
Eimer, S., Gottschalk, A., Hengartner, M., Horvitz, H. R., Richmond, J., Schafer, W. R.,
et al. (2007). Regulation of nicotinic receptor trafficking by the transmembrane Golgi
protein UNC-50. The EMBO Journal, 26, 4313–4323.
Engel, A. G., Ohno, K., & Sine, S. M. (1999). Congenital myasthenic syndromes: Recent
advances. Archives of Neurology, 56, 163–167.
Eshaq, R. S., Stahl, L. D., Stone, R., 2nd, Smith, S. S., Robinson, L. C., &
Leidenheimer, N. J. (2010). GABA acts as a ligand chaperone in the early secretory
pathway to promote cell surface expression of GABAA receptors. Brain Research,
1346, 1–13.
Fang, C., Deng, L., Keller, C. A., Fukata, M., Fukata, Y., Chen, G., et al. (2006). GODZ-
mediated palmitoylation of GABA(A) receptors is required for normal assembly
and function of GABAergic inhibitory synapses. The Journal of Neuroscience, 26,
12758–12768.
Fox, A. M., Moonschi, F. H., & Richards, C. I. (2015). The nicotine metabolite, cotinine,
alters the assembly and trafficking of a subset of nicotinic acetylcholine receptors. The
Journal of Biological Chemistry, 290, 24403–24412.
Fritschy, J. M., Harvey, R. J., & Schwarz, G. (2008). Gephyrin: Where do we stand, where
do we go? Trends in Neurosciences, 31, 257–264.
Frugier, G., Coussen, F., Giraud, M. F., Odessa, M. F., Emerit, M. B., Boue-Grabot, E.,
et al. (2007). A gamma 2(R43Q) mutation, linked to epilepsy in humans, alters GABAA
receptor assembly and modifies subunit composition on the cell surface. The Journal of
Biological Chemistry, 282, 3819–3828.
Gallagher, M. J., Ding, L., Maheshwari, A., & Macdonald, R. L. (2007). The GABA(A)
receptor alpha 1 subunit epilepsy mutation A322D inhibits transmembrane helix forma-
tion and causes proteasomal degradation. Proceedings of the National Academy of Sciences of
the United States of America, 104, 12999–13004.
Gorrie, G. H., Vallis, Y., Stephenson, A., Whitfield, J., Browning, B., Smart, T. G.,
et al. (1997). Assembly of GABAA receptors composed of alpha1 and beta2 subunits
in both cultured neurons and fibroblasts. The Journal of Neuroscience: The Official Journal
of the Society for Neuroscience, 17, 6587–6596.
Gotti, C., Clementi, F., Fornari, A., Gaimarri, A., Guiducci, S., Manfredi, I., et al. (2009).
Structural and functional diversity of native brain neuronal nicotinic receptors. Biochem-
ical Pharmacology, 78, 703–711.
Green, W. N., & Wanamaker, C. P. (1997). The role of the cystine loop in acetylcholine
receptor assembly. The Journal of Biological Chemistry, 272, 20945–20953.
Guerriero, C. J., & Brodsky, J. L. (2012). The delicate balance between secreted protein fold-
ing and endoplasmic reticulum-associated degradation in human physiology. Physiological
Reviews, 92, 537–576.
Han, D. Y., Di, X. J., Fu, Y. L., & Mu, T. W. (2015). Combining valosin-containing protein
(VCP) inhibition and suberanilohydroxamic acid (SAHA) treatment additively enhances
the folding, trafficking, and function of epilepsy-associated gamma-aminobutyric acid,
type A (GABAA) receptors. The Journal of Biological Chemistry, 290, 325–337.
Han, D. Y., Guan, B. J., Wang, Y. J., Hatzoglou, M., & Mu, T. W. (2015). L-type calcium
channel blockers enhance trafficking and function of epilepsy-associated alpha1(D219N)
subunits of GABA receptors. ACS Chemical Biology, 10, 2135–2148.
Hassaine, G., Deluz, C., Grasso, L., Wyss, R., Tol, M. B., Hovius, R., et al. (2014). X-ray
structure of the mouse serotonin 5-HT3 receptor. Nature, 512, 276–281.
Hibbs, R. E., & Gouaux, E. (2011). Principles of activation and permeation in an anion-
selective Cys-loop receptor. Nature, 474, 54–60.
Hilf, R. J., & Dutzler, R. (2008). X-ray structure of a prokaryotic pentameric ligand-gated
ion channel. Nature, 452, 375–379.
Hogg, R. C., Raggenbass, M., & Bertrand, D. (2003). Nicotinic acetylcholine receptors:
From structure to brain function. Reviews of Physiology, Biochemistry and Pharmacology,
147, 1–46.
Iqbal, Z., Vandeweyer, G., van der Voet, M., Waryah, A. M., Zahoor, M. Y.,
Besseling, J. A., et al. (2013). Homozygous and heterozygous disruptions of ANK3:
At the crossroads of neurodevelopmental and psychiatric disorders. Human Molecular
Genetics, 22, 1960–1970.
Jacob, T. C., Moss, S. J., & Jurd, R. (2008). GABA(A) receptor trafficking and its role in the
dynamic modulation of neuronal inhibition. Nature Reviews. Neuroscience, 9, 331–343.
Jin, H., Chiou, T. T., Serwanski, D. R., Miralles, C. P., Pinal, N., & De Blas, A. L. (2014).
Ring finger protein 34 (RNF34) interacts with and promotes gamma-aminobutyric acid
type-A receptor degradation via ubiquitination of the gamma2 subunit. The Journal of
Jovanovic, J. N., Thomas, P., Kittler, J. T., Smart, T. G., & Moss, S. J. (2004). Brain-derived
neurotrophic factor modulates fast synaptic inhibition by regulating GABA(A) receptor
phosphorylation, activity, and cell-surface stability. The Journal of Neuroscience, 24,
522–530.
Keller, C. A., Yuan, X., Panzanelli, P., Martin, M. L., Alldred, M., Sassoe-Pognetto, M.,
et al. (2004). The gamma2 subunit of GABA(A) receptors is a substrate for palmitoylation
by GODZ. The Journal of Neuroscience, 24, 5881–5891.
Kittler, J. T., Delmas, P., Jovanovic, J. N., Brown, D. A., Smart, T. G., & Moss, S. J. (2000).
Constitutive endocytosis of GABAA receptors by an association with the adaptin AP2
complex modulates inhibitory synaptic currents in hippocampal neurons. The Journal
of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience, 20, 7972–7977.
Kittler, J. T., & Moss, S. J. (2003). Modulation of GABAA receptor activity by phosphor-
ylation and receptor trafficking: Implications for the efficacy of synaptic inhibition. Cur-
rent Opinion in Neurobiology, 13, 341–347.
Kittler, J. T., Thomas, P., Tretter, V., Bogdanov, Y. D., Haucke, V., Smart, T. G.,
et al. (2004). Huntingtin-associated protein 1 regulates inhibitory synaptic transmission
by modulating gamma-aminobutyric acid type A receptor membrane trafficking. Proceed-
ings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 101, 12736–12741.
Kneussel, M., Brandstatter, J. H., Gasnier, B., Feng, G., Sanes, J. R., & Betz, H. (2001).
Gephyrin-independent clustering of postsynaptic GABA(A) receptor subtypes. Molecular
and Cellular Neurosciences, 17, 973–982.
Kofuji, P., Wang, J. B., Moss, S. J., Huganir, R. L., & Burt, D. R. (1991). Generation of two
forms of the gamma-aminobutyric acidA receptor gamma 2-subunit in mice by alterna-
tive splicing. Journal of Neurochemistry, 56, 713–715.
Kreienkamp, H. J., Maeda, R. K., Sine, S. M., & Taylor, P. (1995). Intersubunit contacts
governing assembly of the mammalian nicotinic acetylcholine receptor. Neuron, 14,
635–644.
Kuhse, J., Laube, B., Magalei, D., & Betz, H. (1993). Assembly of the inhibitory glycine
receptor: Identification of amino acid sequence motifs governing subunit stoichiometry.
Neuron, 11, 1049–1056.
Lee, Y., Rudell, J., Yechikhov, S., Taylor, R., Swope, S., & Ferns, M. (2008). Rapsyn car-
boxyl terminal domains mediate muscle specific kinase-induced phosphorylation of the
muscle acetylcholine receptor. Neuroscience, 153, 997–1007.
Lester, H. A., Dibas, M. I., Dahan, D. S., Leite, J. F., & Dougherty, D. A. (2004). Cys-loop
receptors: New twists and turns. Trends in Neurosciences, 27, 329–336.
Lester, H. A., Xiao, C., Srinivasan, R., Son, C. D., Miwa, J., Pantoja, R., et al. (2009).
Nicotine is a selective pharmacological chaperone of acetylcholine receptor number
and stoichiometry. Implications for drug discovery. The AAPS Journal, 11, 167–177.
Lo, W. Y., Botzolakis, E. J., Tang, X., & Macdonald, R. L. (2008). A conserved Cys-loop
receptor aspartate residue in the M3-M4 cytoplasmic loop is required for GABAA recep-
tor assembly. The Journal of Biological Chemistry, 283, 29740–29752.
Loebrich, S., Bahring, R., Katsuno, T., Tsukita, S., & Kneussel, M. (2006). Activated radixin
is essential for GABAA receptor alpha5 subunit anchoring at the actin cytoskeleton. The
EMBO Journal, 25, 987–999.
Luscher, B., Fuchs, T., & Kilpatrick, C. L. (2011). GABAA receptor trafficking-mediated
plasticity of inhibitory synapses. Neuron, 70, 385–409.
Macdonald, R. L., Kang, J. Q., & Gallagher, M. J. (2010). Mutations in GABAA
receptor subunits associated with genetic epilepsies. The Journal of Physiology, 588,
1861–1869.
Mazzaferro, S., Gasparri, F., New, K., Alcaino, C., Faundez, M., Iturriaga Vasquez, P.,
et al. (2014). Non-equivalent ligand selectivity of agonist sites in (alpha4beta2)2alpha4
nicotinic acetylcholine receptors: A key determinant of agonist efficacy. The Journal of
Millar, N. S. (2008). RIC-3: A nicotinic acetylcholine receptor chaperone. British Journal of
Pharmacology, 153(Suppl. 1), S177–S183.
Miller, P. S., & Aricescu, A. R. (2014). Crystal structure of a human GABAA receptor.
Nature, 512, 270–275.
Mizokami, A., Kanematsu, T., Ishibashi, H., Yamaguchi, T., Tanida, I., Takenaka, K.,
et al. (2007). Phospholipase C-related inactive protein is involved in trafficking of
gamma2 subunit-containing GABA(A) receptors to the cell surface. The Journal of Neu-
roscience, 27, 1692–1701.
Mrowiec, T., & Schwappach, B. (2006). 14-3-3 proteins in membrane protein transport.
Mu, T. W., Ong, D. S., Wang, Y. J., Balch, W. E., Yates, J. R., 3rd, Segatori, L., et al. (2008).
Chemical and biological approaches synergize to ameliorate protein-folding diseases.
Cell, 134, 769–781.
Nusser, Z., Hajos, N., Somogyi, P., & Mody, I. (1998). Increased number of synaptic GABA
(A) receptors underlies potentiation at hippocampal inhibitory synapses. Nature, 395,
172–177.
Nymann-Andersen, J., Wang, H., Chen, L., Kittler, J. T., Moss, S. J., & Olsen, R. W. (2002).
Subunit specificity and interaction domain between GABA(A) receptor-associated pro-
tein (GABARAP) and GABA(A) receptors. Journal of Neurochemistry, 80, 815–823.
Olzmann, J. A., Kopito, R. R., & Christianson, J. C. (2013). The mammalian endoplasmic
reticulum-associated degradation system. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology, 5,
a013185.
Palma, E., Bertrand, S., Binzoni, T., & Bertrand, D. (1996). Neuronal nicotinic alpha 7
receptor expressed in Xenopus oocytes presents five putative binding sites for meth-
yllycaconitine. The Journal of Physiology, 491(Pt. 1), 151–161.
Papadopoulos, T., & Soykan, T. (2011). The role of collybistin in gephyrin clustering at
inhibitory synapses: Facts and open questions. Frontiers in Cellular Neuroscience, 5, 11.
Piguet, J., Schreiter, C., Segura, J. M., Vogel, H., & Hovius, R. (2011). Acetylcholine recep-
tor organization in membrane domains in muscle cells: Evidence for rapsyn-independent
and rapsyn-dependent mechanisms. The Journal of Biological Chemistry, 286, 363–369.
Qu, Z. C., Moritz, E., & Huganir, R. L. (1990). Regulation of tyrosine phosphorylation of
the nicotinic acetylcholine receptor at the rat neuromuscular junction. Neuron, 4,
367–378.
Richards, C. I., Srinivasan, R., Xiao, C., Mackey, E. D., Miwa, J. M., & Lester, H. A. (2011).
Trafficking of alpha4* nicotinic receptors revealed by superecliptic phluorin: Effects of a
beta4 amyotrophic lateral sclerosis-associated mutation and chronic exposure to nicotine.
The Journal of Biological Chemistry, 286, 31241–31249.
Rosenberg, M. M., Yang, F., Giovanni, M., Mohn, J. L., Temburni, M. K., & Jacob, M. H.
(2008). Adenomatous polyposis coli plays a key role, in vivo, in coordinating assembly of
the neuronal nicotinic postsynaptic complex. Molecular and Cellular Neurosciences, 38,
138–152.
Saiepour, L., Fuchs, C., Patrizi, A., Sassoe-Pognetto, M., Harvey, R. J., & Harvey, K. (2010).
Complex role of collybistin and gephyrin in GABAA receptor clustering. The Journal of
Saliba, R. S., Michels, G., Jacob, T. C., Pangalos, M. N., & Moss, S. J. (2007). Activity-
dependent ubiquitination of GABA(A) receptors regulates their accumulation at synaptic
sites. The Journal of Neuroscience, 27, 13341–13351.
Sava, A., Barisone, I., Di Mauro, D., Fumagalli, G., & Sala, C. (2001). Modulation of
nicotinic acetylcholine receptor turnover by tyrosine phosphorylation in rat myotubes.
Neuroscience Letters, 313, 37–40.
Shin, H. W., Morinaga, N., Noda, M., & Nakayama, K. (2004). BIG2, a guanine nucleotide
exchange factor for ADP-ribosylation factors: Its localization to recycling endosomes and
implication in the endosome integrity. Molecular Biology of the Cell, 15, 5283–5294.
Smith, M. H., Ploegh, H. L., & Weissman, J. S. (2011). Road to ruin: Targeting proteins for
degradation in the endoplasmic reticulum. Science, 334, 1086–1090.
St John, P. A. (2009). Cellular trafficking of nicotinic acetylcholine receptors. Acta
Pharmacologica Sinica, 30, 656–662.
St John, P. A., & Gordon, H. (2001). Agonists cause endocytosis of nicotinic acetylcholine
receptors on cultured myotubes. Journal of Neurobiology, 49, 212–223.
Sumikawa, K. (1992). Sequences on the N-terminus of ACh receptor subunits regulate their
assembly. Brain Research. Molecular Brain Research, 13, 349–353.
Sumikawa, K., & Nishizaki, T. (1994). The amino acid residues 1–128 in the alpha subunit of
the nicotinic acetylcholine receptor contain assembly signals. Brain Research. Molecular
Brain Research, 25, 257–264.
Sun, H., Hu, X. Q., Moradel, E. M., Weight, F. F., & Zhang, L. (2003). Modulation of 5-
HT3 receptor-mediated response and trafficking by activation of protein kinase C. The
Journal of Biological Chemistry, 278, 34150–34157.
Another random document with
no related content on Scribd:
Hän ei kyennyt hillitsemään itseään, vaikka Aljoša oli läsnä,
ehkäpä ei tahtonutkaan hillitä itseänsä.
— Häntä pitäisi lyödä raipoilla, mestauslavalla, antaa pyövelin

lyödä, kaiken kansan nähden!…
Aljoša peräytyi ovea kohti.
— Voi Herra Jumala! — huudahti äkkiä Katerina Ivanovna lyöden

käsiään yhteen. — Ja hän sitten! Hän on saattanut olla niin
kunnoton, niin epäinhimillinen! Hänhän on kertonut tuolle elukalle
siitä, mitä tapahtui siellä, tuona kohtalokkaana, ikuisesti kirottuna,
kirottuna päivänä! »Toitte kauneutenne kaupaksi, rakas neiti!» Tuo
tietää sen! Teidän veljenne on roisto, Aleksei Fjodorovitš!
Aljoša tahtoi sanoa jotakin, mutta ei keksinyt ainoatakaan sanaa.

Hänen sydäntään kouristi kipeästi.
— Menkää, Aleksei Fjodorovitš! Minua hävettää, minua

kauhistuttaa! Huomenna… pyydän teitä polvillani, tulkaa huomenna.
Älkää tuomitko, antakaa anteeksi, minä en tiedä mitä vielä teen
itselleni!
Aljoša tuli kadulle aivan kuin huojuen. Hänenkin mielensä teki

itkeä niinkuin Katerina Ivanovna. Äkkiä hänet saavutti palvelustyttö.
— Neiti ei muistanut antaa teille tätä rouva Hohlakovin kirjettä, se

on ollut heillä päivällisestä asti.
Aljoša otti koneellisesti vastaan pikkuisen ruusunpunaisen

kirjekuoren ja pisti sen melkein tiedottomasti taskuunsa.
11.
Vielä yhdeltä meni maine
Kaupungista luostariin ei ollut kuin vähän yli virstan verran matkaa.

Aljoša lähti kiireesti kulkemaan tietä, joka tähän aikaan oli autio. Oli
jo melkein yö, kolmenkymmenen askelen päästä oli vaikea jo erottaa
esineitä. Puolimatkassa oli tienristeys. Tien risteyksessä näkyi
yksinäisen pajun juurella jokin haamu. Heti Aljošan saavuttua
tienristeykseen haamu hypähti paikaltaan, syöksyi häntä kohti ja
huusi hurjalla äänellä:
— Rahat tai henki!
— Sinäkö se oletkin, Mitja! — lausui ihmeissään Aljoša, joka

kuitenkin oli kovasti hätkähtänyt.
— Hahhahhaa! Etpä aavistanut? Ajattelin: missä odottaisin sinua?

Hänen kotinsako luona? Sieltä vie kolme tietä, ja mahdollisesti en
huomaisi lähtöäsi. Päätin viimein odottaa tässä, sillä tästä hän
kulkee välttämättömästi, muuta tietä luostariin ei ole. No, ilmoita
totuus, litistä minut kuin torakka… Mutta mikä sinua vaivaa?
— Ei mikään veljeni… minä muuten vain, pelästyksestä. Ah,

Dmitri! Äsken tuo isän veri (Aljoša rupesi itkemään, jo kauan oli
hänen mielensä tehnyt itkeä, ja nyt oli kuin jotakin olisi irtaantunut
hänen sielustaan). — Sinä olit vähällä tappaa hänet… kirosit hänet…
ja nyt… täällä… äsken juuri… sinä lasket leikkiä… rahat tai henki!
— No, mitä sitten? Onko se sopimatonta? Eikö se sovi

tilaisuuteen?
— Ei… minä vain…
— Odota. Katso yötä: näetkö, miten synkkä yö nyt on, millaiset

pilvet, miten on alkanut tuulla! Piilouduin tänne pajun alle, odotin
sinua ja ajattelin yht'äkkiä (siinä se Jumala on!): mitä maksaa enää
rehkiä, mitä odottaa? Tuossa on paju, huivi on, paita on, köyden saa
punotuksi aivan heti, kostuta sitä päällepäätteeksi hiukan, niin — et
enää ole maan päällä rasituksena etkä tuota häpeää alhaisella
olemassaolollasi! Samassa kuulin sinun tulevan, — Herra Jumala, oli
kuin äkkiä olisi lentänyt mieleeni jotakin: on siis olemassa ihminen,
jota minäkin rakastan, kas tuossa hän on, tuossa hän on, rakas
veliseni, jota rakastan kaikkein eniten maailmassa ja jota yksin vain
rakastan! Ja niin suurta rakkautta minä tunsin sinua kohtaan, niin
minä rakastin sinua tuolla hetkellä, että ajattelin: heittäydyn heti
hänen kaulaansa! Mutta tyhmä ajatus nousi mieleen: »huvitan häntä,
pelästytän». Ja minä huusin kuin mikäkin hölmö: »rahat»! Suo
anteeksi tyhmä temppu — se on pelkkää roskaa, mutta
sydämessäni… on oikeita ajatuksia… No, hitto vieköön, kerro
kuitenkin, miten siellä kävi. Mitä hän sanoi? Muserra minut, masenna
minut, älä sääli! Raivostuiko hän?
— Ei, ei niin… Siellä oli aivan toista, Mitja. Siellä… Tapasin siellä
äsken heidät molemmat.
— Kutka molemmat?
— Grušenjkan Katerina Ivanovnan luona.
Dmitri Fjodorovitš tyrmistyi.
— Mahdotonta! — huudahti hän. — Sinä hourailet! Grušenjka

hänen luonaan?
Aljoša kertoi kaikki, mitä hänelle oli tapahtunut siitä hetkestä
lähtien, kun hän oli astunut sisään Katerina Ivanovnan luo. Hän
kertoi noin kymmenen minuutin ajan. Ei voi sanoa, että hän olisi
kertonut sujuvasti ja kauniissa muodossa, mutta hänen
kertomuksensa oli selvä, hän mainitsi tärkeimmät sanat, tärkeimmät
liikkeet ja esitti selvästi, usein yhdellä ainoalla piirteellä, mitä hän itse
oli tuntenut. Veli Dmitri kuunteli ääneti, katseli peloittavan
liikkumattomana eteensä, mutta Aljošalle oli selvää, että hän oli
ymmärtänyt jo kaikki, oikein käsittänyt koko asian. Mutta mitä
pitemmälle kertomuksessa tultiin, sitä enemmän hänen kasvonsa
alkoivat näyttää ei synkiltä, vaan ikäänkuin uhkaavilta. Hän rypisti
kulmansa, puri hampaansa yhteen, hänen liikkumaton katseensa tuli
vielä liikkumattomammaksi, jäykemmäksi, peloittavammaksi… Sitä
yllättävämpää oli, että hänen kasvonsa, jotka siihen asti olivat olleet
vihaisen ja hurjan näköiset, muuttuivat yht'äkkiä käsittämättömän
nopeasti, yhteenpuristetut huulet erkanivat toisistaan ja Dmitri
Fjodorovitš purskahti äkkiä hillittömään ja teeskentelemättömään
nauruun. Hän suorastaan hytki naurusta eikä sentähden voinut
pitkään aikaan edes puhuakaan.
— Ei siis suudellut kättä! Eipä suudellutkaan, vaan juoksi pois! —

huuteli hän jonkinmoisen sairaalloisen innostuksen vallassa, —
voisipa sanoa julkean innostuksen vallassa, jos tuo innostus ei olisi
ollut niin sydämestä tulevaa. — Toinen siis huusi, että hän on tiikeri!
Tiikeri se onkin! Ettäkö hänet siis pitäisi viedä mestauslavalle? Niin,
niin, pitäisi kyllä, pitäisi, olen itse sitä mieltä, että pitäisi, olisi jo kauan
sitten pitänyt! Näetkö, veliseni, tulkoon vain mestauslava, mutta
täytyy sitä ennen tulla terveeksi. Minä ymmärrän julkeuden
kuningattaren, juuri tuommoinen hän on, tuossa
kädensuutelemisjutussa hänen koko olemuksensa laatu tuli näkyviin,
tuon hornan hengettären! Hän on kaikkien hornan hengettärien
kuningatar, mitä vain voi kuvitella maailmassa olevan! Tämä on
omalaatuista innostusta! Hän siis juoksi kotiin? Heti paikalla minä…
ah… Minä juoksen hänen luokseen! Aljoška, älä syytä minua,
minähän olen sitä mieltä, että kuoliaaksi kuristaminen olisi hänelle
liian lievä rangaistus…
— Entä Katerina Ivanovna! — huudahti Aljoša surullisesti.
— Hänetkin näen, näen kokonaan läpi hänetkin, näen niinkuin en

koskaan ennen ole nähnyt! Tämä on kerrassaan kaikkien neljän
maanosan löytö, toisin sanoen viiden! Semmoinen askel! Tämä on
aivan se sama Katenjka, instituutin tyttönen, joka ei pelännyt juosta
päättömän, raa'an upseerin luo sen ylevän aatteen ajamana, että
pelastaisi isänsä, ja antautui vaaraan tulla törkeästi loukatuksi! Mutta
se on meidän ylpeyttämme, se on uskaltamisen tarvetta, se on
kohtalon uhmailua, taisteluhaaste äärettömyydelle! Sanotko tuon
tädin hillinneen häntä? Tiedätkö, tuo täti itsekin on omavaltainen,
hänhän on tuon moskovalaisen kenraalinrouvan sisar, hän nosti
nenäänsä vielä enemmän kuin tämä, mutta hänen miehensä
todistettiin syylliseksi valtion varain kavallukseen, menetti kaikki,
sekä maatilansa että muun, ja ylpeä vaimo nöyrtyi äkkiä eikä ole sen
koommin kohonnut. Hän siis koetti hillitä Katjaa, mutta tämä ei
totellut. »Kaikki, mukamas, kykenen voittamaan, kaikki taipuu
tahtooni. Jos tahdon, niin lumoan Grušenjkankin» ja — hänhän uskoi
itseensä, korskeili itsensä edessä, kuka siis on syyllinen? Luuletko,
että hän tahallaan ensimmäiseksi suuteli Grušenjkan kättä ja että
hänellä oli viekkaita laskelmia? Ei, hän rakastui tosissaan, ihan
täydellä todella Grušenjkaan, taikka ei Grušenjkaan, vaan omaan
haaveeseensa, omaan hourekuvaansa, — sen tähden että se on
minun haaveeni, minun hourekuvani! Aljoša, ystäväiseni, kuinka
pelastuitkaan noiden tuollaisten käsistä? Läksitkö juoksemaan
pakoon koottuasi kouriisi viittasi liepeet? Hahhahhah!
— Veli, sinä et näytä ottaneen huomioon, kuinka olet loukannut

Katerina Ivanovnaa kertomalla Grušenjkalle tuosta päivästä, ja tämä
paukautti hänelle heti päin silmiä, että te itse »olette salaa käynyt
kavaljeerien luona kauneuttanne kaupittelemassa»! Veljeni, voiko
olla suurempaa loukkausta kuin tämä? — Aljošaa kiusasi kaikkein
enimmän se ajatus, että hänen veljensä tosiaankin iloitsi Katerina
Ivanovnan nöyryytyksestä, vaikka tämä tietysti oli mahdotonta.
— Pyh! — sanoi Dmitri Fjodorovitš rypistäen äkkiä kauheasti

kulmiaan ja lyöden kämmenellään otsaansa. Vasta nyt hän kiinnitti
huomionsa asiaan, vaikka Aljoša äsken oli kertonut kaikki, sekä
loukkauksen että Katerina Ivanovnan huudahduksen: »Teidän
veljenne on roisto!» — Niin, kenties tosiaankin olen kertonut
Grušenjkalle tuosta »kohtalokkaasta päivästä», niinkuin Katja sanoo.
Niin, se on totta, olen kertonut, nyt muistan! Se oli silloin Mokrojessa,
minä olin juovuksissa, mustalaistytöt lauloivat… Mutta minähän itkin
ääneen, itkin silloin itse, olin polvillani, rukoilin Katjan kuvan edessä,
ja Grušenjka ymmärsi sen. Hän ymmärsi silloin kaikki, minä muistan,
hän itki itsekin… Hitto vieköön! Saattoiko olla nyt toisin? Silloin itki ja
nyt… Nyt »tikari sydämeen»! Sellaista on akkaväen homma.
Hän loi silmänsä alas ja vaipui ajatuksiinsa.
— Niin, minä olen roisto! Kieltämättä roisto, — lausui hän äkkiä

synkällä äänellä. — Sama se, itkinkö vai enkö, roisto minä kuitenkin
olen! Kerro siellä, että otan tuon nimityksen vastaan, jos se voi
lohduttaa. No, riittää jo, hyvästi, ei maksa lörpötellä! Ei ole iloista.
Sinä menet omaa tietäsi ja minä omaani. Enkä enää tahdo
tavatakaan paitsi ehkä aivan viimeisellä hetkellä. Hyvästi, Aleksei! —
Hän puristi voimakkaasti Aljošan kättä ja lähti nopeasti, aivan kuin irti
riistäytyen, astelemaan kaupunkiin päin silmät yhä alas luotuina ja
päätään nostamatta. Aljoša katseli hänen jälkeensä eikä uskonut,
että hän saattoi mennä tuolla lailla menojaan aivan lopullisesti.
— Seis, Aleksei, vielä yksi tunnustus, yksistään sinulle! — sanoi

Dmitri Fjodorovitš kääntyen yht'äkkiä takaisin. — Katso minua, katso
tarkasti: näetkö, tässä, tässä näin, on tekeillä hirveän häpeällinen
teko. (Sanoessaan »tässä näin» Dmitri Fjodorovitš löi nyrkillään
rintaansa niin omituisen näköisenä, kuin häpeällinen teko olisi ollut
säilyssä juuri siinä, hänen rintansa päällä jossakin kohti, kenties
taskussa tai ommeltuna kaulasta riippumaan.) Tunnet minut jo:
roisto, tunnustettu roisto! Mutta tiedä, että mitä ikinä minä lienenkään
tehnyt ennen tai teen nyt ja vastedes, — niin ei mikään, ei mikään
ole roistomaisuudessa sen kunniattoman teon veroinen, jota nyt,
juuri tällä hetkellä, kannan täällä rinnassani, juuri tässä, tässä, ja
joka on toimimassa ja toteutumassa ja jonka minä täydellisesti
kykenen pysähdyttämään, voin pysähdyttää tai panna toimeen,
huomaa se! No, tiedä siis, että minä panen sen toimeen enkä sitä
estä täyttymästä. Kerroin äsken sinulle kaikki, mutta jätin tämän
kertomatta, koska ei edes minullakaan riittänyt siihen
häikäilemättömyyttä! Minä voin vielä pysähtyä; jos pysähdyn, niin
voin jo huomenna saada puolet menetetystä kunniastani takaisin,
mutta minä en pysähdy, minä toteutan tuuman täydellisesti, ja ole
sinä vastaisuudessa todistajana, että olen puhunut tästä edeltäpäin
ja tietoisesti! Hävitys ja pimeys! Ei ole syytä mitään selitellä,
aikanaan saat tietää. Haiseva takakatu ja hornan hengetär! Hyvästi!
Älä rukoile puolestani, en ole sen arvoinen eikä se ole
tarpeellistakaan, ei ollenkaan tarpeellista… en ole sen tarpeessa!
Pois!…
Ja hän poistui äkkiä, tällä kertaa lopullisesti. Aljoša lähti
kulkemaan luostaria kohti: »Kuinka, kuinka minä en enää koskaan
häntä näkisi, mitä hän puhuu?» pyöri hurjasti hänen päässään. »Jo
huomenna näen hänet ehdottomasti ja etsin hänet käsiini, etsin
vartavasten. Mitä hän oikein puhelee!…»
*****
Hän kiersi luostarin ympäri ja meni hongikon kautta suoraan

erakkomajalle. Siellä hänet päästettiin sisään, vaikka yleensä tähän
aikaan sinne ei ketään laskettu. Hänen sydämensä vapisi, kun hän
astui sisälle luostarinvanhimman kammioon: Miksi, miksi hän oli
lähtenyt täältä ulos, miksi luostarinvanhin oli lähettänyt hänet
»maailmaan»? Täällä oli hiljaisuus, täällä oli pyhäkkö, mutta siellä oli
rauhattomuus, siellä oli pimeys, jossa heti eksyi ja tuli
neuvottomaksi…
Kammiossa oli palvelijamunkki Porfiri ja pappismunkki Paísi, joka

koko päivän kuluessa oli aina tunnin kuluttua käynyt tiedustamassa
isä Zosiman terveydentilaa, joka, niinkuin Aljoša kauhukseen sai
kuulla, oli huonontumistaan huonontunut. Tavanmukainen
iltakeskustelukin munkkiveljien kanssa oli tällä kertaa täytynyt jättää
pois. Tavallisesti oli iltaisin joka päivä jumalanpalveluksen jälkeen
ennen nukkumaan menoa saapunut luostarin veljeskuntaa
luostarinvanhimman kammioon, ja jokainen tunnusti silloin toisten
kuullen sinä päivänä tekemänsä synnit, syntiset haaveensa,
ajatuksensa, kiusaukset, vieläpä riidatkin, mikäli semmoisia oli
sattunut. Jotkut ripittäytyivät polvillaan. Luostarinvanhin ratkaisi asiat,
sovitti, opetti, määräsi katumusharjoituksia, siunasi ja julisti
anteeksiannon. Juuri näitä veljien »ripittäytymisiä» vastaan
luostarinvanhinlaitoksen vastustajat taistelivat sanoen täten ripin
sakramenttia halvennettavan ja pitäen tätä miltei pyhyyden
herjaamisena, vaikka tämä oli kokonaan muuta. Hiippakunnan
korkeimmille viranomaisille esitettiin myös, että tämmöiset
ripittäytymiset, paitsi että ne eivät saavuttaneet hyvää tarkoitustaan,
todellisuudessa suuressa määrin johtivat syntiin ja kiusauksiin.
Monista veljistä oli muka vaikeata tulla luostarinvanhimman luo,
mutta he saapuivat vastoin tahtoaankin, koska kaikki muut siellä
kävivät, jotta heitä ei pidettäisi mieleltään ylpeinä ja kapinallisina.
Kerrottiin muutamien veljien iltatunnustuksille mennessään sopineen
keskenään aikaisemmin: »Minä, katsos, sanon vihastuneeni aamulla
sinuun, vakuuta sinä se todeksi», näin he tekivät, jotta olisi jotakin
sanottavaa ja vain päästäkseen asiasta. Aljoša tiesi, että näin oli
todellakin joskus tapahtunut. Hän tiesi myös, että veljien joukossa oli
niitäkin, jotka suuresti paheksuivat sitä, että oli tapana viedä
erakkojen omaisiltaankin saamat kirjeet ensin luostarinvanhimman
avattaviksi ja luettaviksi ennen niiden joutumista niiden saajille.
Tietysti edellytettiin, että tämän kaiken piti tapahtua vapaasta
tahdosta ja vilpittömästi, sydämen halusta, vapaaehtoisen
kuuliaisuuden ja sielun pelastukseksi tarkoitetun opetuksen nimessä,
mutta käytännössä, kuten nähtiin, se tapahtui usein kaikkea muuta
kuin vilpittömässä mielessä ja päinvastoin teeskennellen ja
epärehellisesti. Mutta vanhimmat ja kokeneimmat veljeskunnan
jäsenet pysyivät kannallaan ollen sitä mieltä, että »ken on vilpittömin
mielin astunut näiden seinien sisäpuolelle pelastuakseen, sille kaikki
tämä kuuliaisuus ja itsensä voittaminen on oleva ehdottomasti
suureksi hyödyksi pelastuksen tiellä; ken taas päinvastoin tuntee
olonsa vaivalloiseksi ja nurkuu, se ei oikeastaan olekaan munkki ja
on tullut suotta luostariin ja sellaisen paikka on maailmassa. Synniltä
ja perkeleeltä taas ei ole turvassa maailmassa eikä edes
temppelissä, joten siis ei ole mitään syytä hellitellä syntiä.»
— Hän on mennyt heikoksi, on enimmäkseen nukuksissa, —
ilmoitti Aljošalle kuiskaten isä Paísi siunattuaan häntä. — Häntä on
suorastaan vaikea saada hereille. Mutta ei tarvitsekaan herättää.
Noin viideksi minuutiksi hän heräsi, pyysi viemään siunauksensa
veljeskunnalle ja pyysi veljiä rukoilemaan yöllä hänen puolestaan.
Huomenna hän aikoo vielä kerran nauttia herranehtoollista. Hän
muisteli sinua; Aleksei, kysyi olitko mennyt, vastattiin, että olet
kaupungissa. »Siihen minä hänet siunasinkin, siellä on hänen
paikkansa eikä tällä kertaa täällä», — näin hän puhui sinusta.
Rakkaudella hän sinua muisteli ja huolehtien, ymmärrätkö, millainen
onni on tullut osaksesi? Mutta kuinka hän tuli määränneeksi sinut
joksikin ajaksi maailmaan? Hän siis näkee edeltäpäin jotakin sinun
kohtalostasi! Ymmärrä, Aleksei, että jos palaatkin maailmaan, niin
teet sen täyttääksesi luostarinvanhimpasi sinulle määräämän
kuuliaisuusvelvollisuuden etkä tyhjään kevytmielisyyteen ja
maailman iloihin…
Isä Paísi poistui. Että luostarinvanhin teki lähtöä, siitä Aljoša oli
varma, vaikka vanhus vielä saattoikin elää päivän tai kaksi. Aljoša
päätti lujasti ja hehkuvin mielin, että hän huolimatta antamastaan
lupauksesta tavata isää, Hohlakoveja, veljeä ja Katerina Ivanovnaa
— ei seuraavana päivänä ollenkaan poistu luostarista, vaan jää
vanhuksensa luo hänen kuolemaansa asti. Rakkaus leimahti hänen
sydämessään, ja hän moitti katkerasti itseään siitä, että oli hetkeksi
siellä, kaupungissa, suorastaan unohtanut sen, jonka hän oli jättänyt
luostariin kuolinvuoteelle ja jota hän kunnioitti enemmän kuin ketään
muuta koko maailmassa. Hän meni vanhuksen makuukomeroon,
lankesi polvilleen ja kumarsi nukkuvalle maahan asti. Vanhus nukkui
hiljaa ja liikkumatta, hengittäen tasaisesti ja tuskin huomattavasti.
Hänen kasvonsa olivat rauhalliset.
Palattuaan toiseen huoneeseen — samaan, jossa luostarinvanhin
aamulla oli ottanut vastaan vieraat, kävi Aljoša melkein riisumatta ja
ottaen jalastaan vain saappaat pitkälleen kovalle ja kapealle
nahkapäällyksiselle sohvalle, jolla hän oli jo pitkät ajat nukkunut joka
yö tuoden siihen vain tyynyn. Patjaa, josta hänen isänsä äskettäin oli
pitänyt ääntä, hän ei pitkään aikaan ollut muistanut levittää alleen.
Hän riisui vain lyhyen viittansa ja käytti sitä peitteenään. Mutta ennen
nukkumistaan hän heittäytyi polvilleen ja rukoili kauan. Palavassa
rukouksessaan hänellä ei ollut tapana pyytää Jumalaa tuomaan
selkenemistä hänen ahdistukseensa, vaan hän janosi vain riemuisaa
liikutusta, entistä sulotunnetta, joka aina oli tullut hänen sieluunsa,
kun hän oli kiittänyt ja ylistänyt Jumalaa, ja tuota kiitosta ja ylistystä
oli tavallisesti vain ollutkin hänen rukouksensa levolle käydessä. Tuo
riemu, joka tuli hänen sydämeensä, toi mukanaan kevyen ja
rauhallisen unen. Rukoillessaan taas nyt hän sattumalta tunsi
taskussaan sen ruusunpunaisen, pienen kirjeen, jonka hänelle oli
antanut hänen jälkeensä juossut Katerina Ivanovnan palvelijatar.
Hän tuli hämilleen, mutta rukoili rukouksensa loppuun. Sitten hän
jonkin verran empien avasi kirjeen. Siinä oli kirjelippu, jonka oli
allekirjoittanut Lise, — sama rouva Hohlakovin nuori tytär, joka
aamulla oli hänelle niin naureskellut luostarinvanhimman luona.
»Aleksei Fjodorovitš», kirjoitti hän, »kirjoitan teille kenenkään

tietämättä, salassa äidiltäkin, ja tiedän, miten pahasti se on tehty.
Minä en voi enää elää, jos en sano teille sitä, mikä on syntynyt
sydämessäni, mutta sitä ei pidä ennen aikojaan tietää kenenkään
muun kuin meidän kahden. Mutta kuinka sanon teille sen, mitä niin
tekee mieleni teille sanoa? Sanotaan, että paperi ei punastu, mutta
minä vakuutan teille, että se ei ole totta ja että paperi punastuu aivan
niinkuin minä itse nyt olen hirveän punastunut. Rakas Aljoša, minä
rakastan teitä, olen rakastanut jo lapsena, Moskovassa, kun te olitte
aivan toisenlainen kuin nyt, ja rakastan koko elämäni ajan. Sydämeni
on valinnut teidät, ja me yhdymme yhdeksi ja päätämme vanhoina
yhdessä elämämme. Mitä ikääni tulee, niin me odotamme niin kauan
kuin laissa on määrätty. Siihen mennessä minä ehdottomasti tulen
terveeksi, rupean kävelemään ja tanssimaan. Siitä ei voi olla mitään
epäilystä.
»Näettekö, kuinka olen joka kohdan miettinyt. Yhtä vain en osaa

ajatella: mitä te minusta ajattelette luettuanne tämän? Minä aina
nauran ja kujeilen ja äsken suututin teidät, mutta vakuutan teille, että
nyt juuri ennenkuin tartuin kynään minä rukoilin jumalanäidin kuvan
edessä ja rukoilen nytkin ja olen vähällä itkeä.
»Salaisuuteni on teille ilmaistu enkä tiedä, kuinka huomenna

tullessanne voin teihin katsahtaakaan. Ah, Aleksei Fjodorovitš, entä
jos taaskaan en voi hillitä itseäni, vaan, kuten hupsu, rupean
nauramaan niinkuin äskenkin teidät nähdessäni? Silloinhan te
pidätte minua pahana pilkantekijänä ettekä usko kirjettäni. Senvuoksi
pyydän teitä, rakkaani, jos te minua säälitte, että te huomenna
tullessanne sisälle ette katso minua liiaksi suoraan silmiin, sillä kun
katseemme kohtaavat toisensa, niin minä kenties pakostakin äkkiä
rupean nauramaan ja sitten te vielä kaiken lisäksi olette tuossa
pitkässä takissanne. Nytkin minä ihan kylmenen sitä ajatellessani ja
siksi älkää sisään tullessanne vähään aikaan ollenkaan katsoko
minuun, vaan katsokaa mammaa tai ikkunasta ulos…
»Kas nyt olen kirjoittanut teille rakkauskirjeen, voi hyvä Jumala,

mitä olenkaan tehnyt! Aljoša, älkää halveksiko minua, ja jos olen
tehnyt jotakin hyvin huonoa ja tuottanut teille surua, niin antakaa
minulle anteeksi. Nyt on minun kenties ainaiseksi menneen maineeni
salaisuus teidän käsissänne.
»Tänään minä ehdottomasti itken. Näkemiin, kamaliin näkemiin.
Lise.
»P. S. Aljoša, tulkaa te vain välttämättömästi, välttämättömästi,

välttämättömästi! Lise.»
Aljoša luki kirjeen ihmetellen, luki sen kahdesti, mietti ja alkoi äkkiä
hiljaa ja makeasti nauraa. Sitten hän vavahti, tämä nauru tuntui
hänestä synnilliseltä. Mutta hetken kuluttua hän alkoi taas nauraa
yhtä hiljaista ja onnellista naurua. Hitaasti hän pani kirjeen takaisin
kuoreen, teki ristinmerkin ja kävi makaamaan. Ahdistus oli äkkiä
kadonnut hänen mielestään. »Herra Jumala, armahda heitä kaikkia,
noita äskeisiä, suojele heitä onnettomia ja rauhattomia ja ohjaa
heidän kulkunsa. Sinulla on keinot: kaikilla noilla keinoillasi pelastat
heidät. Sinä olet rakkaus, Sinä lähetät myös kaikille ilon!» mutisi
Aljoša tehden ristinmerkkejä ja vaipuen levolliseen uneen.
TOINEN OSA
Neljäs kirja
Mullerruksia
1.
Isä Ferapont
Aljoša heräsi varhain aamulla, ennen päivän sarastusta.

Luostarinvanhin oli herännyt ja tunsi olevansa sangen heikko, mutta
halusi kuitenkin siirtyä vuoteesta nojatuoliin. Hän oli täydessä
tajussaan. Vaikka hänen kasvonsa olivatkin hyvin väsyneen
näköiset, niin ne olivat kirkkaat, miltei iloiset, ja hänen katseensa oli
iloinen, ystävällinen, kutsuva. — Kenties minäkin elän yli nyt alkavan
päivän, — sanoi hän Aljošalle. Sitten hän tahtoi heti ripittäytyä ja
nauttia herranehtoollisen. Hänen rippi-isänään oli aina isä Paísi. Kun
molemmat sakramentit oli suoritettu, alkoi viimeinen voitelu.
Pappismunkit kokoontuivat, kammio täyttyi vähitellen erakoista.
Sillävälin oli päivä valjennut. Alkoi saapua munkkeja luostaristakin.
Kun toimitus oli lopussa, tahtoi luostarinvanhin sanoa jäähyväiset
kaikille ja suuteli jokaista. Koska kammio oli ahdas, niin ensiksi
saapuneet poistuivat antaen tilaa toisille. Aljoša seisoi
luostarinvanhimman luona, joka uudelleen oli siirtynyt nojatuoliin.
Hän puhui ja opetti, minkä voi, ja vaikka hänen äänensä olikin
heikko, niin se kuitenkin oli vielä verraten luja. — Olen opettanut teitä
niin monta vuotta ja siis puhunut ääneen niin monta vuotta, että on
tullut tavaksi puhua ja puhuessani teitä opettaa ja se on mennyt niin
pitkälle, että minun melkein on ollut vaikeampi olla vaiti kuin puhua,
isät ja rakkaat veljet, vielä nytkin, kun olen ollut heikko, — laski hän
leikkiä katsellen liikutettuna ympärillään olevia. Aljoša muisti
myöhemmin yhtä ja toista siitä, mitä hän silloin sanoi. Mutta vaikka
hän puhuikin selvästi ääntäen eikä aivan matalalla äänellä, niin
hänen puheensa kuitenkin oli jokseenkin hajanaista. Hän puhui
monista asioista ja näytti tahtovan sanoa kaiken, puhua vielä kerran
ennen kuoleman hetkeä loppuun kaiken, mitä vielä oli jäänyt elämän
aikana puhumatta, eikä vain opettaakseen, vaan ikäänkuin hartaasti
haluten tehdä toisetkin osallisiksi ilostaan ja ihastuksestaan, purkaa
vielä kerran elämässä sydämensä sisällystä…
— Rakastakaa toisianne, isät — opetti vanhus (mikäli Aljoša

myöhemmin muisti). — Rakastakaa Herran kansaa. Emme me ole
pyhempiä kuin maailmassa-olijat sen vuoksi, että olemme tulleet
tänne ja sulkeutuneet näitten seinien sisälle, vaan päinvastoin
jokainen, joka on tänne tullut, on jo tänne tulollaan tunnustanut
olevansa huonompi kaikkia maailman lapsia, huonompi kaikkia ja
kaikkea maan päällä… Ja kuta kauemmin munkki sitten elää
seiniensä sisäpuolelle sulkeutuneena, sitä herkempi hänen pitää
myös olla tuntemaan tämä. Sillä päinvastaisessa tapauksessa
hänellä ei ollut mitään syytä tullakaan tänne. Mutta kun hän
tunnustaa, että hän ei ole ainoastaan huonompi kaikkia maailmassa,
vaan myös kaikkien ihmisten edessä syyllinen kaikkien ja kaiken
puolesta, kaikkien ihmisten syntien tähden, koko maailman ja
itsekunkin syntien, silloin vasta eristäytymisemme tarkoitus
saavutetaan. Sillä tietäkää, rakkaani, että joka ainoa meistä on
epäilemättä syyllinen kaikkien ja kaiken puolesta maan päällä, ei
vain maailman yhteiseen syntiin, vaan kukin omasta kohdastaan
kaikkien ihmisten ja jokaisen ihmisen puolesta täällä maan päällä.
Tämä tietoisuus on munkin elämän tien kruunu ja jokaisen ihmisen,
joka maan päällä vaeltaa. Sillä eivät munkit ole erikoisia ihmisiä,
vaan ainoastaan sellaisia, jommoisia kaikkien ihmisten maan päällä
tulisi olla. Silloin vasta sydämemme värähtäisikin rajattomaan, koko
maailman käsittävään ja loppumattomaan rakkauteen. Silloin
jokainen teistä kykenee saavuttamaan koko maailman rakkaudella ja
pesemään kyynelillään pois maailman synnit… Jokainen kulkekoon
oman sydämensä ympärillä, jokainen ripittäytyköön itselleen
lakkaamatta. Älkää pelätkö omaa syntiänne silloinkaan, kun olette
tulleet siitä tietoisiksi, kunhan vain kadutte, mutta älkää asetelko
Jumalalle ehtoja. Ja taas minä sanon teille: älkää ylpeilkö. Älkää
ylpeilkö pienten edessä, älkääkä ylpeilkö suurten edessä. Älkää
vihatko niitäkään, jotka hylkäävät teidät, jotka häpäisevät teitä, jotka
herjaavat ja panettelevat teitä. Älkää vihatko jumalankieltäjiä, vääriä
opettajia, materialisteja, olkaa vihaamatta ilkeitäkin heidän
joukossaan eikä vain hyviä, sillä heidän joukossaan on paljon hyviä
ja varsinkin meidän aikanamme. Sulkekaa heidät rukouksiinne näin:
pelasta, Jumala, kaikki, joilla ei ole ketään puolestaan rukoilijaa,
pelasta nekin, jotka eivät tahdo Sinua rukoilla. Ja lisätkää samalla:
en pyydä tätä ylpeydessäni, Herra, sillä itse olen huonompi kaikkia ja
kaikkea… Rakastakaa Herran kansaa, älkää antako tulokkaiden
hajoittaa laumaa, sillä jos te nukutte laiskuuteenne ja inhottavaan
ylpeyteenne ja varsinkin oman voitonpyyntöönne, niin tulee kaikilta
suunnilta niitä, jotka hajoittavat laumanne. Selittäkää kansalle
evankeliumia väsymättä… Älkää ottako lahjoja… Hopeata ja kultaa
älkää rakastako älkääkä pitäkö itsellänne… Uskokaa ja pitäkää
merkit. Kohottakaa lippu korkealle…
Vanhus puhui muuten katkonaisemmin kuin tässä on esitetty ja

kuin Aljoša sittemmin kirjoitti muistiin. Toisinaan hänen puheensa
aivan katkesi, niinkuin hän olisi koonnut voimia, hän läähätti, mutta
oli innoissaan. Häntä kuunneltiin liikutetuin mielin, vaikka monet
ihmettelivätkin hänen sanojaan ja pitivät niitä hämärinä…
Myöhemmin muisteltiin kaikkia näitä sanoja. Kun Aljoša joutui
hetkiseksi poistumaan kammiosta, niin häntä hämmästytti kammioon
ja sen läheisyyteen kerääntyneitten munkkien yleinen mieltenkuohu
ja odotus. Muutamissa tuo odotus oli melkein pelokasta, toisissa
juhlallista. Kaikki odottivat jotakin suurta tapahtuvan heti
luostarinvanhimman kuoltua. Tämä odotus oli eräältä kannalta
katsoen tavallaan kevytmielistäkin, mutta se oli vallannut kaikkein
ankarimmatkin vanhukset. Kaikkein ankarimmat olivat pappismunkki
Paísin kasvot. Aljoša oli poistunut kammiosta ainoastaan siksi, että
hänet oli salaa kutsunut ulos erään munkin välityksellä Rakitin, joka
oli tullut kaupungista ja tuonut Aljošalle omituisen kirjeen rouva
Hohlakovilta. Tämä ilmoitti Aljošalle erään uutisen, joka juuri nyt oli
sangen mielenkiintoinen. Seikka oli semmoinen, että edellisenä
päivänä oli niiden uskovaisten rahvaannaisten joukossa, jotka olivat
tulleet tervehtimään luostarinvanhinta ja saamaan hänen
siunauksensa, ollut eräs kaupungin ämmistä, Prohorovna,
aliupseerin leski. Hän oli kysynyt luostarinvanhimmalta, voiko hän
mainita kirkossa vainajana ja sielumessun toimittamista varten
poikansa Vasenjkan, joka oli mennyt virka-asioissa kauaksi
Siperiaan, Irkutskiin, ja josta hän jo vuoteen ei ollut saanut mitään
tietoja. Tähän oli luostarinvanhin antanut hänelle ankaran
vastauksen kieltäen niin tekemästä ja nimittäen sellaista
sielumessua noituuden kaltaiseksi toiminnaksi. Mutta sitten hän oli
antanut eukolle anteeksi tämän tietämättömyyden tähden ja lisännyt
»aivan kuin katsoen tulevaisuuden kirjaan» (niin kuuluivat sanat
rouva Hohlakovin kirjeessä) seuraavan lohdutuksen: »että hänen
poikansa Vasja on varmasti elossa ja että hän pian joko itse saapuu
äitinsä luo tai lähettää kirjeen ja että hän vain menisi kotiinsa ja
odottaisi. Ja kuinka kävi?» — lisäsi rouva Hohlakov innostuneesti. —
»Ennustus täyttyi aivan sananmukaisesti ja paremminkin.» Tuskin oli
ämmä palannut kotiin, kun hänelle annettiin Siperiasta tullut kirje,
joka jo oli häntä odottamassa. Mutta vielä enemmänkin: tässä
kirjeessä, joka oli kirjoitettu matkan varrelta Jekaterinburgista, Vasja
ilmoitti äidilleen olevansa itse tulossa Venäjälle erään virkamiehen
kanssa ja että noin kolmen viikon kuluttua tämän kirjeen
saapumisesta »hän toivoo saavansa syleillä äitiään». Rouva
Hohlakov pyysi hartaasti ja lämpimästi Aljošaa ilmoittamaan tämän
äskeisen »ihmeellisen ennustuksen» apotille ja koko veljeskunnalle:
»Sen pitää tulla kaikkien, kaikkien tietoon!» — huudahti hän
kirjeensä lopussa. Tämä kirje oli kirjoitettu kiireesti, ja kirjoittajan
mielenliikutus näkyi sen joka rivistä. Mutta Aljošan ei tarvinnut enää
ilmoittaa veljeskunnalle mitään, sillä jokainen tiesi jo kaikki: Rakitin
oli lähettäessään munkin häntä hakemaan antanut tälle sen lisäksi
tehtäväksi »nöyrimmästi ilmoittaa hänen korkea-arvoisuudelleen isä
Paísille, että hänellä, Rakitinilla, on hänelle eräs niin tärkeä asia, että
hän ei uskalla hetkeäkään lykätä sen ilmoittamista, samalla kuin hän
nöyrimmästi pyytää anteeksi rohkeuttaan». Koska munkki oli
ilmoittanut Rakitinin pyynnön isä Paísille aikaisemmin kuin Aljošalle,
niin Aljošan tehtäväksi paikalle tultua jäi vain kirjeen lukeminen ja
sen esittäminen heti isä Paísille vain jonkinmoisena
todistuskappaleena. Nytpä myös tämä juro ja epäluuloinen mies
luettuaan kulmakarvat rypyssä tiedon »ihmeestä» ei voinut täysin
hillitä eräänlaista sisällistä tunnettaan. Hänen silmänsä välähtivät,
huulet alkoivat äkkiä hymyillä arvokasta ja ymmärtävää hymyä.
— Mitä vielä saanemmekaan nähdä? — pääsi äkkiä aivan kuin

vahingossa hänen suustaan.
— Mitä vielä saanemmekaan nähdä, mitä vielä saanemmekaan

nähdä! — toistelivat munkit ylt'ympäri, mutta isä Paísi rypisti
uudelleen kulmiaan ja pyysi kaikkia olemaan edes toistaiseksi
kertomatta tästä ääneen kenellekään, »kunnes saadaan vielä
varmempi tieto, sillä maailmanlasten keskuudessa on paljon
kevytmielisyyttä, ja tämäkin asia on voinut tapahtua aivan
luonnollisella tavalla», lisäsi hän varovasti aivan kuin
rauhoittaakseen omaatuntoaan, mutta tuskin ollenkaan uskoen
tarpeelliseksi omaa varovaisuuttaan, minkä toisetkin varsin hyvin
huomasivat. Tietysti »ihme» tuli heti koko luostarin ja myös monien
luostariin jumalanpalvelukseen saapuneitten ulkopuolisten tietoon.
Kaikkein enimmän näytti tapahtunut ihme hämmästyttävän luostariin
poikennutta vaeltavaa munkkia, joka oli tullut kaukana pohjoisessa,
Obdorskissa, olevasta Pyhän Sylvesterin pikkuisesta luostarista.
Hän oli eilen tervehtinyt luostarinvanhinta seisoen rouva Hohlakovin
vieressä ja kysynyt häneltä terävästi osoittaen hänelle tuon rouvan
»parantunutta» tytärtä: — Kuinka teillä on rohkeutta tehdä tuollaisia
tekoja?
Asian laita oli niin, että hän nyt oli sangen ymmällä eikä oikein
tietänyt, mitä uskoisi. Eilen illalla hän oli käynyt vielä luostarissa isä
Ferapontin luona tämän erityisessä kammiossa mehiläistarhan
takana, ja häntä oli hämmästyttänyt tämä kohtaus, joka oli tehnyt
häneen oudon ja peloittavan vaikutuksen. Tämä vanhus, isä
Ferapont, oli se sama hyvin korkeassa iässä oleva munkki, suuri
paastooja ja vaikenija, jonka jo olemme maininneet luostarinvanhin
Zosiman vastustajana ja ennen kaikkea luostarinvanhinjärjestelmän
vastustajana, jota järjestelmää hän piti vahingollisena ja
kevytmielisenä uutuutena. Tämä oli sangen vaarallinen vastustaja,
vaikka hän, vaikenija kun oli, ei puhunut juuri kenellekään
sanaakaan. Vaarallinen hän oli etupäässä siksi, että monet
veljeskunnan jäsenet olivat täydelleen hänen puolellaan ja monet
luostarissa käyvistä maallikoista kunnioittivat häntä suurena
hurskauden harjoittajana ja uskon sankarina, siitä huolimatta, että
huomasivat hänet ehdottomasti kaistapäiseksi. Mutta se juuri
viehättikin, että hän ei ollut aivan täysijärkinen. Luostarinvanhin
Zosiman luona ei tämä isä Ferapont koskaan käynyt. Vaikka hän
elelikin erakkomajassa, niin häntä ei sanottavasti häiritty
erakkomajoissa noudatettavilla säännöillä juuri siksi, että hänen
käytöksensä ei ollut aivan täysijärkisen käytöstä. Hän oli
seitsemänkymmenenviiden vuoden ikäinen, jollei vanhempikin, ja
asui mehiläistarhan tuolla puolen muurin kulmauksessa vanhassa,
melkein lahonneessa puisessa kammiossa, joka oli siihen laitettu jo
ammoisina aikoina, jo viime vuosisadalla, eräälle niinikään suurelle
paastoojalle ja vaikenijalle, isä Joonaalle, joka oli elänyt sadan viiden
vuoden ikään ja jonka teoista vieläkin kierteli luostarissa ja sen
ympäristössä paljon mielenkiintoisia kertomuksia. Isä Ferapontin
onnistui saada aikaan se, että hänetkin vihdoin, noin seitsemän
vuotta sitten, sijoitettiin tuohon samaan yksinäiseen pikku kammioon,
joka yksinkertaisesti oli mökki, mutta muistutti suuresti kappelia, sillä
siinä oli erittäin paljon lahjaksi tuotuja pyhäinkuvia, joitten edessä
alati paloivat niinikään lahjoitetut lamput, ja näitä hoitelemaan ja
sytyttelemään olikin isä Ferapont oikeastaan sinne pantu. Hän söi,
kuten kerrottiin (ja se olikin totta), vain kaksi naulaa leipää kolmessa
päivässä, ei muuta. Leivän toi hänelle joka kolmas päivä
mehiläistarhassa asuva mehiläisten hoitaja, mutta tällekin häntä
palvelevalle mehiläisten hoitajalle isä Ferapont aniharvoin virkkoi
sanaakaan. Nämä neljä naulaa leipää ynnä sunnuntaisin tuotu
siunattu ehtoollisleipä, jonka igumeni säännöllisesti myöhemmän
jumalanpalveluksen jälkeen lähetti pyhälle miehelle, olivatkin hänen
ruokanaan koko viikon aikana. Vettä vaihdettiin hänen tuoppiinsa
joka päivä. Jumalanpalvelukseen hän saapui harvoin. Luostariin
tulleet rukoilijat näkivät hänen viettävän toisinaan koko päivän
rukoilussa, jolloin hän oli kaiken aikaa polvillaan eikä katsonut
ympärilleen. Jos hän joskus antautui heidän kanssaan puheisiin, niin
hän puhui lyhyesti, katkonaisesti, omituisesti ja melkein aina

PDF Ion Channels As Therapeutic Targets Part A 1St Edition Donev Ebook Full Chapter

Uploaded by

Document Information

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

PDF Ion Channels As Therapeutic Targets Part A 1St Edition Donev Ebook Full Chapter

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

Ion channels as therapeutic targets.

Part A 1st Edition Donev

Ion channels as therapeutic targets. Part B 1st Edition

Ion Channels in Health and Disease 1st Edition Geoffrey

Damage Associated Molecular Patterns in Human Diseases

Ion Transport Across Epithelial Tissues and Disease Ion

Unsteady Flow in Open Channels 1st Edition Jurjen A.

Therapeutic Vaccines as Novel Immunotherapy Biological

A Single Trapped Rydberg Ion Gerard Higgins

Helium Ion Microscopy 1st Edition Gregor Hlawacek

First edition 2016

Copyright © 2016 Elsevier Inc. All rights reserved.

For information on all Academic Press publications

Saurabh Kumar Jha

Ana Lúcia S. Rodrigues

Ion channels are pore-forming membrane proteins expressed in almost all

and voltage-gated calcium channels (Cav). Authors propose a “flow-

excitatory synaptic transmission in the brain through activation of

DR. ROSSEN DONEV

irritable bowel syndrome, chemotherapy-induced vomiting, and radiother-

M3 and M4 is important for modulating the trafficking of the receptors and

2. FOLDING, ASSEMBLY, AND DEGRADATION OF

subsequent trafficking to the Golgi and plasma membrane. This is evidenced

to reduced agonist-induced currents and amyotrophic lateral sclerosis

GABAAR surface expression. Mutation of this residue interrupts the

2.2 ERAD of the Cys-Loop Receptors

Phosphorylation of α4-nAChR subunits at a protein kinase A (PKA) con-

3. TRAFFICKING OF CYS-LOOP RECEPTORS FROM ER TO

Protein Unc-50, which is found in nematode C. elegans but evolution-

4. PROTEIN QUALITY CONTROL OF CYS-LOOP

clustering of certain GABAARs at inhibitory postsynaptic sites (Chiou et al.,

5. OTHER REGULATIONS OF CYS-LOOP RECEPTORS

5.2 Phosphorylation Signaling in the Biogenesis of the

(Abramian et al., 2014, 2010; Comenencia-Ortiz, Moss, & Davies, 2014).

6. DISEASE AND THERAPY

Verapamil, an L-type calcium channel blocker, acting as a proteostasis reg-

— Häntä pitäisi lyödä raipoilla, mestauslavalla, antaa pyövelin

Aljoša peräytyi ovea kohti.

— Voi Herra Jumala! — huudahti äkkiä Katerina Ivanovna lyöden

Aljoša tahtoi sanoa jotakin, mutta ei keksinyt ainoatakaan sanaa.

— Menkää, Aleksei Fjodorovitš! Minua hävettää, minua

Aljoša tuli kadulle aivan kuin huojuen. Hänenkin mielensä teki

— Neiti ei muistanut antaa teille tätä rouva Hohlakovin kirjettä, se

Aljoša otti koneellisesti vastaan pikkuisen ruusunpunaisen

Vielä yhdeltä meni maine

Kaupungista luostariin ei ollut kuin vähän yli virstan verran matkaa.

— Rahat tai henki!

— Sinäkö se oletkin, Mitja! — lausui ihmeissään Aljoša, joka

— Hahhahhaa! Etpä aavistanut? Ajattelin: missä odottaisin sinua?

— Ei mikään veljeni… minä muuten vain, pelästyksestä. Ah,

— No, mitä sitten? Onko se sopimatonta? Eikö se sovi

— Odota. Katso yötä: näetkö, miten synkkä yö nyt on, millaiset

— Grušenjkan Katerina Ivanovnan luona.

Dmitri Fjodorovitš tyrmistyi.

— Mahdotonta! — huudahti hän. — Sinä hourailet! Grušenjka

— Ei siis suudellut kättä! Eipä suudellutkaan, vaan juoksi pois! —

— Entä Katerina Ivanovna! — huudahti Aljoša surullisesti.

— Hänetkin näen, näen kokonaan läpi hänetkin, näen niinkuin en

— Veli, sinä et näytä ottaneen huomioon, kuinka olet loukannut

— Pyh! — sanoi Dmitri Fjodorovitš rypistäen äkkiä kauheasti

Hän loi silmänsä alas ja vaipui ajatuksiinsa.

— Niin, minä olen roisto! Kieltämättä roisto, — lausui hän äkkiä

— Seis, Aleksei, vielä yksi tunnustus, yksistään sinulle! — sanoi